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全蛋白组水平预测旋毛虫分泌蛋白及其功能分析

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畜牧与兽医 2017年第4期49卷 79-84页

作者：费宏秦玉兰吴玲燕徐立新宋小凯李祥瑞严若峰南京农业大学动物医学院江苏南京210095

从蛋白组水平预测并分析旋毛虫分泌蛋白的特征。利用软件预测旋毛虫蛋白组范围分泌蛋白,并统计和分析其序列特征,最后利用数据库信息注释分析分泌蛋白功能。结果:预测得到414个经典途径分泌蛋白和245个非经典途径分泌蛋白,占蛋白组2.40%... 详细信息

从蛋白组水平预测并分析旋毛虫分泌蛋白的特征。利用软件预测旋毛虫蛋白组范围分泌蛋白,并统计和分析其序列特征,最后利用数据库信息注释分析分泌蛋白功能。结果:预测得到414个经典途径分泌蛋白和245个非经典途径分泌蛋白,占蛋白组2.40%。MEME统计经典分泌蛋白信号肽中存在可能的3个基序。氨基酸组成分析表明,旋毛虫分泌蛋白及其信号肽主要由疏水性氨基酸组成,而信号肽剪切位点主要由亲水性氨基酸组成,信号肽剪切位点-3和-1两个位点氨基酸保守性高,可能是相关酶识别关键点。在对分泌蛋白的功能进行注释分析中发现,与核酸酶活性和蛋白酶活性相关的蛋白比例较高。研究结果为旋毛虫致病机制的深入研究提供理论基础。

关键词：旋毛虫蛋白组预测分泌蛋白功能注释

口服纳米氧化锌对堆型艾美耳球虫感染的防治效果

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畜牧与兽医 2021年第7期53卷 78-82页

作者：徐立新陈秋阳史嘉雯孙晓婷宋小凯严若峰李祥瑞南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为研究口服纳米氧化锌抗堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)感染的效果,将饲养至14日龄的雏鸡随机分成12组,每组30羽,分成3个重复。分别为空白对照组;纳米氧化锌剂量筛选试验:10×10^(4)孢子化卵囊感染鸡,分别口服去离子水对照和5、10... 详细信息

为研究口服纳米氧化锌抗堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)感染的效果,将饲养至14日龄的雏鸡随机分成12组,每组30羽,分成3个重复。分别为空白对照组;纳米氧化锌剂量筛选试验:10×10^(4)孢子化卵囊感染鸡,分别口服去离子水对照和5、10、20、30 mg纳米氧化锌5组;纳米氧化锌抗不同剂量球虫感染试验:口服20 mg纳米氧化锌,分别用5×10^(4)、2.5×10^(4)、1×10^(4)孢子化卵囊进行感染及对应口服去离子水对照6组。试验结果显示,口服纳米氧化锌都能明显减少由于球虫感染引起的增重损失,提高相对增重率,其中每羽口服20 mg的效果最好;能减少球虫感染引起的死亡,提高存活率;能降低卵囊排出量;能减轻十二指肠的病变损伤;抗球虫指数明显高于相应对照组,且对低剂量的1×10^(4)球虫感染具有明显的治疗作用。研究表明,口服纳米氧化锌对堆型艾美耳球虫感染具有一定的防治作用。

关键词：堆型艾美耳球虫纳米氧化锌抗球虫指数

鸡球虫多价多表位亚单位疫苗免疫原性分析及抗球虫感染的效果观察

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南京农业大学学报 2021年第6期44卷 1135-1143页

