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表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

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微生物学报 2002年第4期42卷 442-447页

作者：程坚刘秀梵彭大新刘红旗扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

以RT PCR法扩增获得H9亚型禽流感病毒 (AIV)分离株 (A Chicken China F 1 998)的血凝素 (HA)基因 ,将其定向插入鸡痘病毒转移载体 1 1 75的痘苗病毒启动子P7 5的下游 ,得到重组转移载体 1 1 75HA。以脂质体转染法将 1 1 75HA转染至已感... 详细信息

以RT PCR法扩增获得H9亚型禽流感病毒 (AIV)分离株 (A Chicken China F 1 998)的血凝素 (HA)基因 ,将其定向插入鸡痘病毒转移载体 1 1 75的痘苗病毒启动子P7 5的下游 ,得到重组转移载体 1 1 75HA。以脂质体转染法将 1 1 75HA转染至已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株(wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPV HA。以间接免疫荧光法证实感染rFPV HA的CEF表达了HA。rFPV HA在免疫 7日龄SPF鸡 7天后即能诱生可检出的血凝抑制 (HI)抗体 ,1 4天后诱生的HI抗体到达高峰 ,且诱生的HI抗体保持较高水平达 5 5天。在 7日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡上进行的免疫效力试验表明 ,rFPV HV能显著抑制静脉攻毒后免疫鸡从泄殖腔的排毒 ,效果与AIV全病毒灭活苗相当。

关键词：表达 H9亚型禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒免疫效力

产志贺毒素大肠杆菌O18 XZ113株主要毒力基因eaeA、stx2、ehxA突变株的构建及其对小鼠的致病作用

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微生物学报 2011年第12期51卷 1655-1662页

作者：薛涛陈先亮高崧刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】探讨毒力基因eaeA、stx2、ehxA与产志贺毒素大肠杆菌O18致病力的关系。【方法】利用λ-Red重组系统,构建STEC XZ113株eaeA、stx2、ehxA基因缺失突变株并进行一系列生物学特性的研究。【结果】细胞粘附试验表明突变株XZ113△eaeA... 详细信息

【目的】探讨毒力基因eaeA、stx2、ehxA与产志贺毒素大肠杆菌O18致病力的关系。【方法】利用λ-Red重组系统,构建STEC XZ113株eaeA、stx2、ehxA基因缺失突变株并进行一系列生物学特性的研究。【结果】细胞粘附试验表明突变株XZ113△eaeA对HEp-2细胞的粘附能力明显降低;Vero细胞毒素试验表明突变株XZ113△stx2失去了使Vero细胞发生病变的能力;溶血活性试验表明突变株XZ113△ehxA无法在血平板上产生溶血圈,丢失了溶血能力。回复株在以上表型方面与野生株XZ113一致;与亲本株的体外竞争试验结果表明,突变株竞争力减弱,体内竞争结果表明突变株XZ113△eaeA被中度致弱;突变株XZ113△stx2和突变株XZ113△ehxA被高度致弱。【结论】stx2、ehxA基因在STEC O18 XZ113株的致病过程中发挥着更为重要的作用。

关键词：产志贺毒素大肠杆菌 O18 eaeA、stx2、ehxA基因突变株致病性

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混合感染的多种亚型禽流感病毒的纯化与鉴定

微生物学报 2010年第1期50卷 107-112页

作者：仇保丰刘武杰胡顺林唐应华彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】研究混合感染的多种亚型禽流感病毒的纯化和鉴定方法。【方法】用鸡胚终点稀释法和鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法分别对2-3种已知亚型禽流感病毒的混合感染样品进行纯化,并对纯化结果用RT-PCR和血凝抑制试验进行鉴定。用... 详细信息

【目的】研究混合感染的多种亚型禽流感病毒的纯化和鉴定方法。【方法】用鸡胚终点稀释法和鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法分别对2-3种已知亚型禽流感病毒的混合感染样品进行纯化,并对纯化结果用RT-PCR和血凝抑制试验进行鉴定。用建立的方法对214份禽流感病毒阳性样品进行了纯化和鉴定。【结果】用鸡胚终点稀释法对样品稀释、传代6-7次可使病毒达到纯化,但用鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法对样品稀释、传代4-5次即可达到病毒纯化。用RT-PCR和血凝抑制试验两种方法同时鉴定病毒的纯化效果,可明显提高准确性。用本方法从214份样品中纯化出涵盖13种亚型的禽流感病毒233株。【结论】鸡胚终点稀释法及其结合特异性血清中和法均能对禽流感病毒进行纯化,但是鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法更具有针对性,也更有效。另外,对纯化结果的鉴定需采取多种手段。

