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新生鼠缺氧缺血性脑损伤后经脑室人神经干细胞移植的实验研究

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中华儿科杂志 2005年第8期43卷 576-579页

作者：屈素清栾佐尹国才郭万里胡晓红吴南海闫凤青钱阳明海军总医院儿科北京100037

目的研究新生鼠缺氧缺血性脑损伤后经脑室移植人胚胎脑神经干细胞后,植入细胞的存活、迁移及分化情况。方法孕12周人胚胎神经干细胞在含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子和白血病细胞抑制因子的N2培养基(D/F12+N2+B27)中培... 详细信息

目的研究新生鼠缺氧缺血性脑损伤后经脑室移植人胚胎脑神经干细胞后,植入细胞的存活、迁移及分化情况。方法孕12周人胚胎神经干细胞在含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子和白血病细胞抑制因子的N2培养基(D/F12+N2+B27)中培养11天。生后7天的新生SD大鼠32只建立缺氧缺血性脑病模型,3天后将培养的人神经干细胞制成悬液(1.0×105/μl),采用立体定向移植至实验动物损伤侧脑室。移植后1、2、4周及3个月(每时间点各8只)取脑组织行HE染色和免疫组织化学分析。结果移植后1周大量抗人细胞核蛋白抗体阳性的植入细胞从脑室沿胼胝体向外迁移并到达损伤区,以损伤侧皮层、海马多见,在不同区域可见与宿主细胞类似的分化的植入细胞:移行至皮层的植入细胞85%分化为抗人细胞核蛋白神经丝蛋白或抗人核蛋白神经元管蛋白抗体双阳性的皮层细胞,而位于移行区域的植入细胞60%表达为抗人核蛋白胶质纤维酸性蛋白抗体双阳性的星形胶质细胞,其余细胞仍在迁移中未分化。移植后2周更多的移植细胞到达损伤区,移植后4周及3个月植入细胞数较前明显减少。结论人胚胎神经干细胞经脑室移植至缺氧缺血性脑损伤的鼠脑后能存活、迁移,并依迁移区域的不同分化为神经元和星形胶质细胞。

关键词：缺氧缺血,脑大鼠干细胞移植脑室人神经干细胞移植缺氧缺血性脑病模型脑损伤后侧脑室新生鼠实验研究

无关血缘脐血移植治疗儿童恶性和非恶性疾病的临床研究

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临床儿科杂志 2009年第5期27卷 464-467页

作者：唐湘凤栾佐吴南海徐世侠黄友章王凯龚小军中国人民解放军海军总医院儿科北京100037

目的探讨无关血缘脐血移植治疗儿童恶性和非恶性疾病的临床疗效。方法24例进行非血缘脐血移植的患儿,包括急性淋巴细胞白血病(ALL)8例,急性髓系白血病(AML)4例,幼年慢性粒单细胞白血病(JMML)3例,慢性粒细胞白血病(CML)2例,骨髓增生异常... 详细信息

目的探讨无关血缘脐血移植治疗儿童恶性和非恶性疾病的临床疗效。方法24例进行非血缘脐血移植的患儿,包括急性淋巴细胞白血病(ALL)8例,急性髓系白血病(AML)4例,幼年慢性粒单细胞白血病(JMML)3例,慢性粒细胞白血病(CML)2例,骨髓增生异常综合征(MDS-RA)2例,急性混合型白血病、石骨症、X连锁肾上腺脑白质营养不良、Ⅵ型黏多糖和慢性肉芽肿各1例。HLA高分辨全相合6例,5个位点相合10例,4个位点相合5例,3个位点相合3例。预处理选用白消安(Bu)/环磷酰胺(CTX)/抗胸腺球蛋白(ATG)或全身放疗(TBI)/CTX/ATG为主方案。6例ALL采用TBI/CTX/ATG,其中2例加鬼臼乙叉苷(VP16),18例采用Bu/CTX/ATG,其中3例JMML加马法兰,1例ALL和1例AML加VP16,3例非恶性疾病加塞替哌。于0d回输脐血有核细胞中位数为5.26(2.26～13.3)×107/kg,CD34细胞中位数为2.86(0.79～9.8)×105/kg。预防急性移植物抗宿主病(aGVHD)采用环孢素A和甲基泼尼松龙(MP)或骁悉,出现Ⅲ～Ⅳ度aGVHD者,加用CD25单抗。结果脐血干细胞粒系植入率为91.7%(22/24),1例ALL未植入,1例CML于+130d排斥;血小板植入率为83.3%(20/24),中性粒细胞≥0.5×109/L中位天数+15(+13～+28)d;血小板≥20×109/L中位天数+38(+25～+100)d。7例出现Ⅰ～Ⅱ度aGVHD;1例出现Ⅲ度aGVHD,给予MP均控制;2例出现Ⅳ度aGVHD,给予MP及CD25单抗后未控制。随访中位时间28(9～96)个月,均未发生慢性GVHD(cGVHD)。现存活14例血型均转为供者型;死亡10例,其中原发病复发2例(急变期CML和婴儿型ALL各1例),Ⅳ度aGVHD合并感染2例,6例感染(CMV间质性肺炎4例,霉菌性肺炎2例)。结论无关血缘脐血是快速的造血干细胞来源之一,为恶性疾病患儿争取了治疗时间;因其cGVHD发生率低,对非恶性疾病患儿的治疗更具优势。

