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In situ synthesis and unidirectional insertion of membrane proteins in liposome-immobilized silica stationary phase for rapid preparation of microaffinity chromatography

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Acta Pharmaceutica Sinica B 2022年第9期12卷 3682-3693页

作者： Yanqiu Gu Rong Wang Panpan Chen Shengnan Li Xinyi Chai Chun Chen Yue Liu Yan Cao Diya Lv zhanying Hong Zhenyu Zhu Yifeng Chai Yongfang Yuan Xiaofei Chen Department of Pharmacy Shanghai Ninth People's HospitalShanghai Jiao Tong UniversitySchool of MedicineShanghai 201999China School of Pharmacy Naval Medical University(Second Military Medical University)Shanghai 200433China Shanghai Key Laboratory for Pharmaceutical Metabolite Research Shanghai 200433China

Cell membrane affinity chromatography has been widely applied in membrane protein(MP)-targeted drug screening and interaction ***,in current methods,the MP sources are derived from cell lines or recombinant protein expression,which are time-consuming for cell culture or purification,and also difficult to ensure the purity and consistent orientation of MPs in the chromatographic stationary *** this study,a novel in situ synthesis membrane protein affinity chromatography(iSMAC)method was developed utilizing cell-free protein expression(CFE)and covalent immobilized affinity chromatography,which achieved efficient in situ synthesis and unidirectional insertion of MPs into liposomes in the stationary *** advantages of iSMAC are:1)There is no need to culture cells or prepare recombinant proteins;2)Specific and purified MPs with stable and controllable content can be obtained within 2 h;3)MPs maintain the transmembrane structure and a consistent orientation in the chromatographic stationary phase;4)The flexible and personalized construction of cDNAs makes it possible to analyze drug binding *** was successfully applied to screen PDGFRβinhibitors from Salvia miltiorrhiza and Schisandra *** columns prepared by in-situ synthesis maintain satisfactory analysis activity within 72 *** new PDGFRβinhibitors,salvianolic acid B and gomisin D,were screened out with KD values of 13.44 and 7.39μmol/L,*** vitro experiments confirmed that the two compounds decreasedα-SMA and collagen Ⅰ mRNA levels raised by TGF-βin HSC-T6 cells through regulating the phosphorylation of p38,AKT and *** vivo,Sal B could also attenuate CCl_(4)-induced liver fibrosis by downregulating PDGFRβdownstream related protein *** iSMAC method can be applied to other general MPs,and provides a practical approach for the rapid preparation of MP-immobilized or other biological solid-phase materials.

关键词： Affinity chromatography In situ synthesis of membrane proteins Unidirectional insertion PDGFRβ Drug screening Ligand–protein interaction Antihepatic fibrosis

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新时代职业教育高质量发展路径探析

中国职业技术教育 2022年第10期38卷 5-11页

作者：任占营教育部职业教育与成人教育司北京100816

高质量发展是当前和今后一个时期各项事业宏观调控和制定政策的总要求。作为经济社会发展的重要支撑,职业教育肩负着培养多样化人才、传承技术技能、促进就业创业的重要职责,必须要遵循这一要求,提质培优、增值赋能、以质图强。从经济... 详细信息

高质量发展是当前和今后一个时期各项事业宏观调控和制定政策的总要求。作为经济社会发展的重要支撑,职业教育肩负着培养多样化人才、传承技术技能、促进就业创业的重要职责,必须要遵循这一要求,提质培优、增值赋能、以质图强。从经济发展全球化、信息技术智能化、人口结构老龄化、职业教育终身化、生源结构多样化等五个视角分析了职业教育面临的现实挑战,从技术技能人才培养、治理体系治理能力变革和利益群体满意度提升等三个维度诠释了职业教育高质量发展的内在逻辑,从立德树人、体系建设、内部治理、数字化升级、国际品牌打造等五方面提出构建职业教育高质量发展的实施路径,提出了发展动力、发展模式、办学状态、评价取向、人才培养、社会服务等六项职业教育高质量发展的效验表征。

