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醋柳黄酮对大鼠心室肌细胞瞬间外向整流钾电流的影响

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中国药理学通报 2007年第9期23卷 1237-1240页

作者：邝素娟邓春玉钱卫民单志新吴书林杨敏余细勇林曙光广东省人民医院医学研究中心广东省心血管病研究所广东广州510080

目的探讨醋柳黄酮对大鼠心室肌细胞膜瞬间外向钾电流(Ito)的影响。方法用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,标准的全细胞膜片钳技术记录瞬间外向钾电流。结果①醋柳黄酮呈浓度和电压依赖性抑制Ito,在+50mV时,0.06、0.1和0.14g.L-1醋柳... 详细信息

目的探讨醋柳黄酮对大鼠心室肌细胞膜瞬间外向钾电流(Ito)的影响。方法用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,标准的全细胞膜片钳技术记录瞬间外向钾电流。结果①醋柳黄酮呈浓度和电压依赖性抑制Ito,在+50mV时,0.06、0.1和0.14g.L-1醋柳黄酮分别阻断Ito峰电流(18.34±0.99)%、(25.32±1.43)%和(38.88±1.96)%。②0.14g.L-1醋柳黄酮使Ito失活曲线明显左移,但对激活和复活曲线无影响。结论醋柳黄酮呈浓度和电压依赖性抑制心肌细胞Ito,这可能是其抗心律失常作用的重要机制之一。

关键词：醋柳黄酮膜片钳技术心肌细胞瞬间外向钾通道电流

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哺乳期生理药代动力学模型的研究及应用现状

中国临床药理学杂志 2023年第11期39卷 1662-1666页

作者：苏健芬张灿华梁智敏余细勇杨辉广州市番禺区中心医院药学部广东广州511400 广州医科大学附属第六医院药学部、清远市人民医院药学部广东清远511518 广东医科大学药学院广东东莞523808 广州医科大学药学院广东广州511436

母乳喂养是婴儿出生后喂养的最佳形式,对婴儿的健康发育十分重要。目前临床上存在母亲用药导致婴儿出现毒性反应的病例,且大多数药物缺乏关于母乳喂养期间用药安全性的信息,这导致尽管很多药物可能是安全的,哺乳期女性仍然选择终止治疗... 详细信息

母乳喂养是婴儿出生后喂养的最佳形式,对婴儿的健康发育十分重要。目前临床上存在母亲用药导致婴儿出现毒性反应的病例,且大多数药物缺乏关于母乳喂养期间用药安全性的信息,这导致尽管很多药物可能是安全的,哺乳期女性仍然选择终止治疗或停止喂养。为了鼓励母乳喂养,需要在母亲开始母乳喂养或药物治疗之前进行药物治疗风险评估。不幸的是,由于人类哺乳期研究受限较大,目前的临床数据匮乏,而以体外和动物模型为主的实验数据也并不能完全拟合人体生理。因此,经过验证的非临床方法——基于生理学的药代动力学(PBPK)模型可能是一种有效的方法,预测药物转移到母乳中的程度,填补这一领域的信息空白。本文概述了哺乳期的用药现状、体内外研究现状和方法,以及哺乳期PBPK模型的研究实例。PBPK模型在哺乳期药物研究中意义重大,今后的发展应整合现有模型及相关数据,结合实际情况选择合适的模型,不断提高哺乳期PBPK模型对临床常用药物预测的准确性。

关键词：哺乳期生理药代动力学模型研究进展应用现状

广州管圆线虫抗原IF的中间纤维蛋白组织来源分析和定位

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南方医科大学学报 2007年第8期27卷 1141-1144页

作者：孟锦绣何蔼程梅徐贵峰李卓雅余细勇蒋文玲李运雄詹希美广东省人民医院医学研究中心广东广州510080 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广东广州510089

目的对广州管圆线虫抗原IF进行中间纤维蛋白家族分类和细胞组织定位。方法IPTG诱导重组基因pET-IF在大肠杆菌中表达广州管圆线虫抗原IF,用组氨酸亲和层析纯化表达产物,用Western blot方法鉴定抗原IF的中间纤维蛋白类型;小鼠皮下多点注... 详细信息

目的对广州管圆线虫抗原IF进行中间纤维蛋白家族分类和细胞组织定位。方法IPTG诱导重组基因pET-IF在大肠杆菌中表达广州管圆线虫抗原IF,用组氨酸亲和层析纯化表达产物,用Western blot方法鉴定抗原IF的中间纤维蛋白类型;小鼠皮下多点注射法制备抗IF抗体血清,用免疫组织化学方法检测抗原IF在虫体组织和细胞上的定位。结果广州管圆线虫抗原IF在体外成功表达并纯化,其属于中间纤维蛋白家族的角蛋白,定位于广州管圆线虫成虫肠管壁,存在于细胞质中。结论广州管圆线虫抗原IF分布于虫体肠管壁,同时从组织学角度证明广州管圆线虫存在中间纤维结构。

