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LwaCas13a蛋白的表达纯化与活性分析

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中国畜牧兽医 2023年第7期50卷 2941-2950页

作者：豆玲李泽轩贾訸潇张彩云左富江李婷谢元江段晓雷甘肃省动物疫病预防控制中心兰州730046 遵义医科大学检验医学院遵义563000 南昌大学玛丽女王学院南昌330038

【目的】获得高纯度、高浓度、优良反式切割活性的韦德纤毛菌(Leptotrichia wadei)的Cas13a(LwaCas13a)蛋白,为研发基于CRISPR-LwaCas13a系统的动物病毒RNA检测新方法提供重要的生物学工具。【方法】通过PCR、双酶切与连接反应构建pET15... 详细信息

【目的】获得高纯度、高浓度、优良反式切割活性的韦德纤毛菌(Leptotrichia wadei)的Cas13a(LwaCas13a)蛋白,为研发基于CRISPR-LwaCas13a系统的动物病毒RNA检测新方法提供重要的生物学工具。【方法】通过PCR、双酶切与连接反应构建pET15b-SUMO-LwaCas13a重组质粒,并进行原核诱导表达与条件优化;发酵100 mL大肠杆菌BL21(DE3)菌诱导表达LwaCas13a蛋白后进行纯化,纯化后利用超滤法浓缩蛋白,使用BCA法检测蛋白浓度。将LwaCas13a蛋白、CRISPR RNA(CrRNA)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)靶标RNA及荧光标记单链RNA(ssRNA)探针共孵育,利用全波长荧光分析仪检测CRISPR-LwaCas13a反式切割活性,与商业化Cas13a蛋白进行活性对比,并优化LwaCas13a与CrRNA最佳结合比例。【结果】成功构建重组质粒pET15b-SUMO-LwaCas13a;LwaCas13a重组蛋白的最佳诱导表达条件为0.4 mmol/L IPTG、18℃诱导16 h;经过纯化最终获得95%纯度、7.5 mg/mL浓度的LwaCas13a蛋白。荧光检测结果显示,LwaCas13a蛋白具有明显的反式切割活性,为商业化Cas13a蛋白活性的1.25倍,且LwaCas13a蛋白与CrRNA的最佳结合比例为1∶2。【结论】试验成功表达纯化出高纯度、高浓度的LwaCas13a重组蛋白,其反式切割活性优于商业化Cas13a蛋白,并明确了该蛋白与CrRNA的最佳配比,为利用LwaCas13a进行动物病毒RNA检测新技术的研发提供了依据。

关键词： LwaCas13a蛋白原核表达 SUMO酶切反式切割活性

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驾驶员在环的爆胎车辆主动安全控制研究

石家庄铁道大学学报（自然科学版） 2023年第2期36卷 89-95页

作者：韩泽璇路永婕张俊宁杨晨旭石家庄铁道大学机械工程学院河北石家庄050043 石家庄铁道大学省部共建交通工程结构力学行为与系统安全国家重点实验室河北石家庄050043 上海大学力学与工程科学学院上海200444

为更加真实地反映爆胎车辆的运动状态,考虑爆胎工况下驾驶员行为对汽车的影响,在主动制动控制策略下,对爆胎汽车进行驾驶补偿控制。根据轮胎力学参数的变化,在轮胎模型基础上构建爆胎模型,结合车辆动力学方程建立爆胎车辆动力学模型,以... 详细信息

为更加真实地反映爆胎车辆的运动状态,考虑爆胎工况下驾驶员行为对汽车的影响,在主动制动控制策略下,对爆胎汽车进行驾驶补偿控制。根据轮胎力学参数的变化,在轮胎模型基础上构建爆胎模型,结合车辆动力学方程建立爆胎车辆动力学模型,以主动差动制动的方式对爆胎汽车进行稳定性控制,通过驾驶员模型来模拟爆胎工况下司机对方向盘转角控制,分析动力学响应并设计驾驶转角补偿器来修正驾驶员操作引起的汽车失稳状态。结果表明,爆胎会使车辆的运行状态发生改变,驾驶员的行为会导致车辆严重失稳与偏航,差动制动和转角补偿控制可以平衡爆胎过程中产生的不稳定因素并修正驾驶员操作带来的影响,使车辆保持稳定并沿预期轨迹减速行驶。