关键词：无关血缘脐血移植儿童恶性疾病非恶性疾病

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人胎脑神经球及其构成细胞的成熟表型标志

中华神经医学杂志 2005年第5期4卷 455-458页

作者：尹国才栾佐屈素青闫凤青海军总医院儿科北京100037

目的观察体外培养人胎脑神经干细胞球的形成,并鉴别球内是否有成熟的神经细胞存在,证实神经球的异质性。方法用添加表皮生长因子(EGF,20ng/mL)和成纤维细胞生长因子2(FGF2,10ng/mL)的无血清N2培养基,从人胎脑培养获得神经干细胞球,在倒... 详细信息

目的观察体外培养人胎脑神经干细胞球的形成,并鉴别球内是否有成熟的神经细胞存在,证实神经球的异质性。方法用添加表皮生长因子(EGF,20ng/mL)和成纤维细胞生长因子2(FGF2,10ng/mL)的无血清N2培养基,从人胎脑培养获得神经干细胞球,在倒置显微镜下观察其形成过程,用间接免疫荧光技术检测神经球的细胞表型标志神经丝(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(GalC)和巢蛋白(nestin)的表达,并计算出阳性细胞球的百分比。结果前6d,培养中形成大量的细胞集落,检测的细胞标志中,只有nestin+,其余标志均为阴性。培养至12d左右,细胞球的数量减少约1/3,球体的形态和大小也不相同。培养30d的神经球中,69.2%神经球为NF+,81.8%为GFAP+,100%为nestin+,未观察到GalC+。结论神经球有个成熟过程,神经球之间具有异质性,球内的细胞构成也具有异质性。

关键词：神经球人胎脑神经球构成细胞细胞表型标志

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人胎脑源性神经前体细胞致瘤性评价

现代生物医学进展 2014年第31期14卷 6028-6031页

作者：姚先进栾佐杨印祥汪兆艳安徽医科大学安徽合肥230032 海军总医院儿科北京100048

目的：研究体外培养的人胎脑源性神经前体细胞的致瘤性。方法：将人胎脑源神经前体细胞体外培养至第1、25、40、60代，且每代细胞分别制备成神经球及单个细胞混悬液两种制剂，并取293T细胞作为阳性对照，共9组，每组5只，分别皮下接种于... 详细信息

目的：研究体外培养的人胎脑源性神经前体细胞的致瘤性。方法：将人胎脑源神经前体细胞体外培养至第1、25、40、60代，且每代细胞分别制备成神经球及单个细胞混悬液两种制剂，并取293T细胞作为阳性对照，共9组，每组5只，分别皮下接种于4～8周龄的BALB／C裸鼠，接种后饲养6个月，定期观察裸鼠精神状态、饮食、排便、以及接种局部有无出现结节或肿块，接种6个月后处死裸鼠，对接种局部及内脏进行组织病理切片及HE染色。结果：将人胎脑源性神经前体细胞接种于裸鼠皮下6个月未见肿瘤形成，且未见其他异常组织形成；而阳性对照组293T细胞接种于裸鼠皮下1个月后可见明显肿瘤形成。结论：人胎脑源神经前体细胞对裸鼠不具有体内致瘤性。

