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Structural and Functional Insights into an Arabidopsis NBS-LRR Receptor in Nicotiana benthamiana

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American Journal of Molecular Biology 2024年第2期14卷 84-96页

作者： jianzhong Huang xiuying Guan Xiaoju Zhong Peng jia Hongbin Zhang Honglei Ruan Key Laboratory of Chronic Diseases Fuzhou Medical University Fuzhou China

Nucleotide-binding site leucine-rich repeat receptors (NBS-LRR/NLRs) are crucial intracellular immune proteins in plants. Previous article reported a novel NLR protein SUT1 (SUPPRESSORS OF TOPP4-1, 1), which is involved in autoimmunity initiated by type one protein phosphatase 4 mutation (topp4-1) in Arabidopsis, however, its role in planta is still unclear. This study employed Nicotiana benthamiana, a model platform, to conduct an overall structural and functional analysis of SUT1 protein. The transient expression results revealed that SUT1 is a typical CNL (CC-NBS-LRR) receptor, both fluorescence data and biochemical results showed the protein is mainly anchored on the plasma membrane due to its N-terminal acylation site. Further truncation experiments announced that its CC (coiled-coil) domain possessed cell-death-inducing activity. The outcomes of point mutations analysis revealed that not only the CC domain, but also the full-length SUT1 protein, whose function and subcellular localization are influenced by highly conserved hydrophobic residues. These research outcomes provided favorable clues for elucidating the activation mechanism of SUT1.

关键词： CC-NBS-LRR Hypersensitive Response Nicotiana benthamiana Plasma Membrane Localization

The Application of Nicotiana benthamiana as a Transient Expression Host to Clone the Coding Sequences of Plant Genes

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American Journal of Molecular Biology 2024年第2期14卷 54-65页

作者： jianzhong Huang Peng jia Xiaoju Zhong xiuying Guan Hongbin Zhang Honglei Ruan Key Laboratory of Chronic Diseases Fuzhou Medical University Fuzhou China

Coding sequences (CDS) are commonly used for transient gene expression, in yeast two-hybrid screening, to verify protein interactions and in prokaryotic gene expression studies. CDS are most commonly obtained using complementary DNA (cDNA) derived from messenger RNA (mRNA) extracted from plant tissues and generated by reverse transcription. However, some CDS are difficult to acquire through this process as they are expressed at extremely low levels or have specific spatial and/or temporal expression patterns in vivo. These challenges require the development of alternative CDS cloning technologies. In this study, we found that the genomic intron-containing gene coding sequences (gDNA) from Arabidopsis thaliana, Oryza sativa, Brassica napus, and Glycine max can be correctly transcribed and spliced into mRNA in Nicotiana benthamiana. In contrast, gDNAs from Triticum aestivum and Sorghum bicolor did not function correctly. In transient expression experiments, the target DNA sequence is driven by a constitutive promoter. Theoretically, a sufficient amount of mRNA can be extracted from the N. benthamiana leaves, making it conducive to the cloning of CDS target genes. Our data demonstrate that N. benthamiana can be used as an effective host for the cloning CDS of plant genes.

关键词： Coding Sequence Genomic Sequence Nicotiana benthamiana Plant Genes

水体二价铜离子致蟾蜍蝌蚪DNA损伤和氧化损伤

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环境科学学报 2008年第10期28卷 2095-2100页

作者：贾秀英施蔡雷杭州师范大学杭州市动物科学与技术重点实验室杭州310036

为研究水体二价铜离子(Cu2+)暴露对蝌蚪造成的损伤,以常见的中华大蟾蜍蝌蚪为研究对象,采用标准水生生物毒性实验法,将蝌蚪暴露于0.029、0.037、0.049、0.075mg·L-1的铜溶液中7d,检测蝌蚪血细胞DNA损伤及机体过氧化产物丙二醛(MDA)、... 详细信息

为研究水体二价铜离子(Cu2+)暴露对蝌蚪造成的损伤,以常见的中华大蟾蜍蝌蚪为研究对象,采用标准水生生物毒性实验法,将蝌蚪暴露于0.029、0.037、0.049、0.075mg·L-1的铜溶液中7d,检测蝌蚪血细胞DNA损伤及机体过氧化产物丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性.结果表明,随铜暴露浓度的增加,蝌蚪血细胞DNA损伤、MDA和GSH含量与对照组比均有明显升高,且呈浓度-效应关系.蝌蚪SOD、CAT、GSH-Px酶活性也有显著改变;MDA、GSH、DNA损伤均呈线性关系(R2分别为0.9968、0.8997).上述结果表明,水体二价铜离子可导致蝌蚪的氧化损伤和DNA损伤.

