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Top-down方法制备氯硝柳胺纳米剂的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2006年第6期18卷 411-415页

作者：郭峰姜柳李新松戴建荣朱荫昌东南大学化学化工系生物材料和药物释放实验室南京210018 江苏省血吸虫病防治研究所江苏省寄生虫分子生物学重点实验室江苏省寄生虫病学重点学科

目的研制氯硝柳胺纳米剂。方法将氯硝柳胺与各种助剂和水按一定的比例混合,选择适当的球磨条件,用行星式球磨机进行研磨,用光学显微镜和激光粒度仪评价所得到的纳米剂。结果使用行星式球磨方法,选用大球料比、高转速、长时间的高能量球... 详细信息

目的研制氯硝柳胺纳米剂。方法将氯硝柳胺与各种助剂和水按一定的比例混合,选择适当的球磨条件,用行星式球磨机进行研磨,用光学显微镜和激光粒度仪评价所得到的纳米剂。结果使用行星式球磨方法,选用大球料比、高转速、长时间的高能量球磨条件,可提高球磨效果;在表面活性物质、消泡剂和助磨剂存在的条件下,加入亲水高分子物质可对氯硝柳胺的颗粒起到保护作用。实验配方为氯硝柳胺25%(质量比,下同)、吐温-8010%、甲基硅油5%、二氧化硅10%、聚氧乙烯10%时,在转速为600r/min、球料比为20∶1的球磨条件下,预磨20h后用1mm锆球研磨至100h,可得到粒径分布最大值(DMax)为71nm、50%粒子的粒径(D50)为81nm、90%粒子的粒径(D90)为164nm的纳米粒子,形成稳定、易于分散的氯硝柳胺纳米液。结论用行星式球磨方法,在亲水高分子的保护下,选用高能量球磨条件,可得到稳定的氯硝柳胺纳米剂。

关键词：氯硝柳胺纳米粒子 Top—down方法

日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白的基因克隆与序列分析

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中国血吸虫病防治杂志 1997年第2期9卷 65-69页

作者：朱荫昌余传信殷旭仁司进江苏省寄生虫病防治研究所无锡214064

本研究根据曼氏血吸虫疫苗候选分子Sm23的基因序列，设计了一对引物，并通过聚合酶链反应（PCR）基因克隆技术，从日本血吸虫中国大陆株cDNA文库中克隆出了中国大陆株23kDa膜蛋白基因。DNA序列分析表明，编码日本血吸虫中国大陆株Sj23... 详细信息

本研究根据曼氏血吸虫疫苗候选分子Sm23的基因序列，设计了一对引物，并通过聚合酶链反应（PCR）基因克隆技术，从日本血吸虫中国大陆株cDNA文库中克隆出了中国大陆株23kDa膜蛋白基因。DNA序列分析表明，编码日本血吸虫中国大陆株Sj23膜蛋白的基因含有657bp，与曼氏血吸虫Sm23的核着酸有79．5％的同源性，而与日本血吸虫菲律宾株的Sj23的同源性为100％。该研究为发展Sj23多肽疫苗奠定了基础。

关键词：日本血吸虫中国大陆株 23kDa膜蛋白基因克隆 DNA序列

血吸虫病快速免疫诊断──胶体染料试纸条法的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2000年第1期12卷 18-20页

作者：何伟朱荫昌华万全刘韵娟江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的开发一种血吸虫病快速免疫诊断方法。方法用国产胶体染料Ｄ－１标记日本血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ），以此标记物与血吸虫病人血清中的抗血吸虫抗体反应，再用点有羊抗人ＩｇＧ（第二抗体）的硝酸纤维层析膜以层析法捕获标记... 详细信息

目的开发一种血吸虫病快速免疫诊断方法。方法用国产胶体染料Ｄ－１标记日本血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ），以此标记物与血吸虫病人血清中的抗血吸虫抗体反应，再用点有羊抗人ＩｇＧ（第二抗体）的硝酸纤维层析膜以层析法捕获标记抗原与抗体的复合物。结果用试纸条法检测急性血吸虫病人血清３０份、慢性血吸虫病人血清８４份，其敏感性分别为９６．７％和９４．０％，检测健康人血清６０份，其特异性为９６．７％，检测肝吸虫病人血清和肺吸虫病人血清各２０份，其交叉反应率分别为１００％和７０．０％．检测结果与常规ＥＬＩＳＡ法相似。标记染料在室温下至少可保存３个月活性不变。结论胶体染料试纸条法操作简便、快速，不需特殊仪器，适用于现场大规模检测。