关键词：汽车工程爆胎驾驶响应补偿稳定性控制

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钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱轴压性能有限元分析

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钢结构(中英文) 2023年第8期38卷 14-21页

作者：封剑森孙泽轩邹昀王城泉江苏华江祥瑞现代建筑发展有限公司江苏扬州225215 江南大学江苏无锡214122 浙大城市学院杭州310015

钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱因其良好的受力性能以及快速的施工速度,在实际工程中得以广泛应用。为进一步研究钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱的轴压性能,在已完成的6组轴压试验的基础上,利用ABAQUS有限元软件建立了相应的模型并进行... 详细信息

钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱因其良好的受力性能以及快速的施工速度,在实际工程中得以广泛应用。为进一步研究钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱的轴压性能,在已完成的6组轴压试验的基础上,利用ABAQUS有限元软件建立了相应的模型并进行了非线性有限元分析。结合轴压试验结果,从试件的破坏形态、荷载-位移曲线等方面证明了有限元模型的可靠性与适用性。基于已验证的有限元模型进行了大量的参数分析,研究的参数包括:混凝土强度、径宽比、波纹钢板屈服强度以及波纹钢板厚度,以探究不同参数对钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱的承载能力、初始刚度、承载力提升系数、延性的影响。模拟结果表明:提升材料强度可以提高试件的承载能力,但对强度提升系数影响很小;增大径宽比可以有效提升试件的极限承载力、强度提升系数与延性,但相应试件的用钢量也会提升;增加波纹钢板厚度基本不会提升试件的承载能力,但会明显提高试件的延性。最后,进行了钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱的稳定性分析,在综合考虑钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱的截面形状以及材料性质的前提下,提出组合柱长细比的计算方法;通过引入初始缺陷的方式建立起不同长细比下钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱的有限元模型,研究了不同长细比对其受力机理以及承载能力的影响,并引入各国规范的计算方法,将模拟结果与计算结果进行比较。对比结果表明:现有规范对于钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱极限承载力的设计值偏大,不能准确预测组合柱的承载能力。因此,基于有限元模拟结果,对钢管-波纹钢板约束混凝土组合柱的稳定系数及轴压承载力计算公式进行了修正。

关键词：波形钢板轴压性能有限元模拟参数分析长细比

产前超声应用微血流灌注成像技术诊断胎儿下腔静脉畸形的价值

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中华诊断学电子杂志 2022年第4期10卷 253-258页

作者：何荟陈琳杨泽萱叶楠奚级梅 611731　成都，电子科技大学医学院附属妇女儿童医院（成都市妇女儿童中心医院）超声科

目的探讨产前超声应用微血流灌注(MV-Flow)成像技术诊断胎儿下腔静脉畸形的价值。方法选择2020年6月至2021年6月成都市妇女儿童中心医院超声科22787例孕妇行20~24周胎儿系统超声检查中,产前诊断为下腔静脉畸形的胎儿,应用MV-Flow技术和... 详细信息

目的探讨产前超声应用微血流灌注(MV-Flow)成像技术诊断胎儿下腔静脉畸形的价值。方法选择2020年6月至2021年6月成都市妇女儿童中心医院超声科22787例孕妇行20~24周胎儿系统超声检查中,产前诊断为下腔静脉畸形的胎儿,应用MV-Flow技术和多切面分段观察法观察下腔静脉,发现下腔静脉畸形时启用时间-空间关联成像(STIC)技术明确诊断。产后引产儿尸体解剖或儿童超声检查追踪观察,对比3种检查方法的产前诊断准确性,并比较操作耗时。结果产前诊断67例下腔静脉畸形,均经产后证实。应用MV-Flow技术观察下腔静脉,声像表现为:下腔静脉中断时肝静脉未汇入下腔静脉而直接汇入右心房,左下腔静脉呈"S"形走行,双下腔静脉呈"h"形走行。MV-Flow技术、多切面分段观察和STIC技术3者的诊断准确性一致。MV-Flow技术平均用时(10.16±2.48)s/例,多切面分段观察平均用时(34.75±11.04)s/例,STIC技术平均用时(225.11±36.67)s/例,三者比较差异有统计学意义(Z=126,P<0.01)。结论产前超声应用MV-Flow技术观察下腔静脉,产前诊断准确率高,操作简便,适合推广应用。

