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首批HEK293细胞DNA含量测定国家标准品的制备

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中国生物制品学杂志 2024年第3期37卷 316-321页

作者：王光裕杨靖清魏长龙周泽鑫杨志行黄钰周勇中国食品药品检定研究院药品监管科学全国重点实验室北京100050 广州派真生物技术有限公司广东广州510670 湖州申科生物技术有限公司浙江湖州313000 武昌首义学院湖北武汉430064

目的制备HEK293细胞DNA含量测定用国家标准品,以期为行业内HEK293细胞残余DNA的测定提供支持。方法使用Genomic-tip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备HEK293细胞DNA,以其为标准物质原料,采用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行纯度和... 详细信息

目的制备HEK293细胞DNA含量测定用国家标准品,以期为行业内HEK293细胞残余DNA的测定提供支持。方法使用Genomic-tip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备HEK293细胞DNA,以其为标准物质原料,采用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行纯度和含量筛选,随后稀释至浓度约为100 ng/μL后,按160μL/支进行分装。组织5家不同实验室,采用紫外分光光度法进行协作标定,并评价其稳定性和适用性。结果制备的HEK293细胞DNA国家标准品经检测,A260/A280均在1.8~2.0之间,电泳图谱为单一条带,符合规定。该标准品经5家实验室协作标定,共得到78个有效数据,平均含量为104.8 ng/μL,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为4.2%,均数的95%可信区间为103.8~105.8 ng/μL,单次测定的95%参考值范围为96.0~113.6 ng/μL,平均可信限率为1.0%,推荐保存条件为-80℃。采用2个不同型号的荧光定量PCR仪进行适用性研究,该标准品在0.3~3000 pg/反应范围内适用性良好,扩增效率分别为101%和95%,标准曲线R^(2)分别为0.9992和0.9995。结论该批HEK293细胞DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于荧光定量PCR检测,含量定为104.8 ng/μL,批号为270039-202301。

关键词： HEK293细胞宿主残余DNA 国家标准品荧光定量PCR

Kidney function change after transcatheter aortic valve replacement in patients with diabetes and/or hypertension

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Journal of zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2021年第3期22卷 241-247页

作者： Jiaqi FAN Changjie YU Kaida REN Wanbing LIN Stella ng zexin CHEN Xinping LIN Lihan WAng Qifeng zhU Yuxin HE Jubo JIAng Xianbao LIU Jian'an WAng Department of Cardiology the Second Affiliated HospitalSchool of MedicineZhejiang UniversityHangzhou310009China zhejiang University School of Medicine Hangzhou310058China Department of Cardiology Tiantai Country People’s HospitalTaizhou317200China Department of Nephrology the Second Affiliated HospitalSchool of MedicineZhejiang UniversityHangzhou310009China Department of Clinical Epidemiology and Biostatistics the Second Affiliated HospitalSchool of MedicineZhejiang UniversityHangzhou310009China

Aortic stenosis(AS)is a progressive heart valve disease occurring predominantly in older *** to a survey in a western country,the prevalence of AS is nearly 6.4%in patients over 75 years old(Carabello and Paulus,2009).Transcatheter aortic valve replacement(TAVR)is an alternative method for AS *** studies have described how up to 66%of TAVR patients have concomitant baseline kidney dysfunction(Ferro et al.,2015;Gargiulo et al.,2015).The majority of patients can benefit from the TAVR procedure with the recovery of kidney function.