关键词：人胎脑源神经前体细胞致瘤性裸鼠

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喀什地区棉花-甜瓜立体套作栽培技术研究

新疆农业科学 2010年第12期47卷 2381-2384页

作者：李俊华翟文强王豪杰栾作涛吴海波张淳新疆农业科学院哈密瓜研究中心乌鲁木齐830091 伽师县农业技术推广中心新疆伽师844300 新疆农业科学院科管处乌鲁木齐830091

【目的】研究影响新疆喀什地区棉花-甜瓜立体套种模式效果的关键因素,为完善该模的种植技术提供理论依据。【方法】调查甜瓜与棉花共生期间水肥管理以及甜瓜主要病害发生、产量和品质,并与棉花和甜瓜常规种植方式比较。【结果】棉花-甜... 详细信息

【目的】研究影响新疆喀什地区棉花-甜瓜立体套种模式效果的关键因素,为完善该模的种植技术提供理论依据。【方法】调查甜瓜与棉花共生期间水肥管理以及甜瓜主要病害发生、产量和品质,并与棉花和甜瓜常规种植方式比较。【结果】棉花-甜瓜立体套种模式下作物共生期水肥管理矛盾小,田间管理方便;甜瓜白粉病发病减轻,霜霉病发病较重;新陆中21号棉花产量为3 888 kg/hm2,卡拉库赛甜瓜产量为29 670 kg/hm2,甜瓜商品率超过90%。【结论】棉花-甜瓜立体套种模式具有明显增产和增收效果,对于解决新疆喀什地区因人多地少而迫切需要提高种植收益有积极意义。

关键词：棉花-甜瓜立体套种水肥管理甜瓜病害

儿童白血病造血干细胞移植后免疫性血细胞减少症3例分析

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中国小儿血液与肿瘤杂志 2012年第6期17卷 248-251页

作者：王凯吴南海栾佐唐湘凤龚小军北京市海军总医院儿科 100048

目的探讨白血病造血干细胞移植后免疫性血细胞减少症发生的影响因素,治疗和预后。方法对3例造血干细胞移植后长期存活并发生免疫性血细胞减少症的白血病患儿的临床资料进行回顾性分析。结果在19例移植后长期存活的患儿中,3例发生免疫性... 详细信息

目的探讨白血病造血干细胞移植后免疫性血细胞减少症发生的影响因素,治疗和预后。方法对3例造血干细胞移植后长期存活并发生免疫性血细胞减少症的白血病患儿的临床资料进行回顾性分析。结果在19例移植后长期存活的患儿中,3例发生免疫性血细胞减少症,发生率为16%,男2例,女1例,分别发生在移植后+180 d、+186 d和+384 d;发生年龄分别为8岁、9岁8个月和9岁11个月;1例HLA 6/6相合,2例为5/6相合;均采用无关脐血移植,在预处理中使用兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白(ATG)。仅有1例发生移植物抗宿主病(GVHD),2例在植入早期发生巨细胞病毒感染。3例均接受以糖皮质激素为基础的免疫抑制治疗,2例治疗反应良好,停药后无复发,1例需免疫抑制剂维持。结论在本研究中,性别、HLA配型差异、供受者血型不合、GVHD不是造血干细胞移植后免疫性血细胞减少症的危险因素。脐血移植、使用ATG和早期病毒感染可能与造血干细胞移植后免疫性血细胞减少症的发生有关,本病主要治疗手段为以糖皮质激素为基础的免疫抑制治疗。

关键词：白血病造血干细胞移植免疫性血细胞减少症

煤层气井压裂裂缝井下微地震监测技术应用分析

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科学技术与工程 2013年第23期21卷 6681-6685,6691页

作者：张平吴建光孙唅森张晓朋高海滨吴翔左景栾中联煤层气有限责任公司北京100011

分析了井下微地震裂缝监测测试技术原理、震源定位计算方法及现场测试方法。介绍了沁水盆地南部柿庄南区块煤层气井井下微地震裂缝监测测试解释结果。通过对监测解释结果分析,认识到柿庄南区块煤层压裂裂缝形态复杂,空间展布显现出网络... 详细信息