关键词：超声检查下腔静脉畸形冠状切面微血流灌注成像技术时间-空间关联成像

经纤维支气管镜局部冷冻疗法与无水乙醇注射疗法在瘢痕狭窄型支气管结核气道闭塞治疗中的联合应用

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山东医药 2023年第33期63卷 40-44页

作者：孙宏宇项保利王布姬泽萱河北北方学院附属第一医院河北张家口075000

目的观察纤维支气管镜下局部冷冻联合无水乙醇注射治疗在瘢痕狭窄型支气管结核气道闭塞的疗效。方法瘢痕狭窄型支气管结核气道闭塞患者90例,所有患者在常规抗结核的基础上进行支气管镜下介入治疗,并依据介入治疗方式的不同分为冷冻组、... 详细信息

目的观察纤维支气管镜下局部冷冻联合无水乙醇注射治疗在瘢痕狭窄型支气管结核气道闭塞的疗效。方法瘢痕狭窄型支气管结核气道闭塞患者90例,所有患者在常规抗结核的基础上进行支气管镜下介入治疗,并依据介入治疗方式的不同分为冷冻组、注射组和联合组,每组30例。冷冻组接受支气管镜下局部冷冻治疗,注射组接受支气管镜下局部无水乙醇注射治疗,联合组接受支气管镜下局部冷冻联合无水乙醇注射治疗。治疗后3个月后,观察三组患者临床疗效,计算总有效率。治疗前、治疗4周后,观察并比较三组患者的肺功能指标(气管直径、FEV1、6 min步行距离)和动脉血气分析指标[动脉血氧分压(PaO_(2))、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))]。对患者进行为期3个月的随访,记录三组患者并发症发生情况。结果联合组总有效率高于冷冻组和注射组(P0.05)。结论与单独应用支气管镜下局部冷冻治疗和支气管镜下局部无水乙醇注射治疗相比,支气管镜下局部冷冻治疗联合无水乙醇注射治疗瘢痕狭窄型支气管结核气道闭塞的疗效显著,可有效改善肺功能和动脉血气状态,且不增加并发症。

关键词：冷冻疗法无水乙醇注射疗法气道闭塞瘢痕狭窄型支气管结核纤维支气管镜

第四届“寒区水利学术思想暨江河治理的地学基础”学术研讨会综述

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吉林水利 2023年第8期 1-4,35页

作者：邵泽璇尉意茹孔维健戴长雷黑龙江大学水利电力学院黑龙江哈尔滨150080 黑龙江大学寒区地下水研究所黑龙江哈尔滨150080 东北联邦大学地质勘探学院俄罗斯雅库茨克677000 俄罗斯科学院西伯利亚分院麦尔尼科夫冻土研究所俄罗斯雅库茨克677000

本文主要就第四届“寒区水利学术思想暨江河治理的地学基础”学术研讨会进行会议综述。首先对会议背景进行介绍;其次从会议概况、报告以及会务三方面进行会议综述,并整理汇总了前四届“寒区水利学术思想暨江河治理的地学基础”学术研讨... 详细信息

本文主要就第四届“寒区水利学术思想暨江河治理的地学基础”学术研讨会进行会议综述。首先对会议背景进行介绍;其次从会议概况、报告以及会务三方面进行会议综述,并整理汇总了前四届“寒区水利学术思想暨江河治理的地学基础”学术研讨会的相关情况,梳理了第四届会议的侧重方向;最后对会议进行总结与展望。第四届“寒区水利学术思想暨江河治理的地学基础”学术研讨会的成功召开在为后续会议的发展奠定良好的基础的同时也能进一步为寒区水利事业的发展积攒力量。

关键词：学术思想寒区水利江河治理

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全膀胱切除-回肠新膀胱术

暨南大学学报（自然科学与医学版） 1998年第6期19卷 67-67页

作者：梁蔚波苏泽轩黄桦暨南大学医学院第一附属医院泌尿外科

以往全膀胱切除术后常用腹壁造口解决排尿问题，患者生活上有诸多不便。而理想的代膀胱是能够自主控制排尿，对肾功能及血电解质没有影响本文旨在研究最大程度地提高全膀胱切除术后患者的生活质量。方法：全膀胱切除时注意保护好尿道膜... 详细信息