关键词：胶体染料试纸条日本血吸虫病抗体检测

抗弓形虫靶向抗菌肽的构建及其效应的初步评价

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中国血吸虫病防治杂志 2005年第5期17卷 356-361页

作者：司进朱荫昌曹利民王晓婷梁幼生管晓虹江苏省寄生虫病防治研究所江苏省寄生虫分子生物学重点实验室江苏省寄生虫病学重点学科无锡214064 南京医科大学分子生物学研究所华中科技大学同济医学院免疫学系

目的构建弓形虫主要表面抗原1单链抗体S1与爪蟾抗菌肽(magainin)的融合基因,在大肠杆菌中诱导表达,观察纯化的靶向抗菌蛋白抗弓形虫感染的效果。方法根据弓形虫主要表面抗原1单链抗体S1的编码序列设计引物从噬菌粒S1/pIT-2中扩增到S1基... 详细信息

目的构建弓形虫主要表面抗原1单链抗体S1与爪蟾抗菌肽(magainin)的融合基因,在大肠杆菌中诱导表达,观察纯化的靶向抗菌蛋白抗弓形虫感染的效果。方法根据弓形虫主要表面抗原1单链抗体S1的编码序列设计引物从噬菌粒S1/pIT-2中扩增到S1基因;以其为模板,加入接头抗菌肽序列,采用重叠PCR法扩增得到S1基因与爪蟾抗菌肽的融合基因(S1M),将其克隆到原核表达载体pET-32c中,构建成S1与爪蟾抗菌肽基因的重组表达质粒S1M/pET-32c;测序验证后转化***21,以IPTG诱导表达,用Ni2+螯合柱亲和纯化融合蛋白S1M,SDS-PAGE检测融合基因的表达和纯化的融合蛋白S1M;分别采用体内和体外试验观察纯化的靶向抗菌蛋白抗弓形虫感染效果。结果测序结果表明,成功地将弓形虫主要表面抗原1单链抗体S1与爪蟾抗菌肽的融合基因构建到原核表达载体pET-32c中;SDS-PAGE显示IPTG诱导表达的融合蛋白S1M大小约为43kDa,与预期的大小相一致,以包涵体的形式存在;通过变性条件下Ni2+亲和柱纯化获得S1M重组融合蛋白;体内和体外试验证实,经靶向抗菌蛋白处理过的弓形虫对小鼠的致病能力下降,应用靶向抗菌蛋白的弓形虫感染小鼠的存活时间与对照组相比有明显的提高。结论以抗弓形虫速殖子人源单链抗体作为靶向分子,以爪蟾抗菌肽作为效应分子,构建成功的靶向抗菌蛋白通过体内、外试验证实,具有一定的抗弓形虫感染的作用,虽然还不能完全杀灭弓形虫,但是在弓形虫生物治疗药物的研制方面进行了有益的探索,为弓形虫病的生物治疗提供了新的思路。

关键词：弓形虫单链抗体抗菌肽靶向

胶体染料斑点免疫试验检测血吸虫病人抗体方法的建立及初步应用

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中国血吸虫病防治杂志 1995年第4期7卷 214-218页

作者：朱荫昌余传信殷旭仁刘韵娟江苏省寄生虫病防治研究所无锡214064

本研究首次从国产染料中筛选出一种能用于免疫反应显色的蓝色染料(D-1),并对用此染料标记羊抗人IgG的最适条件进行了探讨。这种标记抗体的胶体染料能与相关抗原反应并直接显色,双抗体夹心法检测人IgG蛋白的最低检出量为25—10ng/ml,胶... 详细信息