关键词：铜 DNA损伤氧化损伤蝌蚪蟾蜍

铅对蟾蜍肝、肾过氧化物酶和酯酶同工酶的影响

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生态学杂志 2005年第2期24卷 159-162页

作者：贾秀英董爱华杭州师范学院生命科学学院杭州310036

以腹腔注射法对蟾蜍 (Bufobufogargarizans)给铅 ,处理 7d后 ,使用聚丙烯凝胶垂直平板电泳法 ,研究了不同浓度 (按铅计 1、2、4、8mg·kg-1 体重 )的铅对蟾蜍肝脏、肾脏过氧化物酶和酯酶同工酶的影响。结果表明 ,不同浓度的铅均可使肝... 详细信息

以腹腔注射法对蟾蜍 (Bufobufogargarizans)给铅 ,处理 7d后 ,使用聚丙烯凝胶垂直平板电泳法 ,研究了不同浓度 (按铅计 1、2、4、8mg·kg-1 体重 )的铅对蟾蜍肝脏、肾脏过氧化物酶和酯酶同工酶的影响。结果表明 ,不同浓度的铅均可使肝、肾组织过氧化物酶同工酶带强弱发生明显变化 ;对肝、肾酯酶同工酶的影响表现出一定的组织差异性 ,且在一定范围内主要表现为应激性 ,即低剂量的铅可诱导酶活性的提高。

关键词：蟾蜍铅过氧化物酶酯酶同工酶

Cu^(2+)、Zn^(2+)和Cd^(2+)对蟾蜍蝌蚪的联合毒性

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应用与环境生物学报 2006年第3期12卷 356-359页

作者：杨亚琴贾秀英杭州师范学院生命科学学院杭州310036

以蟾蜍蝌蚪为试验材料,采用联合指数相加法,研究了重金属铜(Cu)、锌(Zn)和镉(Cd)离子对蟾蜍蝌蚪的急性毒性和联合毒性效应.结果表明,Cu2+、Zn2+和Cd2+对蟾蜍蝌蚪的毒性顺序为Cu2+>Cd2+>Zn2+,48 h的半致死浓度LC50分别为0.514、9.224、33... 详细信息

以蟾蜍蝌蚪为试验材料,采用联合指数相加法,研究了重金属铜(Cu)、锌(Zn)和镉(Cd)离子对蟾蜍蝌蚪的急性毒性和联合毒性效应.结果表明,Cu2+、Zn2+和Cd2+对蟾蜍蝌蚪的毒性顺序为Cu2+>Cd2+>Zn2+,48 h的半致死浓度LC50分别为0.514、9.224、33.56 mg L-1;96 h的半致死浓度LC50分别为0.288、8.142、30.76 mg L-1.联合毒性试验结果表明,Cu2+与Zn2+及Zn2+与Cd2+共存时的联合毒性为拮抗作用;Cu2+与Cd2+共存时的联合毒性为毒性剧增的协同作用;Cu2+、Zn2+与Cd2+三者联合时的毒性为协同作用.

关键词： Cu^2+ Zn^2+ Cd^2+ 联合毒性蟾蜍蝌蚪

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亚急性镉暴露对雄性黑斑蛙生殖毒性的研究

环境科学学报 2007年第9期27卷 1512-1516页

作者：贾秀英汪美贞杭州师范大学杭州市动物科学与技术重点实验室杭州310036

在实验条件下,将健康性成熟雄性黑斑蛙暴露于2.5、5.0、7.5和10.0mg·L-1浓度的镉溶液中14 d,观察和分析黑斑蛙的精子数量、精子畸形率,测定精巢组织中酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化歧化酶(SOD... 详细信息

在实验条件下,将健康性成熟雄性黑斑蛙暴露于2.5、5.0、7.5和10.0mg·L-1浓度的镉溶液中14 d,观察和分析黑斑蛙的精子数量、精子畸形率,测定精巢组织中酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平和活力,以探讨镉对黑斑蛙的雄性生殖毒性及作用机理.结果表明:①镉可引起黑斑蛙精子数量减少和精子畸形率增加,且呈剂量-效应关系;②镉可引起精巢ACP、LDH酶活性的降低,且随染毒剂量的增加而降低;③镉可引起精巢组织MDA、GSH含量的升高,引起抗氧化酶SOD、GSH-Px活性的降低.由此推论,亚急性镉暴露对黑斑蛙精巢有明显的毒性作用,其机制与镉致黑斑蛙精巢组织标志酶活力的降低和精巢脂质过氧化作用有关.