关键词： patients al. Kidney

手术治疗的肝细胞癌患者微血管侵犯的发生及其与预后的关系研究

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中国医药科学 2024年第7期14卷 4-7,29页

作者：杨继林尹泽新张文坚崔理锋吴美龙刘利平暨南大学第二临床医学院广东深圳518020 深圳市人民医院肝胆胰外科广东深圳518020

目的探究微血管侵犯(MVI)的发生及与肝细胞癌(HCC)患者预后之间的联系。方法收集从2015年7月至2022年6月共1633例(深圳市人民医院305例、南昌大学第一附属医院591例、南昌大学第二附属医院578例、中山市人民医院159例)行手术治疗的HCC... 详细信息

目的探究微血管侵犯(MVI)的发生及与肝细胞癌(HCC)患者预后之间的联系。方法收集从2015年7月至2022年6月共1633例(深圳市人民医院305例、南昌大学第一附属医院591例、南昌大学第二附属医院578例、中山市人民医院159例)行手术治疗的HCC患者的临床资料。明确HCC患者预后以及MVI的共同独立影响因素并探究MVI在各个影响因素不同分组中的发生率以及对患者预后的影响。结果ROC曲线显示相比其他预后因素,MVI与患者预后关系最密切。研究显示甲胎蛋白(AFP)、肝硬化、肿瘤直径、淋巴细胞-单核细胞比(LMR)是MVI和HCC患者预后的共同影响因素。分组后发现肝硬化、AFP阳性(AFP≥20 ng/ml)、肿瘤直径>50 mm、LMR≤3.4的患者中MVI发生率明显高于其他组患者,并且四组中MVI阳性患者均表现出更高的早期复发率以及病死率(P<0.05)。结论通过预后因素可以有效预测HCC患者肝切除术后MVI的发生以及MVI与预后之间的联系。

关键词：微血管侵犯肝细胞癌肝切除术预后因子

一种高效可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA抽提方法

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应用生态学报 2006年第11期17卷 2107-2111页

作者：李钧敏金则新台州学院生态研究所临海317000

以CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组DNA,利用PEG8000沉淀和纯化DNA.结果表明,该方法是一种简便、有效可直接应用于PCR分析的土壤总微生物基因组DNA的抽提方法.采用含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的缓冲液预洗,添加Ca... 详细信息

以CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组DNA,利用PEG8000沉淀和纯化DNA.结果表明,该方法是一种简便、有效可直接应用于PCR分析的土壤总微生物基因组DNA的抽提方法.采用含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的缓冲液预洗,添加CaCl2和BSA,可以去除腐殖酸;用PEG8000沉淀DNA,可以提高DNA质量;采用冻融法破碎细胞,CTAB、溶菌酶和蛋白质酶K共同作用以裂解细胞,可以保证获得大片段的DNA,提高DNA产率.用该方法抽提的七子花林下土壤总微生物DNA产率为9·22μg·g-1,A260/A280为1·65,可适用于PCR扩增及扩增rDNA限制酶切分析(ARDRA)技术,适宜的模板DNA浓度为0·67ng·μl-1.快速、有效、可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA提取方法的建立,为大规模的土壤微生物分子生态学研究提供了可能.

关键词：土壤总微生物 DNA 抽提 PCR扩增

UPLC-MS/MS检测人血中18种有机磷及氨基甲酸酯类农药

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中国法医学杂志 2017年第1期32卷 51-54页

作者：李鹏柏泽新夏侯秋锦国菲毕文姬淄博市公安局刑侦支队山东淄博255000

目的建立人血中18种有机磷及氨基甲酸酯类农药超高压液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的检测方法。方法血液中加入乙腈沉淀蛋白,采用Waters BEH C18(1.7μm 2.1×50mm)柱子,流动相为5mmol/L乙酸铵水-甲醇,流速:0.3m L/min;进样量:2μL,电... 详细信息

目的建立人血中18种有机磷及氨基甲酸酯类农药超高压液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的检测方法。方法血液中加入乙腈沉淀蛋白,采用Waters BEH C18(1.7μm 2.1×50mm)柱子,流动相为5mmol/L乙酸铵水-甲醇,流速:0.3m L/min;进样量:2μL,电喷雾离子源(ESI),正离子检测,采用多反应监测方式进行定量分析。结果药物最小检测限(LOD)在0.1~40ng/m L之间,定量限(LOQ)在0.5~50ng/m L之间,各药物浓度在定量限到500ng/m L范围内线性良好,回收率均在64.3%~111.9%之间,相对标准偏差为3.9%~10.3%。结论该方法专属性强、灵敏、准确,可以适用于法庭与临床毒物分析。

