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A safe and molecular-tagged Brucella canis ghosts confer protection against virulent challenge in mice

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A safe and molecular-tagged Brucella canis ghosts confer pro...

中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第六次学术研讨会

作者： Jing Qian Zhaoyang Bu Xulong Lang Guangmou Yan Yanling Yang xiuran wang Xinglong wang Key Laboratory of Jilin Province for Zoonosis Prevention and Control Institute of Military Veterinary MedicineAcademy of Military Medical Sciences Laboratory of Infectious Diseases College of Veterinary MedicineJilin University Key Laboratory of Zoonosis Research Ministry of EducationJilin University Institute of Special Wild Animal & Plant Science Chinese Academy of Agricultural Sciences School of Life Science Jilin Agricultural University

Canine Brucellosis,caused by Brucella canis,is a persistent infectious reproductive disease in *** absence of effective treatment to the intracellular pathogen and the irreversible consequence of infection makes the need of a specific vaccine *** ghosts（BGs） are the empty envelopes of bacteria with no genome content inside,which emerge as a proper vaccine candidate due to its intact outer *** is generally derived from a genetically engineered strain,through the expression of Bacteriophage phiX174 lysis E gene upon *** this study,we combined the homologous recombination（HR） and bacterial ghost technologies,generating a genetically stable *** ghost strain which bears no drug resistance *** the ghost strain grows to OD600 of 0.6,100% inactivation can be achieved under 42°C in 60 *** resultant BGs showed guaranteed safety and comparable immunogenicity to a live *** bacterial B0419 protein was depleted during HR process,which is subsequently proved to work as a molecular tag in distinguishing natural infection and BGs immunization through ***,the BGs also conferred protection against *** RM6/66 and *** 16 ***,the application of current BGs as a vaccine candidate and the corresponding serological diagnostic approach may provide better *** prevention strategy.

关键词： Brucella canis bacterial ghost safety immunogenicity protective efficacy differential diagnosis

来源： cnki会议评论

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蛋白质糖基化修饰的研究进展

基因组学与应用生物学 2017年第10期36卷 4380-4384页

作者：王晓龙王秀然卢天成吉林农业大学生命科学学院长春130118

糖类在生物合成、结构和功能上都与核酸以及蛋白质有着本质区别,但是对蛋白质的功能却有着关键影响。蛋白质若要行使其生物学功能,必须在翻译之后进行进一步加工,加工过程涉及多种修饰方式,例如磷酸化、乙酰化、泛素化、甲基化、糖基化... 详细信息

糖类在生物合成、结构和功能上都与核酸以及蛋白质有着本质区别,但是对蛋白质的功能却有着关键影响。蛋白质若要行使其生物学功能,必须在翻译之后进行进一步加工,加工过程涉及多种修饰方式,例如磷酸化、乙酰化、泛素化、甲基化、糖基化等。其中糖基化修饰对蛋白质功能和结构的形成具有重要作用。在机体内,细胞粘附、分子识别以及信号转导等过程均涉及糖基化蛋白质的参与,说明糖基化修饰对蛋白质行使生物学功能起着重要作用。研究蛋白质的糖基化修饰及其在不同生理病理条件下的变化有重要意义,也是糖蛋白质组学面临的主要问题和巨大挑战。本课题概述了蛋白质糖基化修饰的分类,回顾了他们对蛋白质性质的影响,为探讨最新的研究技术及发展现状提供了支持。

关键词：糖蛋白糖基化修饰蛋白质性质

布鲁氏菌L7/L12蛋白的基因克隆与原核表达

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基因组学与应用生物学 2019年第7期38卷 3046-3050页

作者：胡祥坤卢天成王岩刘思阳王秀然吉林农业大学生命科学学院

本研究对羊布鲁氏菌L7/L12蛋白进行了表达和纯化。首先从布鲁氏菌M5基因组中克隆L7/L12目的基因片段,连接至pMD-19T载体,转化入*** DH5α感受态细胞,PCR鉴定及测序鉴定正确后对其进行双酶切,构建重组质粒pGEX-6P-1-L7/L12并利用*** BL21... 详细信息

本研究对羊布鲁氏菌L7/L12蛋白进行了表达和纯化。首先从布鲁氏菌M5基因组中克隆L7/L12目的基因片段,连接至pMD-19T载体,转化入*** DH5α感受态细胞,PCR鉴定及测序鉴定正确后对其进行双酶切,构建重组质粒pGEX-6P-1-L7/L12并利用*** BL21(DE3)进行诱导表达。羊布鲁氏菌L7/L12基因片段大小为375 bp。SDS-PAGE检测蛋白大小为13 kD,与预测值相符。Western blotting方法检测其免疫学特性。实验结果表明,成功构建了pGEX-6P-1-L7/L12原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了L7/L12重组蛋白,Western blotting法检测其具有免疫反应。本实验为下一步研究蛋白功能及布鲁氏菌新型疫苗的研制提供了实验基础。

