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DsbA-DsbAmut fusion chaperon improved soluble expression of human trypsinogen-1 in Escherichia coli

Frontiers of Chemical Science and Engineering 2015年第4期9卷 511-521页

作者： Ye Liu Wenyong Zhang xubin yang Guangbo Kang Damei Wang He Huang Key Laboratory of System Bioengineering Department of Biochemical Engineering School of Chemical Engineering and Technology Tianjin University Tianjin 300072 China Collaborative Innovation Center of Chemical Science and Engineering Tianjin 300072 China College of Food Engineering and Biotechnology Tianjin University of Science and Technology Tianjin 300072 China Gan & Lee Pharmaceuticals Beijing 101100 China Taiyuan Institute of Technology Taiyuan 030000 China

A co-expressing system ofDsbA-DsbAmut was suggested for the first time to enhance the soluble expression of human trypsin-1. As a control, leaderless DsbA chaperone was also co-expressed with human trypsin-1. Vectors pET39b-trypsin and pET28a-DsbA- DsbAn^ut-trypsin with the above two DsbA fusion tag were constructed. The strain with vector pET39b-trypsin expressed fusion protein DsbA-trypsin in form of inclusion bodies. While in E. coli BL21 （DE3） strain with vector pET28a-DsbA-DsbAmUt-trypsin, the soluble expression of trypsin fusion protein was achieved. Under the optimized expression conditions, the soluble fraction accounted for about 49.43% of total DsbA-DsbAmUt-trypsin proteins in crude supernatant. The purification yield was 4.15% by nickel chelating chromatography and 3.3 mg activated trypsin with a purity of 88.68% was obtained from 1 L LB broth. To detect the possible functions of DsbA series chaperons in trypsin fusion protein, we analyzed the primary three-dimensional structure of fusion proteins, mainly focusing on the compatibleness between trypsin and fusion chaperons. The results suggested that （1） besides the primary function in periplasm, leaderless DsbA or DsbAmut may also act as a signal sequences-like leader targeted to periplasm that partly relieved the pressure from fusion protein overexpression and inclusion body formation, and （2） as there was significant soluble expression of DsbA-DsbAmUt-trypsin compared with DsbA-trypsin, DsbArout may function as charge or hydrophobic balance in recombinant protein DsbA-DsbAmut- trypsin.

关键词： DsbA DsbA-DsbAmut soluble expression,trypsin chaperon

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Insulin requirement profiles and related factors of insulin pump therapy in patients with type 2 diabetes

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Science China(Life Sciences) 2019年第11期62卷 1506-1513页

作者： xubin yang Hongrong Deng Xiuzhen Zhang Daizhi yang Jinhua Yan Bin Yao Jianping Weng Wen Xu Department of Endocrinology and Metabolism Guangdong Provincial Key Laboratory of Diabetologythe Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen UniversityGuangzhou 510630China Department of Endocrinology and Metabolism Shenzhen People s HospitalShenzhen 518020China Department of Endocrinology of the First Affiliated Hospital Division of Life Sciences and Medicine of the University of Science and Technology of China(USTC)Hefei 230026China

Continuous subcutaneous insulin infusion(CSII)is an effective therapy to control hyperglycemia in both patients with type 1 diabetes and type 2 ***,there is little data investigating the insulin dose setting during CSII therapy in type 2 diabetes to achieve optimal glycemic control and avoid the risk of ***,this study is aimed to assess the dose characteristics of insulin requirement and explore the related clinical factors in patients with type 2 diabetes who were treated with CSII.A total of 327 patients(195 males)aged 52.9±12.5 years old were included in this *** were treated with CSII to achieve the target fasting capillary blood glucose(4.4-7.0 mmol L^(-1))and 2-h postprandial capillary blood glucose(4.4-10.0 mmol L^(-1))by adjusting insulin infusion according to the seven-point capillary blood glucose *** daily insulin dose(TDD),total daily insulin dose per kilogram(TDD kg-1)and the ratio of total basal insulin dose(TBD)to TDD(%TBa)were calculated after patients achieved the glucose targets for at least 3 days via 1-2 weeks of CSII *** insulin dose,insulin dosing patterns and the relevant clinical factors were *** mean ratio of basal/bolus insulin distribution of all patients was 40%:60%.Patients with central obesity needed more TDD(51.3±17.1 U versus 43.5±14.0 U,P<0.05)and TDD kg^(-1)(0.8±0.3 U kg^(-1)versus 0.7±0.2 U kg^(-1),P<0.05)than those without central ***'s correlation analysis demonstrated that TDD was positively correlated with body mass index(BMI),waist circumference(WC),baseline fasting plasma glucose(FPG),fasting C-peptide level,2 h-postprandial C-peptide level and time to achieve glycemic target(all P<0.05);TDD kg^(-1)was positively correlated with waist-to-hip ratio(WHR),baseline FPG,glycosylated hemoglobin Ale(HbAlc),fasting C-peptide level and time to achieve glycemic target,and negatively correlated with BMI(all P<0.05).Multiple linear regression analyses reveale