关键词：广州管圆线虫抗原中间纤维抗原定位

缺氧心肌细胞来源外泌体对Gli1^+细胞纤维化表型转换的作用机制

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中国药理学通报 2019年第11期35卷 1509-1515页

作者：林潮金秦爱萍李松沛霍然邓赛傅小媚向杨余细勇广州医科大学药学院广东省分子靶标与临床药理学重点实验室呼吸疾病国家重点实验室药理学组

目的观察缺氧心肌细胞来源外泌体对Gli1 +细胞纤维化过程的影响,并探讨其可能的机制。方法分离Gli1 +细胞和SD乳鼠心肌细胞。心肌细胞分别进行常氧和缺氧培养,收集培养基并提取外泌体,用透射电镜、Nanosight、Western blot等方法对其... 详细信息

目的观察缺氧心肌细胞来源外泌体对Gli1 +细胞纤维化过程的影响,并探讨其可能的机制。方法分离Gli1 +细胞和SD乳鼠心肌细胞。心肌细胞分别进行常氧和缺氧培养,收集培养基并提取外泌体,用透射电镜、Nanosight、Western blot等方法对其鉴定。两种外泌体分别与Gli1 +细胞共培养。RT-qPCR法检测这两种外泌体并对比分析,明确其中起关键调控作用的miRNA。转染miRNA模拟物观察Gli1 +细胞中纤维化相关蛋白的表达水平。结果 Gli1 +细胞强阳性表达CD29、CD105和Gli1,不表达CD31、CD34和CD45。心肌细胞表达cTnT和α-Actinin,其外泌体直径约100 nm,并检测到Flotillin-1、Alix、HSP-70和CD63。缺氧处理外泌体中miR-223明显上调( P <0.01);Gli1 +细胞经缺氧外泌体和 miR-223 mimic处理,纤维化相关的蛋白α-SMA( P <0.01, P <0.05)、DDR-2( P <0.01, P <0.01)和collagen I( P <0.05, P <0.01)的表达都明显升高。结论缺氧心肌细胞外泌体能促进Gli1 +细胞内纤维化相关蛋白的表达,使其向纤维化表型转换,这一作用可能与外泌体中高表达的miR-223有关。

关键词：心肌细胞 Gli1 +细胞缺氧外泌体 miRNA 纤维化

Plasma miR-126 as a potential marker predicting major adverse cardiac events in patients after percutaneous coronary intervention

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中国病理生理杂志 2012年第11期 2014-2014页

作者： ZHENG Zhi-wei,yu xi-yong,CHEN Ji-yan,WU Hong,LI Li-wen,CHEN Zhi-hong,HAN Ya-Ling,ZHONG Shi-Long(Guangdong General Hospital,Guangdong Cardiovascular Institute,Guangzhou 510080,China)

AIM:Circulating miRNAs have been considered as promising novel biomarkers for prognosis of cardiovascular *** present study was aimed to evaluate the contribution of plasma miRNAs regulating the biology of endothelium... 详细信息

关键词： MACE PCI Plasma miR-126 as a potential marker predicting major adverse cardiac events in patients after percutaneous coronary intervention

血管紧张素转换酶2基因转染对人内皮细胞MIF表达的影响

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中国病理生理杂志 2008年第10期24卷 1922-1926页

作者：钟久昌余细勇郭俊明林秋雄龚朝辉刘琼宁波大学医学院分子高血压病研究室生物化学与分子生物学研究所浙江宁波315211 广东省人民医院医学研究中心广东广州510080

目的:探讨重组血管紧张素转换酶2(ACE2)基因转染对体外培养的人血管内皮细胞中由血管紧张素(Ang)II诱导的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响。方法:克隆和构建含人ACE2基因全长的重组质粒(pACE2),并将之转染入人血管内皮细胞中。分... 详细信息

目的:探讨重组血管紧张素转换酶2(ACE2)基因转染对体外培养的人血管内皮细胞中由血管紧张素(Ang)II诱导的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响。方法:克隆和构建含人ACE2基因全长的重组质粒(pACE2),并将之转染入人血管内皮细胞中。分别采用实时定量PCR和Western印迹技术检测转染细胞中的MIFmRNA与蛋白表达情况。结果:AngⅡ(100nmol/L)和AngIV(100nmol/L)刺激后均可诱导人血管内皮细胞中MIFmRNA及蛋白表达增加(P<0.01)。pACE2基因转染可明显抑制内皮细胞中由AngII和AngIV诱导的MIFmRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:ACE2基因过表达可明显抑制人内皮细胞中炎症介质MIF的表达,提示ACE2基因具有一定的抗炎症效应。通过调节ACE2基因的活性和表达,很可能为炎症相关疾病如动脉粥样硬化治疗提供新的策略。