关键词：布鲁氏菌 L7/L12基因原核表达纯化

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生孢噬纤维菌荚膜多糖的分离纯化及其性质

应用与环境生物学报 2006年第6期12卷 854-856页

作者：于珊珊刘东波王伟华李雁王秀然黄国辉东北师范大学生命科学学院长春130024

生孢噬纤维菌(Sporocytophaga)是能降解纤维素的滑动细菌,它可将滤纸和棉花纤维素完全降解.本文对生孢噬纤维菌产生的荚膜多糖的分离纯化以及性质进行了研究.以滤纸平板法培养生孢噬纤维菌,加入1%苯酚后,荚膜多糖溶解在水相中,再经氯化... 详细信息

生孢噬纤维菌(Sporocytophaga)是能降解纤维素的滑动细菌,它可将滤纸和棉花纤维素完全降解.本文对生孢噬纤维菌产生的荚膜多糖的分离纯化以及性质进行了研究.以滤纸平板法培养生孢噬纤维菌,加入1%苯酚后,荚膜多糖溶解在水相中,再经氯化十六烷基吡啶(CPC)沉淀,分离出荚膜多糖提取物.利用Sephadex G-75柱层析法、胰蛋白酶和Sevag法对荚膜多糖提取物进行纯化;并利用比旋光度检查、红外光谱、液相色谱以及气相色谱等分析手段对精制后的荚膜多糖进行分析.结果表明,分离纯化得到了纯度较高的生孢噬纤维菌荚膜多糖.Sephadex G-75柱层析分析表明,荚膜多糖提取物中含有结合蛋白,除去结合蛋白后,多糖分子量约为6.5×103;气相色谱分析表明,该荚膜多糖主要由Gal、Glc、GlcA以及Man等单糖组成,其比值约为3.513.33.61;同时该荚膜多糖的红外光谱显示,该多糖所含的甲基、亚甲基等基团的量比正常多糖多;红外光谱图中881cm-1处的峰位显示,该多糖含有不典型β糖苷键特征吸收峰.

关键词：荚膜多糖分离纯化生孢噬纤维菌

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生孢噬纤维细菌的滤纸纤维素的降解过程研究

微生物学报 2003年第6期43卷 776-780页

作者：刘东波张影陈珊王秀然张丽萍东北师范大学生命科学学院长春130024

生孢噬纤维细菌 (Sporocytophaga)是能够降解纤维素的滑动细菌 ,它可将滤纸和棉花纤维素完全降解 ;但其可测得的纤维素酶活性极低。为研究其纤维素降解机制 ,本文采用扫描电子显微镜观察了一株生孢噬纤维细菌 (Sporocytophagasp .)JL 0 ... 详细信息

生孢噬纤维细菌 (Sporocytophaga)是能够降解纤维素的滑动细菌 ,它可将滤纸和棉花纤维素完全降解 ;但其可测得的纤维素酶活性极低。为研究其纤维素降解机制 ,本文采用扫描电子显微镜观察了一株生孢噬纤维细菌 (Sporocytophagasp .)JL 0 1对滤纸纤维素的降解过程 ,分析了在此过程中滤纸纤维素的降解与菌体形态变化之间的关系。结果表明 :生孢噬纤维细菌在纤维素降解过程中 ,形成长度为 2 5 μm～ 4 0 μm可弯曲的细长杆状细胞 ,该细长杆状细胞通过与纤维素分子的吸附或嵌入纤维素中完成对纤维素的降解 ;在降解后期 ,杆状细胞转化为直径约为 0 6μm的小孢囊休眠细胞。

关键词：生孢噬纤维细菌纤维素降解杆状细胞孢囊

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酵母糖基化改造工程研究进展

基因组学与应用生物学 2019年第8期38卷 3580-3585页

作者：刘思阳王秀然王茗宇李全亮胡祥坤卢天成吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心

酵母真核表达系统是常用的安全性较高的外源蛋白表达系统。酵母细胞内存在翻译后糖基化修饰过程,对其糖基化修饰系统进行改造可用于生产人源糖蛋白。研究表明,可以通过基因工程手段消除酵母特有的内源糖基化反应、引入哺乳动物细胞表达... 详细信息

酵母真核表达系统是常用的安全性较高的外源蛋白表达系统。酵母细胞内存在翻译后糖基化修饰过程,对其糖基化修饰系统进行改造可用于生产人源糖蛋白。研究表明,可以通过基因工程手段消除酵母特有的内源糖基化反应、引入哺乳动物细胞表达系统中糖基化类型等方法对酵母糖基化路径进行改造。近年来许多研究通过对酵母菌株糖基化位点突变、基因缺失等方法对酵母糖基化系统进行改造,探究糖基化修饰对蛋白质功能的影响,这为利用酵母生产治疗性蛋白和新型糖基化疫苗提供了新的思路。本综述将对近年来酵母糖基化改造成果及研究进展进行综述。