关键词： continuous subcutaneous insulin infusion insulin requirement profiles type 2 diabetes

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Decreased b-Cell Function is Associated with Cardiovascular Autonomic Neuropathy in Chinese Patients Newly Diagnosed with Type 2 Diabetes

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Neuroscience Bulletin 2019年第1期35卷 25-33页

作者： xubin yang Wen Xu Yanhua Zhu Hongrong Deng Ying Tan Longyi Zeng Jianping Weng Department of Endocrinology and Metabolism Guangdong Provincial Key Laboratory of DiabetologyThird Affiliated Hospital of Sun Yat-sen UniversityGuangzhou 510630China

The influence of b-cell function on cardiovascular autonomic neuropathy(CAN), an important diabetesrelated complication, is still unclear. In this study, we aimed to investigate the association between residual b-cell function and CAN in patients newly diagnosed with type 2 diabetes. We enrolled 90 newly-diagnosed type 2 diabetic patients and 37 participants with normal glucose tolerance as controls. The patients were divided into a CAN? group(diabetic patients with CAN, n = 20) and a CAN-group(diabetic patients without CAN, n = 70) according to the standard Ewing battery of tests. Fasting and postprandial plasma glucose, insulin, and C-peptide were *** model assessment-beta cells(HOMA-B) and HOMA-insulin resistance(IR) were calculated. The prevalence of CAN in this population was 22.2%. Compared with the CAN-group, the CAN? group had significantly lower fasting plasma insulin(6.60 ± 4.39 vs 10.45 ± 7.82 l/L, P = 0.029), fasting C-peptide(0.51 ± 0.20 vs0.82 ± 0.51 nmol/L, P = 0.004), and HOMA-B(21.44 ± 17.06 vs 44.17 ± 38.49, P = 0.002). Fasting C-peptide was correlated with the Valsalva ratio(r = 0.24, P = 0.043) and the 30:15 test(r = 0.26,P = 0.023). Further analysis showed that fasting C-peptide(OR: 0.041, 95% CI 0.003–0.501, P = 0.012) and HOMAB(OR: 0.965, 95% CI 0.934–0.996, P = 0.028) were independently associated with cardiovascular autonomic nerve function in this population. The patients with fasting C-peptide values \ 0.67 nmol/L were more likely to have CAN than those with C-peptide levels C0.67 nmol/L(OR:6.00, 95% CI 1.815–19.830, P = 0.003). A high prevalence of CAN was found in patients with newly-diagnosed type 2 diabetes. Decreased b-cell function was closely associated with CAN in this population.

关键词： Cardiovascular autonomic neuropathy b-cell function Type 2 diabetes mellitus

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风廓线雷达资料对华南区域模式预报的影响

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应用气象学报 2017年第5期28卷 600-610页

作者：邓华廖菲张旭斌时洋中国气象局广州热带海洋气象研究所/区域数值天气预报重点实验室广州510640 广东省生态气象中心广州510640 广东省广州市气象台广州511430 广东省气象台广州510640

设计基于GRAPES_Meso的不同试验模拟2014年3月28日-4月8日的广东前汛期降水过程,评估风廓线资料对同化和预报的影响。对资料同化后分析增量的分析表明:相比同化时仅使用自动气象站资料,风廓线雷达资料对1000 hPa到850 hPa纬向风增量均... 详细信息