关键词：法医毒物分析液相色谱-质谱联用仪有机磷农药氨基甲酸酯类农药

基于窄间隙焊接的热模拟峰值温度对Q690高强钢腐蚀行为的影响

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中国腐蚀与防护学报 2018年第5期38卷 447-454页

作者：王凯易耀勇卢清华易江龙江泽新马金军张宇佛山科学技术学院机电工程学院佛山528231 广东省焊接技术研究所(广东省中乌研究院) 广州510650 广船国际有限公司广州511462 江苏省(沙钢)钢铁研究院张家港215625

利用Gleeble3800热模拟实验机模拟了Q690高强钢焊接热影响区在不同峰值温度条件下的单道次热循环过程。测定Q690高强钢母材及不同峰值温度条件下热影响区试样的力学性能及电化学特性,观察不同峰值温度下Q690高强钢热影响区的热模拟显微... 详细信息

利用Gleeble3800热模拟实验机模拟了Q690高强钢焊接热影响区在不同峰值温度条件下的单道次热循环过程。测定Q690高强钢母材及不同峰值温度条件下热影响区试样的力学性能及电化学特性,观察不同峰值温度下Q690高强钢热影响区的热模拟显微组织及电化学实验腐蚀形貌。结果表明,不同热模拟峰值温度下,Q690高强钢的热影响区组织呈现出非线性变化,其力学性能和腐蚀行为取决于显微组织中的贝氏体组织的转变与晶粒大小。当峰值温度为850℃时,热影响区具有最佳的低温冲击韧性以及和Q690高强钢母材相近的电化学腐蚀特性。

关键词： Q690高强钢窄间隙焊接热模拟显微组织电化学腐蚀

PCOS患者胚胎质量以及解冻移植周期妊娠结局的影响因素分析

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中华生殖与避孕杂志 2022年第4期42卷 357-363页

作者：杨泽欣白雪莲范亚珍张印峰罗海宁张云山天津医科大学研究生院天津300070 天津市中心妇产科医院生殖医学中心天津市人类发育与生殖调控重点实验室天津300100

目的探索多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)患者体外受精/卵胞质内单精子注射(in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection, IVF/ICSI)周期胚胎质量以及冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer, FET)周期中妊娠结局的影响因素。方法采用回顾性病例对照研究设计, 分析2015年1月至2019年12月期间于天津市中心妇产科医院生殖医学中心接受IVF/ICSI治疗, 行全胚冷冻治疗并第一次行FET的1233个周期, 根据是否为PCOS患者分为对照组(n=561)和PCOS组(n=672)。比较两组之间患者一般临床资料、实验室相关指标、妊娠结局, 并通过多因素logistic回归分析晚期流产率的影响因素。结果①对照组和PCOS组的一般临床资料中不孕年限[(3.95±2.01)年比(4.84±2.91)年, P=0.007]、体质量指数(body mass index, BMI)[(21.96±2.52)kg/m2比(23.96±3.50)kg/m2, Png/L比(56.67±54.17)ng/L, P=0.032]、基础睾酮[(42.80±13.45)ng/L比(53.45±38.67)ng/L, P=0.001]、促性腺激素起始量[(230.80±54.07)U比(192.11±53.79)U, P<0.001]差异均有统计学意义。FET周期中内膜准备方案, PCOS组中更多患者进行了激素替代周期[64.1%(431/672)比26.6%(149/561)], 而对照组更多患者进行了自然周期移植[73.4%(412/561)比35.9%(241/672)], 且差异均有统计学意义(均P<0.001)。②实验室相关指标中获卵数PCOS组大于对照组[(23.36±9.53)枚比(20.32±8.81)枚, P=0.002], PCOS组的优质胚胎数[(2.94±3.13)枚]、优质胚胎率[33.3%(2016/6048)]小于对照组[(4.17±3.65)枚, P=0.034;46.3%(2339/5049), P<0.001], 且差异均有统计学意义。③妊娠结局中, 优质胚胎移植率、生化妊娠率对照组大于PCOS组[71.0%(743/1046)比59.3%(761/1284), P<0.001;7.3%(41/561)比4.5%(30/672), P=0.033], 晚期流产率PCOS组大于对照组[10.3%(43/418)比4.3%(16/326), P=0.002]。④进一步对晚期流产影响因素进行logistic回归分析, 在矫正混杂因素之后, PCOS(OR=2.573, 95%CI=1.270~5.212, P=0.009)以及母亲高BMI(OR=1.080, 95%CI=0.991~1.176, P=0.031)为晚期流产的危险因素。结论 PCOS患者优质胚胎数以及优质胚胎率均低于非PCOS患者, PCOS以及高BMI是患者晚期流产的危险因素。在助孕治疗之前, 改善PCOS患者内分泌紊乱以及控制体质量对改善患者妊娠结局有积极意义。