分析了井下微地震裂缝监测测试技术原理、震源定位计算方法及现场测试方法。介绍了沁水盆地南部柿庄南区块煤层气井井下微地震裂缝监测测试解释结果。通过对监测解释结果分析,认识到柿庄南区块煤层压裂裂缝形态复杂,空间展布显现出网络裂缝及非对称裂缝的特征,裂缝延伸方位为北东向或东南向,与断层走向平行或垂直,各种压裂工艺形成的裂缝形态及几何尺寸差异较大;结果对压裂工艺选择、施工参数优化设计及井网部署提供了重要的依据。

关键词：煤层气压裂微地震裂缝监测

新生鼠缺氧缺血性脑损伤后内源性神经干细胞的增殖及迁移

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中华小儿外科杂志 2005年第5期26卷 260-263页

作者：屈素清栾佐闫凤青尹国才郭万里胡晓红吴南海北京海军总医院儿科第一军医大学在职研究生100037

目的观察新生鼠缺氧缺血损伤后内源性神经干细胞的增殖及迁移。方法制成新生鼠缺氧缺血脑损伤模型,采用单、双标免疫组织化学方法检测5溴脱氧尿苷(BrdU)和巢蛋白(Nestin)的表达。BrdU标记增殖的新生细胞,Nestin标记神经干细胞。结果正... 详细信息

目的观察新生鼠缺氧缺血损伤后内源性神经干细胞的增殖及迁移。方法制成新生鼠缺氧缺血脑损伤模型,采用单、双标免疫组织化学方法检测5溴脱氧尿苷(BrdU)和巢蛋白(Nestin)的表达。BrdU标记增殖的新生细胞,Nestin标记神经干细胞。结果正常新生鼠生后保持较短一段时间的增殖活跃,生后3d达高峰,7d后逐渐减弱,生后21d后形成与成年动物相似的发生模式。缺氧缺血损伤后,细胞增殖恢复活跃,BrdU阳性细胞数于伤后4d达高峰,皮层、纹状体、海马可见散在阳性细胞,大多数BrdU阳性细胞集中位于室管膜下区的背外侧角及外侧壁处,伤后7d后逐渐减少,21d更多的BrdU阳性细胞迁移至损伤区;损伤后Nestin阳性细胞数增加,同时一定数量的Nestin阳性细胞由G0期进入增殖周期。结论缺氧缺血脑损伤可刺激新生鼠内源性神经干细胞的增殖及迁移。

关键词：内源性神经干细胞新生鼠缺氧缺血性脑损伤后 Nestin 免疫组织化学方法缺氧缺血损伤 5-溴脱氧尿苷缺氧缺血脑损伤 BrdU标记阳性细胞脑损伤模型室管膜下区细胞增殖细胞迁移增殖周期细胞数巢蛋白生后纹状体

丁咯地尔盐酸盐治疗新生鼠缺氧缺血性脑病的实验研究

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中华儿科杂志 2000年第5期38卷 299-301页

作者：栾佐高锦凌马波徐世侠尹国才屈素清海军总医院儿科北京100037

目的　观察丁咯地尔盐酸盐 (FZ)治疗新生鼠缺氧缺血性脑病 (HIE)的疗效 ,寻求治疗HIE的有效手段。方法　建立新生鼠HIE模型 ,将 10 4只新生鼠分为 13组 ,观察不同时间FZ 治疗后HIE鼠脑灌流状态、脑花生四烯酸、自由基清除、细胞内游离... 详细信息

目的　观察丁咯地尔盐酸盐 (FZ)治疗新生鼠缺氧缺血性脑病 (HIE)的疗效 ,寻求治疗HIE的有效手段。方法　建立新生鼠HIE模型 ,将 10 4只新生鼠分为 13组 ,观察不同时间FZ 治疗后HIE鼠脑灌流状态、脑花生四烯酸、自由基清除、细胞内游离钙代谢 ,以及脑组织病理变化。结果　治疗组用FZ 前后颈动脉血压无变化 ,缺血侧半球软脑膜血管扩张占 18.6 %～ 2 2 .7% ,较对侧正常半球软脑膜血管扩张程度大 2倍 ,脑组织TXB2 /PGI2 比值、胞内游离钙含量减少 ,超氧化物歧化酶 (SOD)活性增加。电镜下神经细胞基本恢复正常。结论　FZ 可有效恢复缺血区脑灌流 ,而不发生脑内窃血现象 ,同时还可通过提高SOD活性及钙离子弱拮抗作用 ,减轻或避免再灌注损伤。

关键词：新生大鼠缺氧缺血性脑病丁咯地尔盐酸盐