关键词：镉生殖毒性雄性黑斑蛙

镉暴露对黑斑蛙精巢ROS的诱导及其蛋白质氧化损伤作用机理

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生态学报 2012年第13期32卷 4199-4206页

作者：曹慧施蔡雷贾秀英杭州师范大学生命与环境科学学院杭州310036

重金属镉对精巢发育、呼吸及神经系统信号转导等途径均有不良影响,被认为是造成两栖动物种群数量急剧下降的重要原因之一。然而,有关镉对精巢损伤的分子机理还不清楚。通过对镉暴露后的黑斑蛙精巢活性氧自由基(ROS)、蛋白质羰基(PCO)以... 详细信息

重金属镉对精巢发育、呼吸及神经系统信号转导等途径均有不良影响,被认为是造成两栖动物种群数量急剧下降的重要原因之一。然而,有关镉对精巢损伤的分子机理还不清楚。通过对镉暴露后的黑斑蛙精巢活性氧自由基(ROS)、蛋白质羰基(PCO)以及DNA蛋白质交联(DPC)等指标的系统分析,探讨了镉对精巢毒害的分子作用机理。随镉浓度的增加,黑斑蛙精巢细胞线粒体ROS随镉暴露浓度的增加而升高,0.5、1.0 mg/L镉染毒组与对照组比较有显著性差异(P<0.05);精巢组织PCO和DPC也随镉暴露浓度的增加而逐渐上升,且均呈明显的浓度-效应关系。结果表明:镉诱导机体产生ROS,进而导致蛋白质氧化损伤以及DNA损伤,说明精巢组织ROS的产生是镉致雄性生殖毒效应机制的重要因素之一。

关键词：镉活性氧自由基蛋白质羰基含量 DNA-蛋白质交联

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汉法“对字结构”对比

语文研究 2009年第3期 22-26页

作者：孟晓琦贾秀英山西大学外国语学院山西太原030006

文章对汉语与法语的"对字结构"作了系统对比。汉法"对字结构"的使用有四点不同:一是介词类"对"的内部成员不同;二是"对字结构"中"对"的宾语成分不同;三是"对字结构"在句中的位置不同;四是"对字结构"与句中其他成分的语义关系不同。

关键词：汉语法语对字结构对比

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高铜、高锌猪粪对蚯蚓的急性毒性效应研究

应用生态学报 2005年第8期16卷 1527-1530页

作者：贾秀英罗安程李喜梅杭州师范学院生命科学学院杭州310036 浙江大学环境与资源学院杭州310029

测定了高Cu、高Zn猪粪条件下Cu、Zn单一与复合污染对蚯蚓的急性致死及亚致死效应.结果表明,Cu、Zn浓度与蚯蚓死亡率显著正相关(a=0.05,rCu=0.99,rZn=0.99),与体重增长率显著负相关(a=0.05,rCu=-0.99,rZn=-0.96).蚯蚓个体对Cu、Zn的耐受... 详细信息

测定了高Cu、高Zn猪粪条件下Cu、Zn单一与复合污染对蚯蚓的急性致死及亚致死效应.结果表明,Cu、Zn浓度与蚯蚓死亡率显著正相关(a=0.05,rCu=0.99,rZn=0.99),与体重增长率显著负相关(a=0.05,rCu=-0.99,rZn=-0.96).蚯蚓个体对Cu、Zn的耐受程度不同,其毒性阈值(引起蚯蚓个体死亡浓度)分别为:Cu250mg.kg-1、Zn400mg.kg-1.LD50分别为:Cu646.***.kg-1、Zn947.***.kg-1.复合污染情况下,Cu浓度为2505、00mg.kg-1时,Cu、Zn复合污染表现为协同效应;Cu浓度为750mg.kg-1时,Cu、Zn复合污染表现为拮抗效应.可见,猪粪中Cu、Zn复合污染的毒性效应与各组浓度组合密切相关.

关键词：猪粪重金属蚯蚓急性毒性