设计基于GRAPES_Meso的不同试验模拟2014年3月28日-4月8日的广东前汛期降水过程,评估风廓线资料对同化和预报的影响。对资料同化后分析增量的分析表明:相比同化时仅使用自动气象站资料,风廓线雷达资料对1000 hPa到850 hPa纬向风增量均有贡献,在850 hPa,700 hPa高度以上贡献迅速减小。应用3个试验的预报结果计算探空站、风廓线雷达站预报值与观测值的11 d均方根误差发现,同化加入风廓线雷达资料对各预报要素的改善在850 hPa高度最明显,其中风速预报误差显著降低,为0.7 m·s^(-1)。此外,风廓线雷达资料对700 hPa风速预报有一定改善,而在925 hPa高度模拟效果反而降低。通过对2014年3月30日12:00(世界时)的个例分析发现,同化加入风廓线雷达资料的风速预报均方根误差在大雨级别以上的降水落区更大,其原因还有待于进一步研究。

关键词：风廓线雷达资料同化华南区域模式

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移动自组织网络中服务质量路由协议的研究与展望

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计算机应用 2015年第A02期35卷 11-13,26页

作者：杨绪彬张文强解放军理工大学通信工程学院南京210007

移动自组织网(MANET)是由一组带有无线通信收发装置的移动终端节点组成的一种多跳的临时性无中心网络,它具有易组建、自组织等许多独特的优点。随着移动自组织网在民用领域和军用领域的深入应用和多媒体业务的增加,在移动自组织网中为... 详细信息

移动自组织网(MANET)是由一组带有无线通信收发装置的移动终端节点组成的一种多跳的临时性无中心网络,它具有易组建、自组织等许多独特的优点。随着移动自组织网在民用领域和军用领域的深入应用和多媒体业务的增加,在移动自组织网中为用户提供服务质量(QoS)保障越来越重要,而QoS路由协议是实现QoS保障的核心,也一直是该领域的一个研究热点。简要地描述了移动自组织网中五种典型的QoS路由协议并对这些协议从不同角度进行了比较,针对移动自组网QoS路由协议存在的几个突出问题指出了当前的几个研究热点,最后对未来移动自组织网中QoS路由协议的研究进行了展望。

关键词：移动自组织网络服务质量路由协议 QoS参数 QoS约束

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三维观测系统野外现场设计

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江汉石油职工大学学报 2017年第4期30卷 5-7页

作者：杨序斌中石化石油工程地球物理有限公司地理地质信息勘查分公司湖北武汉430070

在复杂地表区进行地震采集施工十分困难,主要表现为地表障碍造成的空炮或空道形成剖面缺口及对目的层有效覆盖次数、地震资料品质的影响。在地震采集野外现场设计中,本着安全、质量、超前(设计)、技术、成本等"五大意识",把握好工区全... 详细信息

在复杂地表区进行地震采集施工十分困难,主要表现为地表障碍造成的空炮或空道形成剖面缺口及对目的层有效覆盖次数、地震资料品质的影响。在地震采集野外现场设计中,本着安全、质量、超前(设计)、技术、成本等"五大意识",把握好工区全信息收集的各个环节,并根据障碍物的特殊情况,以尽可能减少恢复放炮距离、剖面缺口及炮点分布均匀为原则,灵活运用纵横向变观方法,有效地降低了地震采集复杂困难地表对施工质量的影响,保证了资料品质。

关键词：三维观测系统现场设计复杂地表全信息收集

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低促性腺激素性性腺功能减退症患者胰岛功能评价

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现代诊断与治疗 2013年第15期24卷 3363-3364页

作者：杨旭斌朱延华中山大学附属第三医院内分泌与代谢病学科广东广州510630

目的总结评价低促性腺激素性性腺功能减退症患者的胰岛功能。方法选取2009年11月-2010年9月期间我院收治的10例低促性腺激素性性腺功能减退症患者（IHH组）和10例正常体检者（对照组）为研究对象,分析比较性激素与胰岛功能之间的关系。... 详细信息

目的总结评价低促性腺激素性性腺功能减退症患者的胰岛功能。方法选取2009年11月-2010年9月期间我院收治的10例低促性腺激素性性腺功能减退症患者（IHH组）和10例正常体检者（对照组）为研究对象,分析比较性激素与胰岛功能之间的关系。结果 IHH组患者T、FSH、LH水平明显低于对照组,且差异具有统计学意义（P〈0.05）;IHH组空腹胰岛素、餐后2h胰岛素、HOMA-IR、HOMA-β等指标明显高于对照组,且差异具有统计学意义（P〈0.05）;性激素与胰岛功能呈负相关性。结论 IHH患者胰岛素水平高于正常人,且性激素越低者胰岛素水平越高。