作者：陈思颖黄剑梅张杨陈玉凤丁文傒刘佳斌徐立新严若峰宋小凯李祥瑞南京农业大学动物医学院动物健康与食品安全MOE联合国际研究实验室江苏南京210095

[目的]本试验旨在评估重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2作为亚单位疫苗候选抗原的潜力。[方法]应用PCR技术分别扩增NA4-1-TA4-1-LDH-2-EMCDPK-1与NA4-1-TA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2基因,用LaserGene分析基因编码蛋白序列特性;表达重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2,经Western blot分析重组蛋白的免疫原性,采用流式细胞术检测蛋白免疫后鸡脾脏中CD^(+)_(4)和CD^(+)_(8) T淋巴细胞的比值,经间接ELISA法检测鸡血清中细胞因子水平和特异性IgG水平以分析重组蛋白的免疫原性。取柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫新鲜卵囊经口感染免疫后的雏鸡,统计平均增重、病变计分、盲肠内容物卵囊数等指标,计算各组抗球虫指数(ACI),评估重组蛋白对球虫感染的免疫保护效果。[结果]LaserGene分析显示重组蛋白拥有密集且连续的T细胞表位,抗原指数高;Western blot分析显示重组蛋白可被4种艾美耳球虫的多克隆抗体识别,重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2均可提高机体CD^(+)_(4)/CD^(+)_(3)和CD^(+)_(8)/CD^(+)_(3)细胞比例,提高血清中IFN-γ、IL-4、IL^(-1)7、TGF-β和IgG抗体水平。以上结果表明重组蛋白具有良好的反应原性和球虫抗原性。免疫重组蛋白后试验组鸡平均增重高于对照组,卵囊产量下降明显,肠道病变程度减轻,抗球虫指数提升。[结论]重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2可作为多价多表位亚单位抗球虫疫苗的候选抗原。

关键词：重组蛋白亚单位疫苗多价多表位疫苗免疫原性抗球虫指数

堆型艾美耳球虫微线蛋白3及其结构域蛋白的免疫保护作用

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南京农业大学学报 2022年第1期45卷 124-130页

作者：刘佳斌张杨王茗悦黄剑梅靖传旭宋小凯徐立新严若峰李祥瑞南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[目的]本文旨在研究堆型艾美耳球虫微线蛋白3(EaMIC3)及其结构域蛋白的免疫保护作用。[方法]经原核表达和纯化获得重组蛋白EaMIC3、EaMAR3和EaMAR6,制备3种蛋白的抗血清并测其效价;分离纯化堆型艾美耳球虫卵囊。在腿部肌肉注射重组蛋白... 详细信息

[目的]本文旨在研究堆型艾美耳球虫微线蛋白3(EaMIC3)及其结构域蛋白的免疫保护作用。[方法]经原核表达和纯化获得重组蛋白EaMIC3、EaMAR3和EaMAR6,制备3种蛋白的抗血清并测其效价;分离纯化堆型艾美耳球虫卵囊。在腿部肌肉注射重组蛋白和翅静脉注射多克隆抗体血清免疫14日龄雏鸡,间隔7 d进行二免,再7 d后攻毒,评估3种蛋白抵抗堆型艾美耳球虫感染的免疫保护作用。[结果]重组蛋白免疫组和抗重组蛋白血清免疫组中,EaMIC3和EaMAR3的抗球虫指数分别为178、165和180、166,而EaMAR6的抗球虫指数分别为130、159。2种免疫方式与对照组相比,EaMIC3和EaMAR3均显示明显的免疫保护效果,且EaMIC3的免疫保护效果最好,而EaMAR6的免疫保护效果较差。[结论]结构域蛋白的免疫保护作用与其和肠上皮细胞的结合能力一致,也证明结构域蛋白在球虫入侵过程中的关键作用。

关键词：堆型艾美耳球虫微线蛋白3 结构域蛋白免疫保护效果

巨型艾美耳球虫微线蛋白3结构域蛋白的免疫保护作用

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中国兽医学报 2021年第8期41卷 1539-1545页

作者：刘佳斌张杨王茗悦黄剑眉靖传旭宋小凯徐立新严若峰李祥瑞南京农业大学动物医学院江苏南京210095

巨型艾美耳球虫是4种严重危害养禽业的鸡球虫之一。实验室前期研究发现,巨型艾美耳球虫微线蛋白3 (EmMIC3)能够与肠上皮细胞结合,经细胞ELISA、间接免疫荧光及子孢子侵入抑制试验发现,EmMIC3的5个结构域中EmMAR2与小肠上皮细胞结合能力... 详细信息

