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Deletion of the topoisomeraseⅢgene in the hyperthermophilic archaeon Sulfolobus islandicus results in slow growth and defects in cell cycle control

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Journal of Genetics and Genomics 2011年第6期38卷 253-259页

作者： Xiyang Li Li Guo Ling Deng Deqin Feng Yi Ren yindi chu Qunxin She Li Huang State Key Laboratory of Microbial Resources Institute of Microbiology Chinese Academy of Sciences Beijing 100101 China Archaea Centre Department of Biology Copenhagen University Ole Maalces Vej 5 DK-2200N Copenhagen Denmark

Topoisomerase III （topo III）, a type IA topoisomerase, is widespread in hyperthermophilic archaea. In order to interrogate the in vivo role of archaeal topo III, we constructed and characterized a topo III gene deletion mutant of Sulfolobus islandicus. The mutant was ,viable but grew more slowly than the wild-type strain, especially in a nutrient-poor medium. Flow cytometry analysis revealed changes of the mutant in growth cycle characteristics including an increase in proportion of cells containing either more than two genome equivalents or less than one genome equivalent in exponentially-growing cultures. As shown by fluorescence microscopy, a fraction of mutant cells in the cultures were drastically enlarged, and at least some of the enlarged cells were apparently capable of resuming cell division. The mutant also shows a different tran- scriptional profile from that of the wild-type strain. Our results suggest that the enzyme may serve roles in chromosomal segregation and control of the level of supercoiling in the cell.

关键词： Hyperthermophilic archaea Sulfolobus islandicus Topoisomerase III topA deletion Phenotype

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梅毒螺旋体外膜蛋白研究进展

微生物学报 2021年第3期61卷 539-554页

作者：王哲储引娣张艳娟李军范恩国中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院皮肤科北京100730

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum)亚种苍白螺旋菌引起的性传播感染性疾病,主要通过母婴感染或性接触的方式传播。梅毒螺旋体的外膜蛋白在梅毒螺旋体的传播和宿主的黏附等方面起重要作用,因此,鉴定可以作为抗生素作用靶点的梅毒... 详细信息

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum)亚种苍白螺旋菌引起的性传播感染性疾病,主要通过母婴感染或性接触的方式传播。梅毒螺旋体的外膜蛋白在梅毒螺旋体的传播和宿主的黏附等方面起重要作用,因此,鉴定可以作为抗生素作用靶点的梅毒螺旋体外膜蛋白一直是梅毒疫苗开发的研究重点。本文重点阐述了梅毒螺旋体外膜蛋白的结构功能等特性,并将目前针对细菌外膜蛋白为靶点的药物的研究进展进行总结,以期为针对梅毒螺旋体的外膜蛋白为靶点的相关药物的研发提供一些新思路。

关键词：梅毒螺旋体外膜蛋白抗生素药物靶点

基于蛋白质跨外膜自转运系统的细菌细胞表面蛋白展示技术研究进展

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微生物学报 2022年第2期62卷 458-475页

作者：蔡锟储引娣黄丕英韦良婉范恩国中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa–eⅤ5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨... 详细信息

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa–eⅤ5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨膜步骤介导蛋白质穿过阴性菌的内外膜。据信Ⅴa型是目前已知蛋白质跨膜转运时最简单的分泌途径,故该蛋白质分泌系统作为一种生物工程手段被认为是进行外源蛋白细菌细胞表面展示的理想系统。本文概括了目前已知的自转运蛋白的种类、结构域组成及其可能的分泌机理,总结基于自转运蛋白构建细菌细胞表面展示系统的生物工程应用,特别是其在疫苗研发领域的最新研究进展,并探讨了其在病原体检测方面的潜在应用,以期深入拓展该分泌系统在生物工程方面的应用。

关键词：自转运蛋白细菌细胞表面蛋白展示蛋白质分泌活疫苗生物工程技术

反式自主转运蛋白紧密黏附素Intimin离体重组系统的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第3期43卷 191-195页

作者：韦良婉王哲王星媛储引娣范恩国中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建反式自主转运蛋白的离体重组系统,以用于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。方法以大肠埃希菌紧密黏附素Intimin为例,进行离体重组系统的构建。获得Intimin的过表达菌株后,将其制备成原生质球,诱导Intimin表达。纯化重... 详细信息