关键词：多囊卵巢综合征胚胎质量冻融胚胎移植晚期流产率

红景天苷通过细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路诱导树突状细胞抗肿瘤作用

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细胞与分子免疫学杂志 2019年第11期35卷 979-985页

作者：张燕丽岳秋娟文泽馨张雪伟李鹏飞崔琳张敏西藏民族大学医学部生命科学高校重点实验室陕西咸阳712082 福建医科大学临床医学部福建福州350004

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路在红景天苷(SAL)调控树突状细胞(DC)抗肿瘤的作用。方法建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,分别体内给予生理盐水(0.2 mL/d)、SAL[500 mg/(kg·d)]和环磷酰胺(CTX)[10 mg/(kg... 详细信息

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路在红景天苷(SAL)调控树突状细胞(DC)抗肿瘤的作用。方法建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,分别体内给予生理盐水(0.2 mL/d)、SAL[500 mg/(kg·d)]和环磷酰胺(CTX)[10 mg/(kg·d)]治疗。检测Lewis肺癌荷瘤小鼠的生存期和肿瘤质量。同时,体外分离Lewis肺癌荷瘤小鼠骨髓来源的DC诱导培养。经磁珠分选后,分别与PBS、0.05 mg/mL SAL、200 ng/mL脂多糖(LPS)或0.05 mg/mL SAL联合ERK抑制剂U0126共培养48 h,流式细胞术检测磷酸化的ERK(p-ERK)水平。另外,将DC分别与PBS、0.05 mg/mL SAL或200 ng/mL LPS共培养48 h,流式细胞术检测磷酸化的p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化的JNK(p-JNK)表达量。此外,收取磁珠分选后DC与PBS、0.05 mg/mL SAL、200 ng/mL LPS或0.05 mg/mL SAL联合ERK抑制剂U0126共培养后的细胞上清,ELISA检测DC分泌IL-12p70的能力。最后,将Lewis肺癌荷瘤小鼠骨髓来源的致敏DC经SAL刺激后与尼龙毛柱吸附纯化的C57BL/6正常小鼠脾T淋巴细胞共培养作为效应细胞,再按照10∶1、25∶1、50∶1效靶比加入3LL靶细胞,CCK-8法检测体外细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果SAL可以显著抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长并提高其生存期;与PBS处理的DC相比,SAL组DC中ERK磷酸化水平显著升高,使用ERK抑制剂U0126后,磷酸化ERK的表达量显著降低;SAL对p38MAPK通路和JNK通路的磷酸化无明显影响;SAL组DC的IL-12p70分泌水平显著升高,使用ERK阻断剂U0126后DC分泌IL-12p70水平显著上升;SAL增强CTL的杀伤能力。结论SAL抑制Lewis肺癌荷瘤的肿瘤生长,激活ERK信号通路,促进DC分泌IL-12p70并增强CTL杀伤能力。

关键词：红景天苷(SAL) 树突状细胞(DC) 细胞外信号调节激酶(ERK) 抗肿瘤免疫