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Development of a droplet digital polymerase chain reaction assay for the sensitive detection of total and integrated HIV-1 DNA

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Chinese Medical Journal 2024年第6期137卷 729-736页

作者： Lin Yuan Zhiying Liu Xin Zhang Feili Wei Shan Guo Na Guo Lifeng Liu Zhenglai Ma Yunxia Ji Rui Wang xiaofan lu Zhen Li Wei Xia Hao Wu Tong Zhang Bin Su Beijing Key Laboratory for HIV/AIDS Research Clinical and Research Center for Infectious DiseasesBeijing Youan HospitalCapital Medical UniversityBeijing 100069China Beijing Institute of Hepatology Beijing Youan HospitalCapital Medical UniversityBeijing 100069China

Background:Total human immunodeficiency virus(HIV)DNA and integrated HIV DNA are widely used markers of HIV persistence.Droplet digital polymerase chain reaction(ddPCR)can be used for absolute quantification without needing a standard curve.Here,we developed duplex ddPCR assays to detect and quantify total HIV DNA and integrated HIV DNA.Methods:The limit of detection,dynamic ranges,sensitivity,and reproducibility were evaluated by plasmid constructs containing both the HIV long terminal repeat(LTR)and human CD3 gene(for total HIV DNA)and ACH-2 cells(for integrated HIV DNA).Forty-two cases on stable suppressive antiretroviral therapy(ART)were assayed in total HIV DNA and integrated HIV DNA.Correlation coefficient analysis was performed on the data related to DNA copies and cluster of differentiation 4 positive(CD4^(+))T-cell counts,CD8^(+)T-cell counts and CD4/CD8 T-cell ratio,respectively.The assay linear dynamic range and lower limit of detection(LLOD)were also assessed.Results:The assay could detect the presence of HIV-1 copies 100%at concentrations of 6.3 copies/reaction,and the estimated LLOD of the ddPCR assay was 4.4 HIV DNA copies/reaction(95%confidence intervals[CI]:3.6-6.5 copies/reaction)with linearity over a 5-log_(10)-unit range in total HIV DNA assay.For the integrated HIV DNA assay,the LLOD was 8.0 copies/reaction(95%CI:5.8-16.6 copies/reaction)with linearity over a 3-log 10-unit range.Total HIV DNA in CD4^(+)T cells was positively associated with integrated HIV DNA(r=0.76,Plusions:This ddPCR assay can quantify total HIV DNA and integrated HIV DNA efficiently with robustness and sensitivity.It can be readily adapted for measuring HIV DNA with non-B clades,and it could be beneficial for testing in clinical trials.

关键词： Human immunodeficiency virus HIV Integrated HIV-1 DNA Total HIV DNA Droplet digital polymerase chain reaction HIV reservoir Antiretroviral therapy

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Glut1 expression on CD8^(dim)T cells is associated with immune recovery in HIV-1-infected individuals

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Chinese Medical Journal 2023年第24期136卷 2999-3001页

作者： Xiuwen Wang Xin Zhang xiaofan lu Zhen Li Lifeng Liu Hao Wu Tong Zhang Bin Su Beijing Key Laboratory for HIV/AIDS Research Clinical and Research Center for Infectious DiseasesBeijing Youan HospitalCapital Medical UniversityBeijing 100069China

To the Editor:Immune non-responders(INRs),who account for approximately 10-40%of human immunodeficiency virus(HIV)-infected individuals,have received effective treatment and exhibit persistent suppression of viral replication,but their CD4^(+)T-cell counts are not restored.They are likely to have an increased risk of non-acquired immunodeficiency syndrome(AIDS)-related morbidity and mortality compared with immune responders(IRs).[1]CD8^(+)T cells play an important role in viral infection,and the functional properties of circulating CD8^(+)T cells have been associated with immune control of HIV.High CD8^(+)T-cell counts are beneficial for persistent viral decay and CD4 T-cell recovery in immune-restored patients during long-term antiretroviral therapy(ART).[2]Two subsets of CD8^(+)T cells have been identified according to their intensity of CD8 expression:CD8^(bri)and CD8^(dim)T lymphocytes.It was demonstrated that CD3^(+)CD8^(dim)T cells,with weaker function than CD3^(+)CD8^(bri)T cells,were associated with disease progression during HIV infection.[3]However,dynamic changes in the numbers of CD8^(bri)and CD8^(dim)T cells in INRs and IRs before and after ART have not yet been reported.