关键词：禽流感病毒混合感染纯化鉴定

一株能表达987P和F_(41)两种粘附素的猪源性大肠杆菌的研究

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微生物学报 1994年第3期34卷 220-225页

作者：高崧刘秀梵张如宽江苏农学院畜牧兽医系扬州225001

通过直接凝集试验、免疫荧光试验、SDS-PAGE和Western印迹,对一株猪源性大肠杆菌的粘附素进行了研究.结果表明,该菌株是一株同时表达987P和F_(41)两种粘附素抗原的猪源性大肠杆菌.

关键词：大肠杆菌粘附素猪源性

干扰素刺激基因15(ISG15)在天然免疫中的抗病毒作用研究进展

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中国免疫学杂志 2022年第2期38卷 253-256,F0003,F0004页

作者：嵇祝星王晓泉刘晓文刘秀梵(指导) 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225000

干扰素刺激基因15(ISG15)是干扰素刺激下产生的最丰富的产物,也是宿主对病毒感染应答环节中的重要环节。距离ISG15第一次被报道已有42年,越来越多研究揭示了其蛋白复杂和多变的性质,除可对细胞内多种蛋白进行修饰外,也可作为细胞因子分... 详细信息

干扰素刺激基因15(ISG15)是干扰素刺激下产生的最丰富的产物,也是宿主对病毒感染应答环节中的重要环节。距离ISG15第一次被报道已有42年,越来越多研究揭示了其蛋白复杂和多变的性质,除可对细胞内多种蛋白进行修饰外,也可作为细胞因子分泌至细胞外。ISG15存在物种间作用差异。本文介绍ISG15在天然免疫中的抗病毒功能及其发挥这一功能的不同机制,并阐述其研究进展。

关键词： ISG15 抗病毒感染 ISG化修饰天然免疫

禽病原性大肠杆菌aes-31基因突变株的构建和致病性鉴定

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微生物学报 2010年第12期50卷 1681-1685页

作者：宦海霞张科陈祥高崧刘秀梵淮阴师范学院生命科学学院淮安223300 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 淮安出入境检验检疫局淮安223001

【目的】通过禽病原性大肠杆菌(APEC)aes-31突变株的构建和动物实验来初步鉴定此基因片段对E058株的毒力影响。【方法】对在芯片杂交试验中筛选到的APEC E058株体外表达差异基因片段aes-31(来自SSH方法筛选到的E058株特异片段),用SSH引... 详细信息

【目的】通过禽病原性大肠杆菌(APEC)aes-31突变株的构建和动物实验来初步鉴定此基因片段对E058株的毒力影响。【方法】对在芯片杂交试验中筛选到的APEC E058株体外表达差异基因片段aes-31(来自SSH方法筛选到的E058株特异片段),用SSH引物从重组质粒中扩增出目的片段,克隆到pGEM-Teasy Vector中,然后用SphⅠ和SpeⅠ从中切下此片段,将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性重组质粒pMEG375-aes-31,将突变载体转化到受体菌中,再和APEC E058株进行固相杂交,根据同源重组原理,筛选出基因突变株E058(Δaes-31)。【结果】E058株和突变株的LD50没有明显差别,突变株对35日龄SPF鸡的致死率高于E058株;两者接种鸡6 h内,E058(Δaes-31)突变株在各内脏器官和血液中的细菌数和E058株差异均不显著;接种鸡24 h后,E058(Δaes-31)突变株在脾脏和肺中的细菌数显著大于E058株,差异显著,E058(Δaes-31)突变株在心脏、肝脏和血液中细菌数显著大于E058株,差异极显著;接种鸡48 h后,E058(Δaes-31)突变株在心脏、肝脏和脾脏中的细菌数比E058株多,差异极显著,而肺脏和血液中的细菌数均无明显差异;48 h后突变株所引起的感染鸡的大肠杆菌病变比亲本株稍严重。【结论】以上数据表明aes-31有可能与E058株毒力的负调控有关。