巨型艾美耳球虫是4种严重危害养禽业的鸡球虫之一。实验室前期研究发现,巨型艾美耳球虫微线蛋白3 (EmMIC3)能够与肠上皮细胞结合,经细胞ELISA、间接免疫荧光及子孢子侵入抑制试验发现,EmMIC3的5个结构域中EmMAR2与小肠上皮细胞结合能力最强,EmMAR5与小肠上皮细胞结合能力最弱。本研究经原核表达和纯化获得重组蛋白EmMIC3、EmMAR2和vMAR5,并制备了这3种蛋白的抗血清。通过分别注射重组蛋白和多克隆抗体评估3种蛋白抵抗巨型艾美耳球虫感染的免疫保护作用。结果显示:免疫EmMIC3、EmMAR2和EmMAR5均能够提高抗原特异性IgY抗体水平;重组蛋白免疫组中,EmMIC3和EmMAR2的抗球虫指数分别为180.70和70.82,而EmMAR5的抗球虫指数为137.69;重组蛋白抗血清免疫组中,EmMIC3和EmMAR2的抗球虫指数分别为180.49和164.60,而EmMAR5的抗球虫指数为137.37。上述结果表明,不管是重组蛋白免疫组还是重组蛋白抗血清免疫组,与对照组相比,EmMIC3和EmMAR2都具有明显的免疫保护效果,且MIC3的免疫保护效果最好,而EmMAR5则不具有免疫保护效果。结构域蛋白EmMAR2的免疫保护效果不及EmMIC3,启示虽然EmMAR2具有较好的免疫保护效果,但是要发挥更好的抵抗巨型艾美耳球虫感染的免疫保护效果,可能需要其他4种结构域蛋白的协同作用。

关键词：巨型艾美耳球虫微线蛋白3 结构域蛋白2 结构域蛋白5 免疫保护效果

山羊重组IL-17A克隆表达与生物活性分析

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畜牧与兽医 2018年第6期50卷 62-67页

作者：王雯娟王强强田晓薇陆明敏严若峰徐立新宋小凯李祥瑞南京农业大学动物医学院

为了分析山羊白介素17A（IL-17A）对山羊单核、中性粒细胞功能的影响,采用RT-PCR方法对山羊IL-17A基因进行克隆,并在体外表达得到重组蛋白质（rIL-17A）,以不同质量浓度的重组蛋白rIL-17A（5、10、20、40μg/mL）与单核细胞和中性粒细... 详细信息

为了分析山羊白介素17A（IL-17A）对山羊单核、中性粒细胞功能的影响,采用RT-PCR方法对山羊IL-17A基因进行克隆,并在体外表达得到重组蛋白质（rIL-17A）,以不同质量浓度的重组蛋白rIL-17A（5、10、20、40μg/mL）与单核细胞和中性粒细胞共孵育,测定rIL-17A对山羊单核细胞和中性粒细胞的迁移、中性粒细胞凋亡的免疫调节效应。结果显示：5、20、40μg/mL的rIL-17A能够极显著促进山羊单核细胞的迁移（P〈0.01）,10μg/mL的rIL-17A也能显著促进山羊单核细胞的迁移（P〈0.05）;与中性粒细胞共孵育时,10μg/mL（P〈0.05）和20、40μg/mL（P〈0.001）的rIL-17A能显著或极显著促进山羊中性粒细胞的迁移;20μg/mL（P〈0.05）、40μg/mL（P〈0.001）的rIL-17A能显著或极显著诱导山羊中性粒细胞的凋亡。结果表明：重组蛋白rIL-17A具有良好的生物学活性,能在体外不同程度地促进山羊单核细胞、中性粒细胞的迁移及中性粒细胞的凋亡。

关键词：白介素17A 单核细胞中性粒细胞山羊

鸭坦布苏病毒RNA依赖RNA聚合酶的真核表达及生物信息学分析

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华北农学报 2021年第6期36卷 204-210页

作者：韩凯凯严若峰刘青涛刘宇卓李银赵冬敏黄欣梅章丽娇杨婧付晨南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 江苏大学生命科学学院江苏镇江212013

旨在对鸭坦布苏病毒NS5蛋白功能基团RNA依赖RNA聚合酶进行真核表达,同时对其蛋白结构和功能进行生物信息学分析。首先查找GenBank数据库中收录的DTMUV基因序列,以RdRp基因为研究对象,通过软件设计并合成特异性引物,RT-PCR技术扩增RdRp基... 详细信息