本研究首次从国产染料中筛选出一种能用于免疫反应显色的蓝色染料(D-1),并对用此染料标记羊抗人IgG的最适条件进行了探讨。这种标记抗体的胶体染料能与相关抗原反应并直接显色,双抗体夹心法检测人IgG蛋白的最低检出量为25—10ng/ml,胶体染料斑点免疫试验(DIA)检测62份血吸虫病人血清,61份阳性,阳性率为98.4％,40份姜片虫病人血清均为阴性,30份非血吸虫病流行区的健康人血清有1份出现阳性,假阳性率为3.3％,与Dot-ELISA检测结果相似。标记的胶体染料在室温下保存1wk仍保持活性不变,冻干能保存更长时间,与酶联免疫斑点法相比似有更高的实用价值。

关键词：免疫胶体染料日本血吸虫病抗体检测

重组GST-HD融合蛋白的血吸虫病早期诊断价值

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中国血吸虫病防治杂志 2005年第3期17卷 172-175页

作者：余传信殷旭仁许永良杨小红朱荫昌江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的研究重组日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白大亲水性肽段与谷胱苷肽的融合表达蛋白(GST-HD)用于血吸虫病早期诊断的价值。方法用日本血吸虫尾蚴感染家兔,收集感染前及感染后不同时间的家兔血清。用酶联免疫方法检测家兔感染血吸虫后... 详细信息

目的研究重组日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白大亲水性肽段与谷胱苷肽的融合表达蛋白(GST-HD)用于血吸虫病早期诊断的价值。方法用日本血吸虫尾蚴感染家兔,收集感染前及感染后不同时间的家兔血清。用酶联免疫方法检测家兔感染血吸虫后不同时间的血清中抗GST-HD融合蛋白及可溶性虫卵抗原(SEA)抗体IgG水平,观察不同感染时间点家兔对GST-HD、SEA的反应状况。用GST-HD检测90份急性血吸虫病人血清及30份健康人血清,评估其对血吸虫急性感染诊断的价值。结果在感染后的第17、21、24天,抗GST-HD的阳性率分别是42.85%、92.80%和100.00%,而抗SEA的阳性率分别为14.28%、50.00%和84.60%,GST-HD融合蛋白检测血吸虫早期感染的敏感性明显高于SEA。GST-HD融合蛋白检测急性血吸虫病人的阳性预告值及阴性预告值分别为98.89%和96.67%,诊断效率为98.33%。结论日本血吸虫23kDa膜蛋白分子的大亲水肽段融合蛋白具较好的血吸虫病早期诊断潜能。

关键词：血吸虫病早期诊断 GST-HD融合蛋白

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黏菌素E杀灭钉螺效果的初步研究

中国血吸虫病防治杂志 2005年第6期17卷 421-423页

作者：余传信殷旭仁许永良杨小红朱荫昌江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的观察黏菌素E对钉螺的杀灭效果。方法采用室内浸杀法、喷洒法观察黏菌素E 对湖北钉螺的杀螺效果,通过鱼毒试验观察黏菌素E对鱼的毒性作用。结果药物浓度为5．0、1．0 g／L时,分别浸杀24、48 h和72 h,各组钉螺的死亡率均为100％;药物... 详细信息

目的观察黏菌素E对钉螺的杀灭效果。方法采用室内浸杀法、喷洒法观察黏菌素E 对湖北钉螺的杀螺效果,通过鱼毒试验观察黏菌素E对鱼的毒性作用。结果药物浓度为5．0、1．0 g／L时,分别浸杀24、48 h和72 h,各组钉螺的死亡率均为100％;药物浓度为0．5 g／L时,浸杀24、 48 h和72 h,钉螺死亡率分别为95．00％、100．00％和100．00％;药物浓度为0．1 g／L时,浸杀24、48 h和72 h,钉螺死亡率分别为90．00％、95．00％和100．00％;药物浓度为0．01 g／L,浸杀24、48 h和 72 h,钉螺死亡率分别为70．00％、86．00％和100．00％。分别用35、70、140 mg／m2黏菌素E进行喷洒灭螺,钉螺死亡率分别为60．00％、100．00％和100．00％。鱼毒试验显示黏菌素E对鱼的毒性为弱毒性。结论黏菌素E是一种有效的灭螺药物,有进一步研究的价值。