关键词：职业教育高质量发展实施路径

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论当代中国利益团体的形成与发展

社会主义研究 2002年第3期 52-54页

作者：杨占营海军指挥学院政治指挥系江苏南京210016

随着现代化进程的不断深入 ,中国社会的组织结构正在发生巨大变化 ,考察这一变化无疑有着重要的现实意义。本文在评述了理论界对当前我国利益团体分析的若干观点之后 ,着重阐述了中国利益团体的产生及现状 ,强调了中国利益团体在现阶段... 详细信息

随着现代化进程的不断深入 ,中国社会的组织结构正在发生巨大变化 ,考察这一变化无疑有着重要的现实意义。本文在评述了理论界对当前我国利益团体分析的若干观点之后 ,着重阐述了中国利益团体的产生及现状 ,强调了中国利益团体在现阶段的主要特征 ,并以积极的视角展望了其前景。

关键词：利益团体现代化公民社会法团主义制度供给自组织二元化资源市场化

Discovery of a Potent Botulinum Neurotoxin A Inhibitor ZM299 with Effective Protections in Botulism Mice

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Chinese Journal of Chemistry 2022年第3期40卷 357-364页

作者： Jianxin Wang Yuelin Wu Deyan Luo Chunlin Zhuang Nianzhi Ning Yanming Zhang Zhili He Jie Gao zhanying Hong Xiguo Xv Wannian Zhang Tao Li Zhenyuan Miao Hui Wang State Key Laboratory of Pathogens and Biosecurity Beijing Institute of Microbiology and EpidemiologyBeijing 100071China School of Pharmacy Second Military Medical University325 Guohe RoadShanghai 200433China

Botulinum neurotoxins serotype A(BoNT/A)is the deadliest toxins known to humans and the"Category A"agent for *** the past 20 years,significant efforts have been put forth to develop effective inhibitors of BoNT/***,few identified inhibitors possess noteworthy efficacy against BoNT/A in ***,we performed a high-throughput virtual screening based on the structure-based docking simulations and found a novel potent scaffold 2-thionicotinate that inhibits the BoNT/A light chain(LC).We then synthesized and optimized a novel series of 2-thionicotinate derivatives and comprehensively evaluated their activity against BoNT/A in vitro and in *** optimized compound ZM299 effectively exhibits anti-BoNT/A activity in primary neurons and displayed remarkably therapeutic efficacy against BoNT/A in vivo,which could raise the survival rate of intoxicated mice to 100%(12/12)after lethal doses of BoNT/A *** findings demonstrate that 2-thionicotinates is a promising scaffold for producing more effective anti-BoNT/A analogs,and compound ZM299 is worthy of further preclinical evaluation as a drug candidate for the treatment of botulism.

关键词： Botulinum Neurotoxin A Botulism Virtual screening Drug design Inhibitors

Prediction of Ship Roll Based on Second Diagonal Recurrent Neural Network

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控制工程期刊（中英文版） 2013年第3期3卷 106-110页

作者： Liang Xu zhanying Li Yuzhi Song Yanping Wang Hull Workshop COSCO (Dalian) ship yard Co. Ltd Dalian 116113 China School of Electronic Engineering and Automation City Institute Dalian University of Technology Dalian 116600 China Det Norske Veritas (China) Co. Ltd. Dalian Branch 116011 China

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政治权威与法律权威和谐论

社会主义研究 2007年第4期 110-113页

作者：吴占英中南民族大学

法律的生命在于它的实现,法律权威的实现过程中遇到的首要命题,就是政治权威与法律权威是否和谐的问题。当前我国政治权威与法律权威和谐问题研究的方向应该在于:分析现实中二者的不和谐因素,排除这些不一致的因素,由不和谐走向和谐。... 详细信息

法律的生命在于它的实现,法律权威的实现过程中遇到的首要命题,就是政治权威与法律权威是否和谐的问题。当前我国政治权威与法律权威和谐问题研究的方向应该在于:分析现实中二者的不和谐因素,排除这些不一致的因素,由不和谐走向和谐。本文通过对党的权威与法律权威、党的政策的权威与法律权威的比较分析,认为党的权威与法律权威不能用谁大谁小一言概之,作为法治权威的构成要素,二者既要结构合理,又要功能互惠;一方面要明确政策对立法的指导作用,另一方面在法律的实施中,政策的指导作用有一定的法律限度。