旨在对鸭坦布苏病毒NS5蛋白功能基团RNA依赖RNA聚合酶进行真核表达,同时对其蛋白结构和功能进行生物信息学分析。首先查找GenBank数据库中收录的DTMUV基因序列,以RdRp基因为研究对象,通过软件设计并合成特异性引物,RT-PCR技术扩增RdRp基因,回收PCR产物并与pCMV-N-Flag真核表达载体相连接,构建真核表达质粒pCMV-Flag-RdRp,将测序无误的质粒转染至BHK-21细胞,通过Western Blot和间接免疫荧光技术检测该蛋白在BHK-21细胞内的表达。同时针对RdRp蛋白,利用生物信息学软件进行序列分析、结构解析及功能预测。通过PCR方法成功扩增RdRp基因,构建的真核表达质粒pCMV-Flag-RdRp经双酶切鉴定证明正确,进一步通过间接免疫荧光技术与Western Blot检测发现,重组质粒pCMV-Flag-RdRp在BHK-21细胞内正常表达,生物信息学分析发现,RdRp蛋白编码606个氨基酸,分子式为C_(3091)H_(4810)N_(870)O_(894)S_(41),编码蛋白亲水性平均系数为-0.536,不稳定指数为42.15,含有丰富的磷酸化位点及O-糖基化位点。其二级结构包含46.37%的α-螺旋、12.54%的延伸链以及35.31%的无规则卷曲。上述结果为进一步研究坦布苏病毒致病性打下了基础。

关键词：鸭坦布苏病毒 RNA依赖RNA聚合酶生物信息学

Dichlorination in a circulating fluidized-bed incinerator for municipal solid waste incineration system

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Waste Disposal and Sustainable Energy 2019年第3期1卷 207-212页

作者： Yaming Cai Zengyi Ma Jianhua yan Yike Zhang Zhe Chen ruofeng Gao Pucheng Zhong State Key Laboratory of Clean Energy Utilization/Ningbo Research Institute Zhejiang UniversityHangzhou 310027ZhejiangChina

Cl is one of the main pollutants emitted from domestic waste incineration systems. In this study, we focused on the process of Ca dechlorination in the furnace of a circulating fluidized-bed waste incineration system. We analyzed the stability of CaCl_(2) and Ca in the furnace, the dechlorination process, and distribution of Cl in the incineration system. The results show that the optimal Ca/Cl molar ratio for Ca dechlorination in the circulating fluidized-bed waste incinerator is 2:1;moreover, the dechlorination product CaCl_(2) was found to decompose at high temperatures (> 850℃). At temperatures > 700℃, we measured CaCl_(2) decomposition rates up to 80%. Ca was added in the furnace, mainly to provide a dechlorination Ca source for the decomposition of limestone into tail flue gas. The amount of Ca^(2+) in the flue decreased gradually, parallelly to the temperature of the flue gas. Stable CaCl_(2) was formed after HCl was captured, and relatively small solid particles appeared in the ash collecting bag.

关键词： Waste incineration HCl Ca-based Dichlorination

L-丙交酯和D,L-丙交酯共聚物立体化学构型的计算机模拟

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计算机与应用化学 2007年第5期24卷 659-664页

作者：吴雁吴若峰陶燕华何佩华上海大学材料学院高分子系上海201800

运用Monte Carlo法,模拟D,L-丙交酯(DLLA)与L-丙交酯(LLA)共聚体系,在不同投料比情况下的立体化学构型,计算了两种立体异构体在共聚高分子链中所占的比例,与各种异构体序列的长度分布;计算了轮数R;分析了竞聚率r和投料比p对DLLA-LLA共... 详细信息

运用Monte Carlo法,模拟D,L-丙交酯(DLLA)与L-丙交酯(LLA)共聚体系,在不同投料比情况下的立体化学构型,计算了两种立体异构体在共聚高分子链中所占的比例,与各种异构体序列的长度分布;计算了轮数R;分析了竞聚率r和投料比p对DLLA-LLA共聚物的立体化学结构的影响,发现r直接影响立体异构序列的交替程度;计算了共聚链上四单元组和六单元组的含量,引用文献提供的13C NMR谱图进行验证;研究了共聚组成、重均序列长度等模拟结果与某些物性实验数据之间的关系,发现共聚物的结晶速率和一定范围内的重均序列长度有关。

关键词： L-丙交酯 D,L-丙交酯共聚立体化学构型计算机模拟