关键词：黏菌素E 杀螺效果钉螺

抗弓形虫主要表面抗原1单链抗体的筛选及鉴定

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中国血吸虫病防治杂志 2005年第3期17卷 202-206页

作者：司进朱荫昌曹利民王晓婷梁幼生管晓虹南京医科大学分子生物学研究所南京210029 江苏省寄生虫病防治研究所江苏省寄生虫分子生物学重点实验室江苏省寄生虫病学重点学科华中科技大学同济医学院免疫学系

目的采用重组抗原从人源化单链抗体库(Human single fold scFv library)中筛选和鉴定抗弓形虫主要表面抗原1(rSAG1)的单链抗体,对其特异性的弓形虫靶向作用进行分析,为弓形虫靶向生物治疗提供靶向分子。方法以重组SAG1融合蛋白作为包被... 详细信息

目的采用重组抗原从人源化单链抗体库(Human single fold scFv library)中筛选和鉴定抗弓形虫主要表面抗原1(rSAG1)的单链抗体,对其特异性的弓形虫靶向作用进行分析,为弓形虫靶向生物治疗提供靶向分子。方法以重组SAG1融合蛋白作为包被抗原对噬菌体抗体库进行3轮固相筛选,获得抗rSAG1融合蛋白的阳性克隆;用纯化的原核表达载体pET-32C的亲和标签(Trx-His-Stag)、鼠可溶性抗原和大肠杆菌抗原对上述阳性克隆进行差异筛选,获得能特异性结合rSAG1的噬菌体克隆;差异筛选获得的特异性阳性克隆转染大肠杆菌HB2151进行诱导表达和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,获得能分泌抗rSAG1单链抗体(anti-rSAG1scFv)的阳性噬菌体克隆;DNA测序分析抗rSAG1的单链抗体基因序列。用Ni2+螯合柱亲和纯化rSAG1单链抗体,并用免疫印迹技术(Westernblot)对纯化的抗rSAG1单链抗体进行免疫反应性检测;免疫组化检测rSAG1单链抗体对弓形虫速殖子的靶向作用。结果经过rSAG1抗原的固相筛选后获得24株阳性克隆,差异筛选后获得5株能特异性结合rSAG1的噬菌体克隆,其中有3株分泌性表达抗rSAG1的单链抗体,DNA测序和Genbank比对表明其为3株不同的抗弓形虫主要表面抗原1的单链抗体;West-ernblot表明亲和纯化的单链抗体能较好结合rSAG1;免疫组化显示抗rSAG1单链抗体可与弓形虫速殖子结合。结论利用噬菌体抗体库技术获得的特异性人源rSAG1单链抗体与弓形虫速殖子有较强的结合能力,这对弓形虫的靶向生物治疗具有潜在应用价值。

关键词：弓形虫主要表面抗原1 单链抗体靶向

日本血吸虫(大陆株)23kD分子(SjC23)大亲水肽段(HD)在pGEX-5X-1中表达

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实用寄生虫病杂志 2000年第4期8卷 145-147页

作者：余传信朱荫昌殷旭仁何伟华万全江苏省血吸虫病防治研究所江苏无锡214064

应用聚合酶链反应技术 ,从日本血吸虫 (大陆株 ) 2 3kD分子基因中扩增出其大亲水肽段的DNA序列 ,将此片段插入到表达载体 pGEX 5X 1中进行表达 ,经IPTG诱导产生分子量约 33 5kD的融合蛋白 (GST HD)。用FactorXa对融合蛋白进行切割获得... 详细信息

应用聚合酶链反应技术 ,从日本血吸虫 (大陆株 ) 2 3kD分子基因中扩增出其大亲水肽段的DNA序列 ,将此片段插入到表达载体 pGEX 5X 1中进行表达 ,经IPTG诱导产生分子量约 33 5kD的融合蛋白 (GST HD)。用FactorXa对融合蛋白进行切割获得纯化的大亲水肽段 ,Westernblotting分析表明 ,融合蛋白及大亲水肽段均能为血吸虫病人血清识别。

关键词：日本血吸虫大亲水肽段重组表达