以往全膀胱切除术后常用腹壁造口解决排尿问题，患者生活上有诸多不便。而理想的代膀胱是能够自主控制排尿，对肾功能及血电解质没有影响本文旨在研究最大程度地提高全膀胱切除术后患者的生活质量。方法：全膀胱切除时注意保护好尿道膜部与尿道外括约肌。用带蒂的末段回肠以“Ｗ”型整形缝合为球囊状新膀胱，安置于盆腔内，其最低位与尿道残端吻合。结果：围手术期２例患者出现新膀胱漏尿、腹膜炎，经处理后痊愈。２０例术后恢复顺利。追踪观察一年，２２例患者均能自主排尿。无尿失禁、无溢尿，排尿间隔时间３ｈ以上，每次尿量＞２００ｍＬ。术后肾功能及血电解质检查无明显改变，Ｂ超检查无肾、输尿管扩张积水。２０例男性患者术后出现阳萎。２２例患者未见残余尿道发生肿瘤。结论：本术式简便易行，膀胱容量大，压力低，自控排尿功能好，术后并发症少。

关键词：全膀胱切除术膀胱癌回肠新膀胱术

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贫铀对啮齿类动物和人类生殖毒性研究进展

辐射防护通讯 2020年第1期40卷 38-42,48页

作者：潘泽轩尹晶晶高洁刘欢李建国中国辐射防护研究院放射医学与环境医学研究所药物毒理与放射损伤药物山西省重点实验室太原030006

本文介绍了贫铀对啮齿类动物和人类生殖毒性的研究进展,主要包括对生殖器官损伤的严重程度、发展趋势、遗传损伤、作用方式、相关机制和研究方法等。研究表明,贫铀暴露在多个层面损伤啮齿类动物和人的生殖和遗传功能。

关键词：贫铀生殖系统毒性研究

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甘蓝强骨片急性毒性和长期毒性试验

药学研究 2022年第2期41卷 83-87,121页

作者：周泽璇张婷梁国栋刘卫东肖云峰内蒙古大唐药业股份有限公司内蒙古自治区呼和浩特010010 内蒙古自治区蒙药新药研发企业重点实验室内蒙古自治区呼和浩特010010 内蒙古医科大学新药安全评价研究中心内蒙古自治区呼和浩特010010

目的研究甘蓝强骨片对小鼠单次给药以及对大鼠重复给药的毒性试验,为临床安全用药提供依据。方法采用单次给予小鼠最大剂量的甘蓝强骨片33.86 g·(kg·d)^(-1),给药后观察14 d动物的一般临床症状、体重、摄食量、饮水量和剖检进行大体... 详细信息

目的研究甘蓝强骨片对小鼠单次给药以及对大鼠重复给药的毒性试验,为临床安全用药提供依据。方法采用单次给予小鼠最大剂量的甘蓝强骨片33.86 g·(kg·d)^(-1),给药后观察14 d动物的一般临床症状、体重、摄食量、饮水量和剖检进行大体病理学检查。采用大鼠进行重复给药毒性试验研究,80只动物分为甘蓝强骨片22.50、11.25、0.45 g·(kg·d)^(-1)和羧甲基纤维素钠溶剂对照4组,每天灌胃给药,连续30 d,每天观察记录动物反应,每周测定体重及进食量。给药30 d结束后,测定血液学指标、血液生化学指标、观察主要脏器的组织病变情况、计算脏器系数及组织病理学检查。结果小鼠单次给药33.86 g·kg^(-1),给药后动物自主活动、摄食量略有减少,进行大体病理学检查,肉眼观察组织、器官未发现异常或病变。甘蓝强骨片22.50、11.25、0.45 g·(kg·d)^(-1)重复给药30 d,与溶剂对照组比较,大鼠体重、摄食量,大体病理学检查、肉眼观察组织、器官均无明显异常。结论在试验条件下,甘蓝强骨片灌胃给药小鼠最大给药剂量为33.86 g·kg^(-1),灌胃给药大鼠无毒反应剂量为22.50 g·(kg·d)^(-1)。

关键词：甘蓝强骨片单次给药小鼠重复给药大鼠