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大肠杆菌野生株F18菌毛蛋白粘附亚单位基因的克隆与表达

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2007年第3期33卷 298-301页

作者：罗维余兴龙白霞李润成侯强红尹恒湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

根据Z26520中fedF序列设计1对引物,从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的大肠杆菌中扩增得到fedF基因,经纯化、连接、转化,将其成功克隆到pMD18-T中,所克隆fedF基因序列与GenBank中收录的其他fedF基因序列的同源性达97.8%～99.2%.另设计1对引... 详细信息

根据Z26520中fedF序列设计1对引物,从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的大肠杆菌中扩增得到fedF基因,经纯化、连接、转化,将其成功克隆到pMD18-T中,所克隆fedF基因序列与GenBank中收录的其他fedF基因序列的同源性达97.8%～99.2%.另设计1对引物,利用基因工程方法将所克隆的fedF的编码序列亚克隆到表达载体pBV220中,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达重组菌.测序结果表明,插入编码序列与预期序列一致.SDS-PAGE电泳及Western-blotting分析表明,重组菌在诱导后可以表达特异性的相对分子质量为30 100的FedF蛋白.

关键词：大肠杆菌 fedF基因克隆表达

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绵羊白细胞介素2基因的克隆与序列分析

中国兽医学报 2000年第6期20卷 523-527页

作者：王克坚余兴龙吕宗吉赵宝华冯书章朱平殷震中国农业科学院特产研究所吉林吉林市132109 解放军军需大学军事兽医研究所吉林长春130062

为与腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因构建融合基因表达载体 ,利用健康绵羊血扩增和克隆了设计有特殊酶切位点的绵羊白细胞介素 2 ( Ovi IL-2 )。从绵羊血中分离白细胞 ,用 TRIZOL试剂盒提取绵羊白细胞RNA,以 RNA为模板 ,用设计的 Ovi IL-... 详细信息

为与腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因构建融合基因表达载体 ,利用健康绵羊血扩增和克隆了设计有特殊酶切位点的绵羊白细胞介素 2 ( Ovi IL-2 )。从绵羊血中分离白细胞 ,用 TRIZOL试剂盒提取绵羊白细胞RNA,以 RNA为模板 ,用设计的 Ovi IL-2 3′引物进行 RT-PCR,扩增 Ovi IL-2 c DNA;以 Ovi IL-2 c DNA为模板 ,用 Ovi IL-2的 5′引物和 3′引物进行 PCR,扩增设计有 Bam H 和 Eco R 限制性酶切位点的 Ovi IL-2。经1 .5%琼脂糖凝胶电泳分析和 Xba 酶切鉴定 PCR产物后 ,将 Ovi IL-2 PCR产物与质粒 p Bluescript SK( + )连接 ,进行 Ovi IL-2基因克隆 ,在含 X-gal和 IPTG的 LB平板上 ,挑选白色单一菌落进行重组质粒筛选 ,用Bam H + Eco R 或 Eco R 酶切提取重组质粒 ,琼脂糖凝胶电泳出现 1条 50 0 bp大小的带 ;用 Eco R 或Eco R + Xba ,Bam H + Xba 酶切重组质粒分别出现 2 70 bp和 2 30 bp大小的带 ,从而筛选出重组质粒p Blue-Ovi IL-2。将筛选出的 p Blue-Ovi IL-2进行序列分析 ,证明克隆的 Ovi

关键词：绵羊白细胞介素2 OviIL-2 克隆序列分析

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猪葡萄球菌的分离鉴定及其脱落素的研究

中国兽医科学 2017年第2期47卷 212-216页

作者：岑静王赛廖华媛李润成葛猛余兴龙湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

为了解患渗出性皮炎仔猪中猪葡萄球菌内表皮脱落素的流行情况,采集2个猪场(A场和B场)29头患病猪的痂皮、痂皮下渗出液共48份,进行了猪葡萄球菌的分离鉴定及其脱落素基因的检测。结果显示,48份样品中共分离到29株含脱落素基因的葡萄球菌... 详细信息

为了解患渗出性皮炎仔猪中猪葡萄球菌内表皮脱落素的流行情况,采集2个猪场(A场和B场)29头患病猪的痂皮、痂皮下渗出液共48份,进行了猪葡萄球菌的分离鉴定及其脱落素基因的检测。结果显示,48份样品中共分离到29株含脱落素基因的葡萄球菌,经生化鉴定和Gap基因测序分析,表明所有菌株均属于猪葡萄球菌。其中,A场和B场分离的猪葡萄球菌脱落素检出率分别为93.3%和64.3%;A场可检出Exh A、Exh C、Exh D和Shet A共4种脱落素基因,B场可检出Exh A、Exh D和Shet A共3种脱落素基因,但Shet A的检出率在2个猪场中均为最高且与其他3种脱落素大量共存,共存率在A场和B场分别为61.5%和70.0%。2个猪场中痂皮源葡萄球菌中脱落素检出率均高于皮下渗出液,脱落素与渗出性皮炎病具有较高的相关性,其检出率受到2个猪场不同的饲养环境和采样部位的影响,Shet A的高检出率与其他脱落素共存的情况,提示该毒素可能广泛参与了猪葡萄球菌的致病作用。