关键词： infected mortality likely

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Gut-homing α4β7 CD4+ T cells: potential key players in both acute HIV infection and HIV-associated cancers

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Cellular & Molecular Immunology 2018年第2期15卷 190-192页

作者： Yang Wang xiaofan lu Hao Wu Wei Li Center of Interventional Oncology and Liver Diseases Beijing You'an HospitalCapital Medical UniversityBeijing100069China Beijing Key Laboratory for HIV/AIDS Research Beijing100069China Center of Infectious Disease Beijing You'an HospitalCapital Medical UniversityBeijing100069China

During acute human immunodeficiency virus(HIV)infection,depletion of CD4^(+) T cells in the host gut mucosa occurs prior to its occurrence in the peripheral blood and other lymphoid tissues.Expression of integrinα4β7,a gut-homing receptor on CD4^(+) T cells,not only provides a potential receptor for HIV but also plays a critical role in lymphocyte migration from the circulation to the intestine.In our previous study,it was found that circulating gut-homingα4β7 CD4^(+) T cells,including the Th17 and Th1 subsets,were significantly depleted during acute HIV-1 infection.1 Moreover,no gut-homing Treg cells were depleted.Thus,the gut-homing Treg:Th17 ratio was inversely correlated with the CD4 T+cell count.

关键词： α4β7 Th17 acute

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Changing roles of CD3^(+)CD8^(low) T cells in combating HIV-1 infection

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Chinese Medical Journal 2023年第4期136卷 433-445页

作者： Xin Zhang Xiuwen Wang Ling Qin xiaofan lu Zhiying Liu Zhen Li Lin Yuan Rui Wang Junyan Jin Zhenglai Ma Hao Wu Yonghong Zhang Tong Zhang Bin Su Beijing Key Laboratory for HIV/AIDS Research Sino-French Joint Laboratory for Research on Humoral Immune Response to HIV InfectionClinical and Research Center for Infectious DiseasesBeijing Youan HospitalCapital Medical UniversityBeijing 100069China Research Center for Biomedical Resources Beijing Youan HospitalCapital Medical UniversityBeijing 100069China

Background:Cluster of differentiation 8(CD8 T)cells play critical roles in eradicating human immunodeficiency virus(HIV)-1 infection,but little is known about the effects of T cells expressing CD8 at low levels(CD8^(low))or high levels(CD8^(high))on HIV-1 replication inhibition after HIV-1 invasion into individual.Methods:Nineteen patients who had been acutely infected with HIV-1(AHI)and 20 patients with chronic infection(CHI)for≥2 years were enrolled in this study to investigate the dynamics of the quantity,activation,and immune responses of CD3^(+)CD8^(low) T cells and their counterpart CD3^(+)CD8^(high) T cells at different stages of HIV-1 infection.Results:Compared with healthy donors,CD3^(+)CD8^(low) T cells expanded in HIV-1-infected individuals at different stages of infection.As HIV-1 infection progressed,CD3^(+)CD8^(low) T cells gradually decreased.Simultaneously,CD3^(+)CD8^(high) T cells was significantly reduced in the first month of AHI and then increased gradually as HIV-1 infection progressed.The classical activation of CD3^(+)CD8^(low) T cells was highest in the first month of AHI and then reduced as HIV-1 infection progressed and entered the chronic stage.Meanwhile,activated CD38^(-)HLA-DR^(+)CD8^(low) T cells did not increase in the first month of AHI,and the number of these cells was inversely associated with viral load(r=-0.664,P=0.004)but positively associated with the CD4 T-cell count(r=0.586,P=0.014).Increased programmed cell death protein 1(PD-1)abundance on CD3^(+)CD8^(low) T cells was observed from the 1st month of AHI but did not continue to be enhanced,while a significant T cell immunoreceptor with immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif(ITIM)domains(TIGIT)abundance increase was observed in the 12th month of infection.Furthermore,increased PD-1 and TIGIT abundance on CD3^(+)CD8^(low) T cells was associated with a low CD4 T-cell count(PD-1:r=-0.456,P=0.043;TIGIT:r=-0.488,P=0.029)in CHI.Nonetheless,the nonincrease in PD-1 expression on classically activated CD3^(