关键词：糖基化改造酵母糖工程人源糖基化

布鲁氏菌P39基因的克隆、原核表达及其糖基化修饰

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中国畜牧兽医 2018年第11期45卷 2996-3002页

作者：胡祥坤卢天成刘思阳付玉芹王茗宇郑晗旭王岩王秀然吉林农业大学生命科学学院生物反应器与药物开发教育部工程研究中心长春130118

为探究糖基化修饰对布鲁氏菌P39蛋白免疫原性的影响,本试验对布鲁氏菌P39蛋白进行了表达和纯化,并对表达的蛋白进行了甘露六糖修饰。参照GenBank公布的布鲁氏菌P39基因序列设计引物,从布鲁氏菌16M基因组中克隆P39基因片段并连接至pMD19-... 详细信息

为探究糖基化修饰对布鲁氏菌P39蛋白免疫原性的影响,本试验对布鲁氏菌P39蛋白进行了表达和纯化,并对表达的蛋白进行了甘露六糖修饰。参照GenBank公布的布鲁氏菌P39基因序列设计引物,从布鲁氏菌16M基因组中克隆P39基因片段并连接至pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取阳性菌株质粒进行酶切等鉴定,鉴定正确后构建重组质粒pGEX-6P-1-P39,对重组蛋白进行诱异表达与条件优化。利用SDSPAGE和Western blotting对诱导表达的目的蛋白进行分析,将鉴定正确的蛋白经GST亲和层析柱纯化。通过EDC/NHS法对纯化的P39蛋白进行甘露六糖修饰,研究甘露六糖修饰后目的蛋白对巨噬细胞吞噬的影响。结果显示,本试验成功克隆了片段大小为1 206bp的目的基因,构建了pGEX-6P-1-P39原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达了P39蛋白,该蛋白主要以可溶性形式存在。Western blotting结果显示,在约65ku处有特异性条带。纯化后获得目的蛋白大小为43ku,成功对目的蛋白P39进行了糖基化修饰,得到修饰产物与蛋白的摩尔比为2.3∶1。此外,糖基化修饰可显著提前蛋白激活小鼠巨噬细胞的吞噬作用时间。本试验结果可为研究甘露六糖修饰影响P39蛋白免疫原性的机制提供参考。

关键词：布鲁氏菌 P 39基因原核表达纯化糖基化修饰吞噬作用

Genome Shuffling技术在微生物遗传育种中的应用

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农业与技术 2005年第1期25卷 145-147,159页

作者：史晓昆王秀然刘东波东北师范大学生命科学学院吉林长春130024

Genomeshuffling技术是在传统诱变基础上,通过细胞融合技术,对诱变后的微生物细胞进行基因组重组,从而使具有正向突变的菌株将其优点结合在一起,进而提高微生物细胞的正向突变频率及正向突变速度。本文论述了Genomeshuffling的基本原理... 详细信息

Genomeshuffling技术是在传统诱变基础上,通过细胞融合技术,对诱变后的微生物细胞进行基因组重组,从而使具有正向突变的菌株将其优点结合在一起,进而提高微生物细胞的正向突变频率及正向突变速度。本文论述了Genomeshuffling的基本原理、技术过程以及该项技术的应用与发展前景。

关键词：基因组改组育种诱变原生质体融合

Constraints on holographic QCD phase transitions from PTA observations

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Science China(Physics,Mechanics & Astronomy) 2025年第1期Mechanics & Astronomy) .卷 71-78页

作者： Song He Li Li Sai wang Shao-Jiang wang Center for Theoretical Physics and College of Physics Jilin University School of Physical Science and Technology Ningbo University Max Planck Institute for Gravitational Physics (Albert Einstein Institute) CAS Key Laboratory of Theoretical Physics Institute of Theoretical Physics Chinese Academy of Sciences School of Fundamental Physics and Mathematical Sciences Hangzhou Institute for Advanced StudyUniversity of Chinese Academy of Sciences (UCAS) School of Physical Sciences University of Chinese Academy of Sciences (UCAS) Theoretical Physics Division Institute of High Energy Physics Chinese Academy of Sciences

The underlying physics of QCD phase transition in the early Universe remains largely unknown due to its strong-coupling nature during the quark-gluon plasma/hadron gas transition, yet a holographic model has been proposed to quantitatively fit the lattice QCD data while with its duration of the first-order phase transition(FoPT) left undetermined. At specific baryon chemical potential, the first-order QCD phase transition agrees with the observational constraint of baryon asymmetry. It, therefore, provides a scenario for phase transition gravitational waves(GWs) within the standard model of particle physics. If these background GWs could contribute dominantly to the recently claimed common-spectrum red noise from pulsar timing array(PTA) observations, the duration of this FoPT can be well constrained, and the associated primordial black holes are still allowed by current observations.

关键词： pulsar timing array QCD phase transition gravitational waves primordial black holes