关键词：猪渗出性皮炎猪葡萄球菌表皮脱落素

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利用废弃油制备杀菌护肤药皂的研究

系统医学 2017年第19期2卷 136-138页

作者：于兴龙魏琪黎梅女周琳吉林农业科技学院制药工程学院吉林吉林132101

目的收集家庭生活的废弃油制成药皂。方法超声提法提取薄荷、香薷和蒲公英中有效成分;以黄酮提取率为指标,液料比A、乙醇浓度B、超声温度C、超声时间D做L9(34)正交实验优化黄酮类成分提取工艺;通过抑菌试验确定中药提取物最小抑菌浓度;... 详细信息

目的收集家庭生活的废弃油制成药皂。方法超声提法提取薄荷、香薷和蒲公英中有效成分;以黄酮提取率为指标,液料比A、乙醇浓度B、超声温度C、超声时间D做L9(34)正交实验优化黄酮类成分提取工艺;通过抑菌试验确定中药提取物最小抑菌浓度;将收集的废弃油过滤除杂后加入30%NaOH溶液进行皂化,根据抑菌实验结果加入中药提取物制成药皂。结果根据正交实优化最佳提取工艺为料液比1:25、乙醇浓度60%、温度70℃和超声40 min时总黄酮的提取率为最佳,且对大肠杆菌的最小抑菌浓度为0.06 mg/mL。根据QB/T标准进行总游离件和总氯化物检测。抑菌药皂经肥皂标准质量检查合格。结论通过该实验可以利用废弃油制备出质量合格药皂。

关键词：皂化黄酮药皂

一株鸭源H10N5亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及其对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2019年第1期41卷 1-5页

作者：张元成崔鹏飞韩舒雨薛振宇谷文丽刑鑫余兴龙邓国华陈化兰湖南农业大学湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解湖北省活禽市场鸭源H10N5亚型禽流感病毒(AIV) A/duck/Hu B/S1254/2014 (H10N5)株的生物学特性,本研究对其全基因组进行了测序,并以BABL/c小鼠为动物模型评价其对哺乳动物的感染性。序列分析结果显示:该病毒HA蛋白的裂解位点为334... 详细信息

为了解湖北省活禽市场鸭源H10N5亚型禽流感病毒(AIV) A/duck/Hu B/S1254/2014 (H10N5)株的生物学特性,本研究对其全基因组进行了测序,并以BABL/c小鼠为动物模型评价其对哺乳动物的感染性。序列分析结果显示:该病毒HA蛋白的裂解位点为334PELMQGR↓GLF343,符合低致病性AIV的特征。其表面基因HA、NA以及内部基因PB2和PA与1株江西野鸟源病毒株A/migratory duck/Jiangxi/30246/2013 (H10N5)高度同源,但其它内部基因节段PB1、NP、M和NS则来源于多个亚型的AIV。对小鼠的感染性实验结果显示,该病毒不需要提前适应就能够在小鼠的鼻甲和肺脏中有效复制,病毒滴度分别为4.08 log10 EID50/m L,5.0 log10 EID50/mL,病毒对小鼠呈低致病性,小鼠体重无显著的下降趋势,在感染期间小鼠未出现明显临床症状。本研究为了解H10N5亚型AIV分子进化关系,评估其对哺乳动物的感染风险提供了数据支持。

关键词：禽流感病毒 H10N5亚型序列分析感染性

猪圆环病毒2型感染小鼠脾脏内CD4^+CD25^+调节性T细胞的动态变化

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中国预防兽医学报 2010年第12期32卷 960-963页

作者：许道军余兴龙邓治邦袁安文王乃东薛立群湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

为分析猪圆环病毒2型(PCV2)感染小鼠后脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)占CD4+T细胞比例的动态变化,探讨Tregs与PCV2感染的关系,本研究选择清洁级昆明小鼠60只,随机分成实验组和对照组,实验组腹腔接种PCV2,分别在接种后第0 d、5 d、... 详细信息

为分析猪圆环病毒2型(PCV2)感染小鼠后脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)占CD4+T细胞比例的动态变化,探讨Tregs与PCV2感染的关系,本研究选择清洁级昆明小鼠60只,随机分成实验组和对照组,实验组腹腔接种PCV2,分别在接种后第0 d、5 d、10 d、20 d、30 d和60 d取脾脏制备单细胞悬液,用FITC-CD4和PE-CD25单克隆抗体标记Tregs,采用流式细胞仪检测Tregs占总CD4+T细胞百分比的动态变化。结果表明感染组小鼠脾细胞中Tregs百分比从第5 d开始逐步上升,第20 d达峰值后逐渐下降,感染组Tregs百分比第10 d、20 d、30 d时显著高于对照组(p0.05)。试验结果证明PCV2感染昆明小鼠后,可在小鼠脾脏内诱导明显的Tregs增殖,这些增殖的细胞可能在PCV2感染中发挥免疫抑制作用。