关键词： Acute human immunodeficiency virus-1 infection HIV CD3^(+)CD8^(low)T cells Immune activation Programmed cell death protein 1 T cell immunoreceptor with immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif domains

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改革开放初期青年工人文化技术补习工作探析——以上海小三线为中心

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安徽大学学报（哲学社会科学版） 2024年第3期48卷 89-98页

作者：石云里鲁小凡中国科学技术大学科技史与科技考古系安徽合肥230026

改革开放初期,党和国家的工作重心转移到了社会主义现代化建设上,开展青年工人文化技术补习成为一项重要工作。上海市积极响应,在上海小三线企业中采用多元化的工作模式,开展了以政治学习为基础、文化和技术知识为主要内容、经济基础知... 详细信息

改革开放初期,党和国家的工作重心转移到了社会主义现代化建设上,开展青年工人文化技术补习成为一项重要工作。上海市积极响应,在上海小三线企业中采用多元化的工作模式,开展了以政治学习为基础、文化和技术知识为主要内容、经济基础知识为辅助的文化技术补习工作。虽在开展此项工作过程中存在保障措施不足、法治教育薄弱和新老职工待遇没有平衡好等问题,但也提高了上海小三线青年工人的学历层次,提升了小三线企业的经济效益,并为区域工业化进程提供了人才支撑。此项工作既总结了前期职工教育的不足,也为后续工作提供了实践经验。

关键词：改革开放上海小三线青年工人文化技术补习

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HIV感染急性期治疗对α4β7肠道归巢CD4细胞保护作用的研究

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中国艾滋病性病 2024年第1期30卷 1-7页

作者：王蕊计云霞陆小凡首都医科大学附属北京佑安医院、感染性疾病临床研究中心、艾滋病研究北京市重点实验室北京100069

目的探讨HIV感染急性期ART对α4β7肠道归巢CD4细胞及其功能亚群的保护作用。方法入组HIV感染急性期(AHI)cART患者71名、慢性期(CHI)cART患者29名和HIV抗体阴性健康对照者(HC)32名。采用流式分析方法,分别检测HC、AHI和CHI在cART基线(0... 详细信息

目的探讨HIV感染急性期ART对α4β7肠道归巢CD4细胞及其功能亚群的保护作用。方法入组HIV感染急性期(AHI)cART患者71名、慢性期(CHI)cART患者29名和HIV抗体阴性健康对照者(HC)32名。采用流式分析方法,分别检测HC、AHI和CHI在cART基线(0周)、24周、48周和96周α4β7CD4细胞及其功能亚群α4β7Treg、α4β7Th1和α4β7Th17比例;HC、AHI和CHI 0周和96周CD38+HLA-DR+CD8细胞比例。ELISA检测HC、AHI和CHI 0周和96周血浆可溶性CD14(sCD14)浓度。结果与HC相比,AHI和CHIα4β7CD4细胞比例在0周均显著下降[AHI vs.HC:(8.214±3.074)vs.(10.027±2.617),P<0.010;CHI vs.HC:(7.290±2.295)vs.(10.027±2.617),P<0.010]。cART 96周后,AHI和CHIα4β7CD4细胞比例仍显著低于HC。AHI 0周和96周α4β7Th17细胞比例与HC差异无统计学意义。不同基线CD4细胞数量开展AHI cART过程中,α4β7Th17细胞比例差异均无统计学意义,且0周α4β7Th17细胞比例与0周和cART 96周血浆sCD14浓度(0周:r=-0.310,P=0.018;96周:r=-0.270,P=0.039)、0周CD38+HLA-DR+CD8细胞比例(r=-0.279,P=0.042)负相关。结论开展急性期cART可以有效保护α4β7CD4细胞亚群α4β7Th17细胞。

关键词：艾滋病病毒急性期治疗肠道归巢 α4β7 Th17

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虚拟现实技术对电视节目制作和观众参与度的影响分析

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传媒论坛 2024年第4期7卷 61-63页

作者：鲁小帆内蒙古广播电视台

虚拟现实(VR)技术的快速发展对各行各业产生了深远影响。虚拟现实技术为电视节目制作提供了新的创意和表现方式,同时也改变了观众与节目之间的互动模式。分析虚拟现实技术对电视节目制作和观众参与度的影响,探讨虚拟现实技术在电视节目... 详细信息