关键词：政党权威法律权威法治政策

职业教育提质培优的现实意义、实践方略和效验表征

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中国职业技术教育 2020年第33期36卷 5-9页

作者：任占营教育部职业教育与成人教育司北京100816

产业转型升级、社会和谐稳定、人民生活富足迫切需要加快构建中国特色现代职业教育体系,整体推进职业教育提质培优、增值赋能、以质图强。在深入分析职业教育提质培优现实意义的前提下,从内涵发展、品牌培育、人才培养、服务贡献等维度... 详细信息

产业转型升级、社会和谐稳定、人民生活富足迫切需要加快构建中国特色现代职业教育体系,整体推进职业教育提质培优、增值赋能、以质图强。在深入分析职业教育提质培优现实意义的前提下,从内涵发展、品牌培育、人才培养、服务贡献等维度明确了实践方略;从体系完备性、制度健全性、标准完善性、条件充足性、评价科学性等方面提出了效验表征,对推动职业教育战线落实《职业教育提质培优行动计划(2020—2023年)》具有一定指导意义。

关键词：职业教育提质培优增值赋能

油桐叶肉细胞原生质体分离及瞬时转化体系的建立

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林业科学 2018年第1期54卷 46-53页

作者：谷战英杨若楠陈昊中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004

【目的】探索油桐叶肉细胞原生质体分离的最适条件,建立油桐原生质体的遗传转化体系,使在油桐体内研究自身基因的功能成为可能。【方法】以油桐成熟叶片和组培苗幼叶为材料,通过酶解法成功分离得到油桐叶肉细胞的原生质体并确定最适分... 详细信息

【目的】探索油桐叶肉细胞原生质体分离的最适条件,建立油桐原生质体的遗传转化体系,使在油桐体内研究自身基因的功能成为可能。【方法】以油桐成熟叶片和组培苗幼叶为材料,通过酶解法成功分离得到油桐叶肉细胞的原生质体并确定最适分离条件。在此基础上,以获得的原生质体为受体系统,建立PEG介导的油桐原生质体基因转化方法。【结果】原生质体分离结果表明,酶解时间对原生质体产量和活性的影响最大,其次是纤维素酶浓度,而离析酶浓度和甘露醇浓度对原生质体产量和活性的影响较小。以成熟叶片为材料分离原生质体的最适条件为纤维素酶浓度1.5%、离析酶浓度1%、甘露醇浓度0.6 mol·L-1、酶解时间12 h,以组培苗幼叶为材料分离原生质体的最适条件为纤维素酶浓度2%、离析酶浓度1%、甘露醇浓度0.7 mol·L-1、酶解时间6 h。为了建立油桐原生质体的瞬时转化体系,通过PEG介导法将拟南芥MGT6基因导入到油桐原生质体中,结果发现MGT6蛋白定位于原生质体质膜,与之前报道的研究结果一致,这表明本研究建立的油桐原生质体转化方法可成功将外源基因导入油桐原生质体并使其表达。【结论】建立油桐成熟叶片和组培苗幼叶叶肉细胞原生质体的高效分离方法,综合考虑取材的便利性和对后续原生质体培养的影响,建议以组培苗幼叶为材料分离原生质体,分离条件为纤维素酶浓度2%、离析酶浓度1%、甘露醇浓度0.7 mol·L-1、酶解时间6 h。在分离得到油桐叶肉细胞原生质体的基础上,本研究建立的PEG介导的原生质体遗传转化方法能以油桐叶肉细胞原生质体为受体,高效地将外源基因导入其中并使外源基因表达。本研究结果不仅可促进油桐基础研究的发展,在通过细胞融合和基因工程手段进行油桐种质创新方面也具有重要意义。

关键词：油桐原生质体制备遗传转化亚细胞定位

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超Liouville模型精确解

高能物理与核物理 2000年第2期24卷 91-97页

作者：杨战营赵柳甄翼西北大学现代物理研究所西安 710069

运用Leznov -Saveliev代数分析方法和Drinfeld -Sokolov构造分别给出超协变形式和分量形式超Liouville模型精确解 .

关键词：超Liouville模型超代数共形场论量子化统计力学超弦理论费米面求和 Leznov-Saneliev代数分析法李代数