关键词：低促性腺激素性性腺功能减退症胰岛功能

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高糖诱导沉默信息调节因子1的氧连乙酰葡萄糖胺糖基化促进心肌细胞凋亡的机制研究

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中华糖尿病杂志 2022年第10期14卷 1069-1079页

作者：陈雪雁许欢林倍思许雯邓洪容杨旭斌中山大学附属第三医院内分泌与代谢病科广州510630

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)的氧连乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化修饰介导的核因子(NF)-κB信号通路对心肌细胞损伤的调节作用。方法为了分析O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)对SIRT1功能的影响, 将H9c2细胞分为正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG... 详细信息

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)的氧连乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化修饰介导的核因子(NF)-κB信号通路对心肌细胞损伤的调节作用。方法为了分析O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)对SIRT1功能的影响, 将H9c2细胞分为正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG, 30 mmol/L)组、HG+对照小干扰RNA(HG+siNC)组、HG+OGT siRNA(HG+siOGT)组、HG+对照质粒(HG+vector)组、HG+OGT过表达质粒(HG+OGT)组, 每组6个复孔。为了分析O-GlcNAc糖基化对SIRT1蛋白功能的影响, 将H9c2细胞分为NG组、HG组、HG+二甲基亚砜(HG+DMSO)组、HG+OGT抑制剂(HG+Ac-5SGlcNAc)组和HG+OGA抑制剂(HG+NButGT)组, 每组6个复孔。为了分析O-GlcNAc修饰位点突变对SIRT1功能的影响, 将H9c2细胞分为NG组、HG组、HG+Vector组、HG+SIRT1WT组和HG+SIRT1S549A组, 每组6个复孔。采用Western blotting检测细胞中SIRT1蛋白表达和O-GlcNAc糖基化修饰水平, 以及NF-κB信号通路表达水平, 使用2′, 7′-二氯荧光素和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测试剂盒检测细胞活性氧(ROS)和凋亡水平, 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果与NG组相比, HG组H9c2细胞中SIRT1蛋白降低(P<0.001), OGT的表达水平升高(P<0.001), 同时H9c2细胞ROS和凋亡水平增加(P<0.05), NF-κB信号通路介导的炎症反应被激活(P<0.05);与HG+siNC组和HG+DMSO组比较, HG+siOGT组和HG+Ac-5SGlcNAc组H9c2细胞中SIRT1的O-GlcNAc修饰水平均降低(P<0.001), 细胞内ROS和凋亡水平降低(P<0.05), NF-κB信号通路介导的炎症反应被抑制(P<0.05);与HG+Vector组和HG+DMSO组比较, HG+OGT组和HG+NButGT组H9c2细胞中SIRT1的O-GlcNAc修饰水平增加(P<0.05), 细胞ROS和凋亡水平增加(P<0.05), NF-κB信号通路介导的炎症反应被激活(P<0.05)。与HG+SIRT1WT组比较, HG+SIRT1S549A组中H9c2细胞增殖能力降低(P<0.01), 细胞ROS和凋亡水平均增加(P<0.01), NF-κB信号通路水平增加(P<0.001)。结论高浓度葡萄糖通过增加SIRT1蛋白的O-GlcNAc糖基化修饰水平, 抑制SIRT1的蛋白水平和功能, 并导致细胞内NF-κB信号通路的激活, 增加高糖诱导的细胞炎症反应, 促进心肌细胞损伤。

关键词：糖尿病 NF-κB 糖尿病心肌损伤沉默信息调节因子1 氧连乙酰葡萄糖胺糖基化修饰炎症反应

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山东省城镇化对农村居民点利用的直接效应与空间溢出效应研究

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地理研究 2023年第6期42卷 1629-1646页

作者：董光龙王珏程伟亚张登磊杨绪斌张文信山东建筑大学管理工程学院济南250101 山东省国土空间规划院济南250014 单县自然资源和规划局菏泽274300

快速城镇化过程中,农村居民点规模、布局、结构、功能等均发生了剧烈变化。城镇化不仅会直接影响本地区农村居民点利用,而且会对相邻地区农村居民点利用产生间接影响。然而,目前相关研究仅简单的把城镇化作为农村居民点利用变化的驱动... 详细信息