关键词：血管紧张素转换酶2 巨噬细胞游走抑制因子血管紧张素Ⅱ 炎症

用小双链RNA抑制转化入HUVEC中绿色荧光蛋白基因的表达

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中国病理生理杂志 2006年第2期22卷 262-265页

作者：单志新林秋雄余细勇邓春玉郑猛谭虹虹符永恒杨敏林曙光广东省人民医院医学研究中心广东广州510080

目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),研究小干扰RNA(siR-NA)对HUVECs中GFP表达的抑制作用。方法:用lipofectamine2000将编码GFP的质粒pN3-EGFP转入HUVECs中。用G418筛选并维持已转化pN3-EGFP的HUVEC(HUVEC-GFP)。利用T7RNA转录试剂盒,制备可抑制GFP基因表达的siRNA(GFPsiRNA)和无关对照的RNA(control siRNA)。用oligofectamine将siRNA转入HUVEC-GFP中。继续培养48h后,检测HUVEC-GFP中GFP蛋白和mRNA表达水平。结果:用G418筛选获得了HUVEC-GFP细胞株,可以观察到GFP的稳定表达。HUVEC-GFP转化siRNA后48h,GFP的荧光强度明显下降,而对照组的荧光强度无明显下降。半定量RT-PCR检测显示,GFPsiRNA对GFP mRNA表达有较强的抑制作用,抑制率达40%,而control siRNA对GFP mRNA表达水平无明显的抑制作用。结论:利用体外转录合成的siRNA能有效地抑制HUVECs中GFP的表达。

关键词： RNA干扰绿色荧光蛋白人脐静脉血管内皮细胞脂质体

人工外泌体共递送siRNA和蛋白的递送系统的设计及体外评价

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药学学报 2020年第1期55卷 139-145页

作者：邓赛张灵敏王萍李仕颖林潮金傅小媚余细勇广州医科大学广东省分子靶标与临床药理学重点实验室呼吸疾病国家重点实验室药理组

本文制备了人工外泌体,共传递蛋白和核酸,实现多组分药物高效安全共传递。采用阳离子脂质赋形剂二油酰基三甲基铵丙烷(dioleyl trimethylammonium propane, DOTAP)修饰聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylactic acidglycolic acid copolymer, P... 详细信息

本文制备了人工外泌体,共传递蛋白和核酸,实现多组分药物高效安全共传递。采用阳离子脂质赋形剂二油酰基三甲基铵丙烷(dioleyl trimethylammonium propane, DOTAP)修饰聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylactic acidglycolic acid copolymer, PLGA)基质来设计优化的制剂,双乳化法制备包裹蛋白和核酸的PLGA/DOTAP纳米粒,再用逆相蒸发法制备最外层的膜结构,此膜结构由二棕榈酰磷脂酰胆碱(1, 2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,DPPC)、二油酰磷脂酰胆碱(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DOPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(1,2-distearoylsn-glycero-3-phosphocholine, DSPC)、胆固醇及膜蛋白组成,通过超声分散和挤出的方式形成人工外泌体结构,并分析其物理特性和传递效果性质。结果表明,人工外泌体粒径约为156.13 nm,带负电荷(-18.23±0.57 mV),能高效共传递蛋白和siRNA,且siRNA能高效抑制目标基因Trim 28的表达。这说明人工外泌体模拟了外泌体结构,实现了多组分药物安全高效的共递送。

关键词：人工外泌体聚乳酸-羟基乙酸共聚物脂质体纳米材料药物递送

表达载体介导的反义RNA抑制人巨噬细胞移动抑制因子的表达

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中国病理生理杂志 2006年第7期22卷 1263-1267页

作者：单志新林秋雄余细勇邓春玉杨敏符永恒谭虹虹郑猛林曙光广东省人民医院医学研究中心

目的:研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用。方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF。用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-M... 详细信息

目的:研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用。方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF。用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-MIF)细胞,用Real-time定量PCR鉴定MIFmRNA表达水平。将pcDNA3-antiMIF转化人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),建立可表达MIF反义RNA的HUVECs(HUVECs-antiMIF)细胞。将MIF的真核表达载体pSecTag-MIF转染HUVECs-antiMIF,用Real-time定量PCR鉴定MIFmRNA的表达水平。结果:正确构建了MIF反义RNA的表达载体pcDNA3-antiMIF。MIF反义RNA对293-MIF细胞中MIF表达的抑制水平达32%(P<0.05)。建立稳定表达MIF反义RNA的HUVECs-antiMIF细胞株。HUVECs-antiMIF中MIF的表达受到抑制,表达水平降低40%(P<0.05)。结论:表达载体介导的反义RNA能有效地抑制MIF的表达,建立了稳定表达MIF反义RNA的HUVECs。

关键词：巨噬细胞游走抑制因子 RNA,反义人脐静脉血管内皮细胞脂质体