虚拟现实(VR)技术的快速发展对各行各业产生了深远影响。虚拟现实技术为电视节目制作提供了新的创意和表现方式,同时也改变了观众与节目之间的互动模式。分析虚拟现实技术对电视节目制作和观众参与度的影响,探讨虚拟现实技术在电视节目制作中的应用基础,指出虚拟现实技术对电视观众参与度的影响,明确了应用虚拟现实技术对电视节目制作的挑战,最后从虚拟演播室创设和360度全景摄像运用方面提出了以虚拟现实提升电视节目制作中观众参与度的具体措施。

关键词：虚拟现实电视节目制作观众参与度影响

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Preferential loss of gut-homing a4β7 CD4＋T cells and their circulating functional subsets in acute HIV-1 infection

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Cellular & Molecular Immunology 2016年第6期13卷 776-784页

作者： xiaofan lu Zhen Li Qunhui Li Yanmei Jiao Yunxia Ji Hongwei Zhang Zhuoming Liu Wei Li Hao Wu STD/HIV Research Laboratory Beijing You-An Hospital Capital Medical University Beijing 100069 People's Republic of China Beijing Key Laboratory for HIV/AIDS Research Beijing 100069 People's Republic of China Center for Infectious Diseases Beijing You-An Hospital Capital Medical University Beijing 100069 People's Republic of China Case Comprehensive Cancer Center and Department of Pathology Case Western Reserve UniversityCleveland OH 44106 USA

Preferential infection and depletion of gut-homing a4β7 CD4＋ T cells in the blood are observed in chronic HIV/SIV infection. The dynamic change in gut-homing a4p7 CD4＋ T cells and their functional subsets during the acute stages of HIV-1 infection are less documented. Therefore, we conducted a cohort study to investigate whether acute HIV-1 infection induced abnormalities in gut-homing a4β7 CD4＋ T cells and their functional subsets. We examined the frequency, absolute number, and functionality of gut-homing a4β7 CD4＋ T cells in 26 acute HIV-l-infected patients compared with 20 healthy individuals. We found that circulating gut-homing a4β7 CD4＋ T cells were preferentially depleted during acute HIV-1 infection and were positively correlated with absolute CD4＋ T-cell count in blood. Notably, Th17 and Thl cell subsets of gut-homing CD4＋ T cells were also decreased, which resulted in an imbalance of T helper cells （Th 1）-regulatory T cells （Treg） and Treg.Th 17 ratios. Gut-homing Th17 and Thl cells were also positively correlated with the absolute number of total CD4＋ T cells and gut-homing CD4＋ T cells. The gut-homing Treg：Th17 ratio was inversely correlated with the CD4＋ T-cell count. Taken together, the analyses of our acute HIV-1 cohort demonstrate that gut-homing a4β7 CD4＋ T cells and their functional subsets were profoundly depleted during acute HIV-1 infection, which may have resulted in the persistent loss of circulating CD4＋ T cells and an imbalance of Thl-Treg and Treg.Th17 ratios and contribute to HIV-1 disease pathogenesis.

关键词： gut-homing HIV-1 disease pathogenesis integrin a4β7 Th17 cells

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糖基化CD59在妊娠期糖尿病精准诊断中的研究进展

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实用临床医药杂志 2024年第4期28卷 145-148页

作者：王婉莹陆小凡徐冲张瑛邹会玲孙宇徐州医科大学研究生院江苏徐州221004 徐州医科大学附属宿迁医院内分泌科江苏宿迁223800

近年来,妊娠期糖尿病(GDM)患病率显著升高,引发产妇及其子代多种不良结局,而早期诊断和良好控制血糖可显著改善妊娠结局。目前,GDM诊断主要依据口服葡萄糖耐量试验(OGTT),但临床应用时存在诸多不足。新型生物学标志物糖基化CD59是一种... 详细信息

近年来,妊娠期糖尿病(GDM)患病率显著升高,引发产妇及其子代多种不良结局,而早期诊断和良好控制血糖可显著改善妊娠结局。目前,GDM诊断主要依据口服葡萄糖耐量试验(OGTT),但临床应用时存在诸多不足。新型生物学标志物糖基化CD59是一种补体调节蛋白的糖基化产物,可在体液中稳定存在,与血糖水平呈线性相关,具有测试简便、可重复性佳等优点,且已开发出可稳定使用的试剂盒,在GDM的早期诊断、标准诊断和妊娠结局预测等方面均显示出良好的价值。