快速城镇化过程中,农村居民点规模、布局、结构、功能等均发生了剧烈变化。城镇化不仅会直接影响本地区农村居民点利用,而且会对相邻地区农村居民点利用产生间接影响。然而,目前相关研究仅简单的把城镇化作为农村居民点利用变化的驱动因素之一,鲜有研究系统分析城镇化对农村居民点利用的直接效应与空间溢出效应。本文在剖析城镇化对农村居民点利用影响理论机制的基础上,从人口城镇化、经济城镇化、空间城镇化和社会城镇化4个方面选取了11个评价指标,综合评价了山东省城镇化水平,以人均农村居民点面积作为农村居民点用地变化的表征指标,定量刻画城镇化和农村居民点用地变化的时空特征,进而采用空间杜宾模型系统分析了城镇化对农村居民点利用的直接效应和空间溢出效应。结果表明:①2009—2018年,山东省城镇化水平快速提升,但区域差异明显,整体呈现出“双核驱动,东高西低”的发展格局。②人均农村居民点面积整体呈增加趋势,呈现出“北高南低”的空间分布特征。③城镇化加剧了农村居民点的粗放利用,但城镇化各子系统对农村居民点利用的作用路径不同。人口城镇化对本地农村居民点利用的影响最大,经济城镇化和空间城镇化次之,社会城镇化影响最小并且不显著;经济城镇化对相邻地区农村居民点利用的影响最大,社会城镇化影响次之,空间城镇化和人口城镇化的影响相对较小;从总效应来看,人口城镇化和经济城镇化对农村居民点利用的影响较大,空间城镇化的影响较小。加强城镇化与乡村振兴的有效联动,重视城镇化的空间溢出效应,强化区域协同发展,推进城乡融合与乡村协同振兴。

关键词：农村居民点城镇化空间溢出效应空间杜宾模型乡村振兴

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浙江省生态沟渠对农业面源污染物的去除效果

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浙江农林大学学报 2024年第6期41卷 1233-1241页

作者：杨旭斌邵建均应珊珊朱逸阳姜培坤浙江农林大学环境与资源学院浙江杭州311300 浙江省农业农村现代化研究院浙江杭州310007 浙江省耕地质量与肥料管理总站浙江杭州310020

【目的】综合评价生态沟渠在农业面源污染过程阻断中的作用,科学评估生态沟渠各环节对污染物的去除效果。【方法】选取浙江省桐庐、临安、建德、东阳、义乌、诸暨已建成的6条生态沟渠进行水质监测,计算生态沟渠对主要农业面源污染(总氮... 详细信息

【目的】综合评价生态沟渠在农业面源污染过程阻断中的作用,科学评估生态沟渠各环节对污染物的去除效果。【方法】选取浙江省桐庐、临安、建德、东阳、义乌、诸暨已建成的6条生态沟渠进行水质监测,计算生态沟渠对主要农业面源污染(总氮、铵态氮、总磷、化学需氧量)的去除率,并分析了沟渠建设内容对农业面源污染的去除影响。【结果】6条沟渠的总氮、铵态氮、总磷、化学需氧量平均去除率分别为18.31%、38.74%、13.49%、23.97%,其中对铵态氮的去除效果较好。义乌沟渠、桐庐沟渠通过建造生态边坡增加了边坡粗糙度,并依靠较窄的沟渠宽度增加了水流与边坡接触面积,延长了水流停留时间,对总氮、铵态氮表现出较高的去除效果,并与进水负荷呈线性关系(P<0.05)。诸暨沟渠植物密度高,表现出较好的总磷去除效果。同时,反硝化除磷装置数量对总氮、铵态氮、总磷和化学需氧量呈显著的正相关关系(P<0.05),是生态沟渠拦截农业面源污染的关键因素。【结论】在浙江省生态沟渠中,建设生态边坡,增设反硝化除磷装置,增大植物密度均可强化生态沟渠的水质净化作用。

关键词：生态沟渠农业面源污染生态边坡反硝化除磷装置植物密度

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