目的构建反式自主转运蛋白的离体重组系统,以用于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。方法以大肠埃希菌紧密黏附素Intimin为例,进行离体重组系统的构建。获得Intimin的过表达菌株后,将其制备成原生质球,诱导Intimin表达。纯化重组表达的桶状蛋白组装复合物,将其制备成蛋白脂质体。反应体系中加入蛋白酶K处理后,观察转运是否成功。结果原生质球诱导表达未折叠的Intimin后,向体系中加入桶状蛋白组装复合物制备的蛋白脂质体,反应结束后加入蛋白酶K处理。与不加蛋白脂质体的对照组相比,能观察到Intimin不被蛋白酶K消化,表明Intimin被成功转运至膜上。结论反式自主转运蛋白Intimin的跨膜转运需要桶状蛋白组装复合物的参与。本研究成功建立反式自主转运蛋白的离体重组系统,从而有助于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。

关键词：反式自主转运蛋白 BAM蛋白复合物跨膜转运

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基于直方图均衡化的图像增强系统设计

信息与电脑 2020年第10期32卷 45-47页

作者：朱强军楚引弟方圆安徽师范大学皖江学院安徽芜湖241008

为了解决天气等环境因素导致图像低照度、模糊等问题,笔者设计了一个基于直方图均衡化的图像增强系统。该系统首先通过全局直方图均衡化扩大图像灰度值的动态范围,再通过局部直方图均衡化放大局部细节,来获取更清晰的图像局部信息,从而... 详细信息

为了解决天气等环境因素导致图像低照度、模糊等问题,笔者设计了一个基于直方图均衡化的图像增强系统。该系统首先通过全局直方图均衡化扩大图像灰度值的动态范围,再通过局部直方图均衡化放大局部细节,来获取更清晰的图像局部信息,从而能提高图像在不失真条件下的清晰度。在MATLAB2017b软件上对该系统进行设计仿真实验,以除雾为例,实验结果表明,该系统对图像的增强效果较好。

关键词：直方图均衡化图像增强

基于自转运蛋白Ag43的HPV16L1蛋白的细菌表面展示

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第3期42卷 178-184页

作者：蔡锟王哲黄丕英韦良婉王星媛许雪梅储引娣朱沛沛范恩国中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国人民解放军总医院第二医学中心神经内科二病区国家老年疾病临床医学研究中心北京100036

目的:通过构建含有不同大小乘客结构域的Ag43表面展示载体,观察其将外源蛋白HPV16L1展示在细菌细胞表面的效率。方法:(1)利用基因工程手段将不同长度的Ag43基因序列连接到pET22b载体,获得4种Ag43表面展示载体:Ag43/138、Ag43/551、Ag43/... 详细信息

目的:通过构建含有不同大小乘客结构域的Ag43表面展示载体,观察其将外源蛋白HPV16L1展示在细菌细胞表面的效率。方法:(1)利用基因工程手段将不同长度的Ag43基因序列连接到pET22b载体,获得4种Ag43表面展示载体:Ag43/138、Ag43/551、Ag43/552、Ag43/700;(2)克隆HPV16L1编码基因序列,利用基因工程手段将其分别连接到上述4种Ag43表面展示载体,获得4种重组蛋白表达载体;(3)HPV16L1-Ag43融合蛋白表达及SDS-PAGE分析;(4)利用胰蛋白酶消化验证HPV16L1蛋白在大肠埃希菌的表面展示。结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增获得的Ag43和HPV16L1条带与预期大小一致,表面展示载体和重组蛋白表达载体的基因序列均通过基因测序验证无误。经IPTG诱导后,构建的4种Ag43表面展示载体均能表达HPV16L1蛋白。胰蛋白酶消化后,4种重组蛋白条带均减弱,且Ag43/700-HPV16L1条带减弱最明显。结论:成功构建了基于自转运蛋白Ag43的细菌表面展示载体,HPV16L1蛋白可通过构建的4种Ag43表面展示载体表达并展示在大肠埃希菌表面,且仅保留α-螺旋和β-桶状结构域部分的Ag43表达载体即Ag43/700的表面展示效果最优。

关键词：自转运蛋白细菌表面展示 HPV16L1 Ag43

推广“牛-有机肥-农”生态循环模式走可持续发展道路

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环境与可持续发展 2016年第6期41卷 115-117页

作者：王治方徐引弟冯长松朱文豪冯亚杰辛晓玲楚秋霞施巧婷王二耀娄治国李振李海利焦文强徐照学河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南郑州4500002 淇县畜牧局河南淇县456750

"牛-有机肥-农"生态循环模式能解决当前农村秸秆过剩、养牛场粪污污染环境的突出问题,成为高效、生态、循环种养结合的农村经济发展模式,真正让养牛业和种植业走上可持续发展道路。

关键词：养牛业生态循环粪污农村秸秆