关键词：禽病原性大肠杆菌E058株 aes-31基因片段突变株致病性

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近年来华东地区家鸭中禽流感病毒的亚型分布

微生物学报 2008年第10期48卷 1290-1294页

作者：仇保丰刘武杰彭大新胡顺林刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】为了研究近年来华东地区家鸭中禽流感病毒的亚型分布情况。【方法】对2002-2006年分离自华东地区家鸭的180株禽流感病毒的HA亚型和其中88株禽流感病毒的NA亚型分别进行了测定。【结果】近年来华东地区家鸭中至少存在9种HA亚型和... 详细信息

【目的】为了研究近年来华东地区家鸭中禽流感病毒的亚型分布情况。【方法】对2002-2006年分离自华东地区家鸭的180株禽流感病毒的HA亚型和其中88株禽流感病毒的NA亚型分别进行了测定。【结果】近年来华东地区家鸭中至少存在9种HA亚型和6种NA亚型组成的H1N1,H3N1,H3N2,H3N8,H4N6,H5N1,H5N2,H6N2,H6N8,H8N4,H9N2,H10N3,H11N2共13种亚型的禽流感病毒。【结论】华东地区家鸭中有多种亚型的禽流感病毒分布,应加强家鸭禽流感的监测和防制工作。

关键词：华东地区家鸭禽流感病毒亚型分布

应用DNA芯片技术研究体外表达禽致病性大肠杆菌可能致病基因

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微生物学报 2008年第1期48卷 103-111页

作者：宦海霞周琼赵李祥高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

应用DNA芯片研究禽致病性大肠杆菌可能致病基因的表达。构建禽致病性大肠杆菌毒力基因、潜在毒力基因的DNA芯片,应用基因芯片技术对同属O2血清型的禽高致病性大肠杆菌E058株和低致病性大肠杆菌E526株在体外LB培养基和鸡血清培养状态下... 详细信息

应用DNA芯片研究禽致病性大肠杆菌可能致病基因的表达。构建禽致病性大肠杆菌毒力基因、潜在毒力基因的DNA芯片,应用基因芯片技术对同属O2血清型的禽高致病性大肠杆菌E058株和低致病性大肠杆菌E526株在体外LB培养基和鸡血清培养状态下进行差异表达分析。结果:在体外LB静置培养状态下,低致病株E526与高致病株E058相比共有16个差异基因,均为下调基因。在鸡血清静置培养中,E526与E058相比共有15个差异基因,均为下调基因。应用基因芯片成功筛选了禽致病性大肠杆菌在体外不同条件下的毒力基因及可能毒力基因中差异表达基因,表明一些铁摄取系统相关基因对APEC的毒力较重要,同时也筛选出了一些新的可能致病基因aes-1,aes-2,aes-3,aes-4,aes-6,aes-8,aes-10,aes-13,aes-15,aes-31等。

关键词：禽致病性大肠杆菌毒力基因体外培养基因表达 DNA芯片

PA-X蛋白对HH9N2亚型禽流感病毒致病性的影响

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中国家禽 2017年第24期39卷 14-17页

作者：王晓泉刘东刘晓文刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在我国家禽中循环存在,可跨种间传播感染人,对公共卫生产生重大影响。PA-X蛋白是流感病毒PA基因核糖体移码后编码的一种新蛋白,对病毒的致病性起调控作用。试验通过反向遗传技术构建并拯救了H9N2 AIV SH7株的PA-... 详细信息

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在我国家禽中循环存在,可跨种间传播感染人,对公共卫生产生重大影响。PA-X蛋白是流感病毒PA基因核糖体移码后编码的一种新蛋白,对病毒的致病性起调控作用。试验通过反向遗传技术构建并拯救了H9N2 AIV SH7株的PA-X变异病毒SH7-FS株,使PA-X的表达量下降至原来的0.2%^([1]),测定野生型SH7株和变异病毒SH7-FS株在不同来源细胞中的生长曲线,并通过小鼠感染试验测定病毒在肺中病毒载量及其对肺的病理损伤来分析其对小鼠的致病性。结果表明:SH7-FS株对小鼠的致病力比野生型SH7株低,造成的小鼠肺部炎症比SH7株轻。SH7株和SH7-FS株在小鼠体内复制能力无显著差异,但是SH7-FS株在Vero细胞和MDCK细胞上复制水平比SH7株低,推测PA-X蛋白是协助病毒更好适应环境的辅助蛋白。研究结果为H9N2 AIV PA-X蛋白的生物学功能的探索提供了理论基础,推进了人们对于流感病毒PA-X蛋白功能的认识。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒 PA—X 小鼠致病性