关键词： PCV2 CD4+CD25+调节性T细胞小鼠

鹅出血性多瘤病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2022年第3期52卷 278-284页

作者：罗灵芝杨鹏江丁彦彬勾明郗赵墩余兴龙杨磊湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

为了建立一种能快速、灵敏且准确检测鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)的诊断方法,将GHPV的VP1基因构建到载体pClone007 Blunt Simple Vector上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,以建立GHPV VP1基因的SYBR Gree... 详细信息

为了建立一种能快速、灵敏且准确检测鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)的诊断方法,将GHPV的VP1基因构建到载体pClone007 Blunt Simple Vector上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,以建立GHPV VP1基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性和在临床检测中的应用进行验证。结果显示,所建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的标准曲线呈良好的线性关系,其线性相关系数R^(2)=0.975,其扩增效率E=86.731%,熔解曲线呈现单峰;检测鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒、鹅星状病毒时呈阴性,具有较好的特异性;最低检出浓度为(1.16×10^(1)copies/μL),比普通PCR方法灵敏100倍;其中组内变异系数在0.10%~1.48%之间,组间变异系数在1.07%~2.24%之间,具有较好的重复性和稳定性;对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20%,其中阳性符合率为100%,总符合率为80%。上述结果表明,本研究建立的检测GHPV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对GHPV的快速诊断和监测具有重要意义。

关键词：鹅出血性多瘤病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR

Multiparameter magnetic resonance imaging-based radiomics model for the prediction of rectal cancer metachronous liver metastasis

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World Journal of Gastrointestinal Oncology 2025年第1期17卷 62-72页

作者： Zhi-Da long Xiao yu Zhi-Xiang xing Rui Wang Department of Hepatobiliary and Pancreaticosplenic Surgery Jingzhou Hospital Affiliated to Yangtze UniversityJingzhou 434100Hubei ProvinceChina

BACKGROUND The liver,as the main target organ for hematogenous metastasis of colorectal cancer,early and accurate prediction of liver metastasis is crucial for the diagnosis and treatment of ***,this study aims to investigate the application value of a combined machine learning(ML)based model based on the multiparameter magnetic resonance imaging for prediction of rectal metachronous liver metastasis(MLM).AIM To investigate the efficacy of radiomics based on multiparametric magnetic resonance imaging images of preoperative first diagnosed rectal cancer in predicting MLM from rectal *** We retrospectively analyzed 301 patients with rectal cancer confirmed by surgical pathology at Jingzhou Central Hospital from January 2017 to December *** participants were randomly assigned to the training or validation queue in a 7:3 *** first apply generalized linear regression model(GLRM)and random forest model(RFM)algorithm to construct an MLM prediction model in the training queue,and evaluate the discriminative power of the MLM prediction model using area under curve(AUC)and decision curve analysis(DCA).Then,the robustness and generalizability of the MLM prediction model were evaluated based on the internal validation set between the validation queue *** Among the 301 patients included in the study,16.28%were ultimately diagnosed with MLM through pathological *** analysis showed that carcinoembryonic antigen,and magnetic resonance imaging radiomics were independent predictors of ***,the GLRM prediction model was developed with a comprehensive nomogram to achieve satisfactory *** prediction performance of GLRM in the training and validation queue was 0.765[95%confidence interval(CI):0.710-0.820]and 0.767(95%CI:0.712-0.822),*** with GLRM,RFM achieved superior performance with AUC of 0.919(95%CI:0.868-0.970)and 0.901(95%CI:0.850-0.952)in the training and validation queue,respect

关键词： Rectal cancer Metachronous liver metastases Magnetic resonance imaging Radiomics Machine learning

猪繁殖与呼吸综合征病毒A06株单克隆抗体的制备及鉴定

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动物医学进展 2009年第12期30卷 1-4页

作者：廖立珊詹爱军杨俊兴曾少灵花群义余兴龙秦智锋林庆燕湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 深圳出入境检验检疫局动植物检疫技术中心广东深圳518100

用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)A06株病毒抗原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3D12、4E10、6E... 详细信息

用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)A06株病毒抗原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3D12、4E10、6E2和7G6。其细胞培养上清效价分别为1∶256、1∶512、1∶512和1∶256,小鼠腹水效价分别为1∶1.024×106、1∶2.048×106、1∶1.024×106和1∶2.048×106。亚型鉴定表明,3D12、4E10、6E2和7G6分别为IgG2b、IgG2b、IgG1和IgG2a。ELISA检测结果显示,4种PRRSV单克隆抗体仅与PRRSV反应,不与其他病毒反应,表明均为抗PRRSV的型特异性单克隆抗体。对单克隆抗体腹水液进行IgG提取纯化,SDS-PAGE电泳验证,仅出现两条清晰条带,无杂带出现,证明纯化效果较好。这4种单克隆抗体的获得,为建立PRRSV检测方法提供了强有力的工具。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体生物学特性