关键词：妊娠期糖尿病糖基化CD59 精准诊断妊娠结局生物标志物血糖

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基于网络药理学方法、分子对接技术及动物实验验证探讨通塞颗粒治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期的作用机制

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新中医 2024年第6期56卷 170-185页

作者：付子坚李建生田燕歌赵鹏燕苗苗芦晓帆河南中医药大学第二临床医学院河南郑州450011 河南中医药大学呼吸系统疾病重点实验室河南郑州450046 河南中医药大学第一临床医学院河南郑州450046

目的:基于网络药理学方法、分子对接技术和动物实验验证探讨通塞颗粒治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的作用机制。方法:(1)预测分析。通过中药系统药理学分析平台筛选通塞颗粒的活性成分及其对应靶点;利用人类基因(Genecards)... 详细信息

目的:基于网络药理学方法、分子对接技术和动物实验验证探讨通塞颗粒治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的作用机制。方法:(1)预测分析。通过中药系统药理学分析平台筛选通塞颗粒的活性成分及其对应靶点;利用人类基因(Genecards)、在线人类孟德尔遗传数据系统(OMIM)等数据库检索AECOPD疾病基因;绘制韦恩图并获取药物-疾病共同靶点;构建通塞颗粒活性成分-靶点网络图和蛋白质相互作用网络图,根据网络关系筛选核心靶点;借助R语言软件进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,使用AutoDockTool 1.5.6软件对通塞颗粒关键活性成分和核心靶点进行分子对接。(2)实验验证。随机将50只SD大鼠分为对照组、模型组、中药组、西药组、联合组各10只。除对照组外,其余各组均构建AECOPD大鼠模型,并于急性加重前2 d及其后4 d予药物灌胃治疗。治疗结束后检测各组大鼠的肺功能指标[0.3 s用力呼气容积(FEV_(0.3))、用力肺活量(FVC)、0.3 s用力呼气容积与用力肺活量的比值(FEV_(0.3)/FVC)、呼气流量峰值(PEF)],检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-17含量,通过苏木精-伊红染色法(HE)观察气道与肺组织的病理改变,采用免疫印迹法和酶联免疫吸附测定法初步验证网络药理学的预测结果。结果:通塞颗粒治疗AECOPD的关键活性成分为槲皮素、芹黄素、木犀草素、山奈酚、β-谷甾醇,主要作用于肿瘤抑制蛋白53(TP53)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)等核心靶点。GO富集分析和KEGG通路富集分析结果表明,通塞颗粒治疗AECOPD与TNF、IL-17等信号通路干预氧化应激、减少细胞凋亡、抑制炎症反应有关。分子对接结果显示,通塞颗粒的关键活性成分与治疗AECOPD的核心靶点均有较好的结合活性。动物实验研究结果显示,模型组FVC、FEV_(0.3)、FEV_(0.3)/FVC、PEF值均较对照组降低(P0.05)。联合组FVC、PEF值均较中药组及西药组升高(P<0.05);联合组FEV_(0.3)较西药组升高(P<0.05)。模型组血清TNF-α、IL-17含量均高于对照组(P<0.05);中药组、西药组及联合组的TNF-α、IL-17含量均低于模型组(P<0.05);联合组血清TNF-α、IL-17含量均低于中药组、西药组(P<0.05)。模型组肺组织磷酸化P65/非磷酸化P65、磷酸化AKT/非磷酸化AKT、磷酸化MAPK1/3/非磷酸化MAPK1/3和非磷酸化TP53/GAPDH蛋白表达含量均高于对照组(P<0.05);中药组、西药组以及联合组上述蛋白表达含量均低于模型组(P<0.05);联合组上述蛋白表达含量均低于中药组、西药组(P<0.05)。结论:通塞颗粒治疗AECOPD具有多成分、多靶点、多通路、整体调节的作用特点,为后续深入研究提供了数据支持。

关键词：慢性阻塞性肺疾病急性加重期通塞颗粒网络药理学分子对接技术核心靶点信号通路

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