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HSVTK Gene Therapy for CarcinoembryonicAntigen-Producing Human Lung Cancer Cells

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Wuhan University Journal of Natural Sciences 1999年第3期4卷 367-371页

作者： xiao geng-fu Qi Yi-peng Cheng Xuan-hong Li Ling-yun College of Life Sciences Wuhan University Wuhan China

The long-term success of gene therapy for cancer relies heavily on the development of effective targeting systems. We investigate the possibility of targeted gene therapy using promoter of carcinoembryonic antigen (CEA) gene. By using luciferase reporter gene, we found that CEA promoter exhibit 16 times high activity in CEA-producing lung cancer cells, A549 than in nonproducing cells, Hela. We also constructed a recombinant expression plasmid pCEATK, in which CEA promoter drives the effector gene, thymidine kinase gene of Herpes Simplex Virus (HSVTK). A549 cells transfected with pCEATK became 865 times more sensitive to ganciclovir (GCV) than the control cells. However, Hela cells transfected with this plasmid remained resistant to GCV. These data indicate the potential for targeted gene therapy using the CEA promoter against CEA-producing tumor cells, such as lung cancer cells.

关键词： carcinoembryonic antigen Herpes Simplex Virus thymidine kinase gene gene therapy

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一种快速简便的CaCl_2质粒转化方法

生物化学与生物物理进展 2000年第1期27卷 96-98页

作者：肖庚富齐义鹏李莉易巍武汉大学病毒学及分子生物学系武汉430072

介绍一种质粒DNA快速转化方法.质粒DNA加入感受态细胞,冰浴3～10min,涂布预热至37℃的平板,即可获得与常规转化方法相当的转化效率.操作步骤由5步减至2步,时间由2h减至3～10min.同时探讨了Ca2+浓度。

关键词：质粒转化感受态细胞 CaCl2法转化效率 DNA

H5N1亚型禽流感病毒核蛋白NP的原核表达及抗体制备

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中国人兽共患病学报 2008年第3期24卷 202-204,209页

作者：罗孟成陶攀肖庚富潘兹书武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

目的制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体。方法以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板,PCR扩增获得NP基因抗... 详细信息

目的制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体。方法以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板,PCR扩增获得NP基因抗原区片段,克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-ΔNP,转化大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIL,IPTG诱导重组蛋白表达。采用Ni亲和层析方法纯化NP重组蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价;间接免疫荧光检测所制备抗体与真核细胞表达NP蛋白的反应性。结果与结论成功的制备了高效价兔抗NP抗体,抗体效价在105以上,该抗体能与原核和真核系统中表达的NP蛋白特异性反应,为研制以NP蛋白为抗原组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法奠定了基础。

关键词： H5N1A型流感病毒核蛋白NP 原核表达多克隆抗体

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重组可溶性人TRAIL抑制肿瘤细胞增殖

武汉大学学报（理学版） 2005年第4期51卷 467-471页

作者：王军于雯华康舒里肖庚富武汉大学生命科学学院湖北武汉430072

取健康人外周血得到总RNA,利用RT-PCR获取全长TRAILcDNA,以此为模板,在2对不同的引物下作PCR,得到不同长度的DNA片段,克隆到表达载体pET30a,得到重组质粒pET30a-TRAIL(114～281)和pET30a-TRAIL(120～281),转化*** BL21(DE3)pLySs表达并纯化了2种不同长度的可溶性蛋白,分别是TRAIL(114～281)(蛋白A), TRAIL(120～281 )(蛋白B).经MTT(四甲基偶氮唑盐)实验表明蛋白B能在6 h内抑制不同类型的肿瘤细胞增殖,但其活性明显弱于蛋白A.

关键词：肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体蛋白纯化抗肿瘤活性

传染性造血组织坏死症病毒囊膜蛋白在原核细胞中的表达

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华中农业大学学报 2009年第2期28卷 210-213页

作者：郭露玲刘海滨石剑李谷肖庚富华中农业大学水产学院武汉430070 武汉大学生命科学学院／病毒学国家重点实验室武汉430072

通过RT-PCR获得了传染性造血组织坏死症病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)囊膜糖蛋白(G蛋白)基因,并将其克隆入新型MBP(麦芽糖结合蛋白)融合表达质粒pMAL-c2X,构建重组质粒pMAL-c2X/IHNV-G并转入大肠杆菌Rossetta-gami2(DE3)splyS。经IPTG诱导后,表达出包含全长G蛋白在内、预期分子质量为99 ku的融合蛋白。基于anti-MBP抗体的Western blot鉴定证实表达蛋白存在。

关键词：传染性造血组织坏死症病毒囊膜蛋白基因克隆原核表达

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致死性家族性失眠症一例临床及基因特征

中华神经科杂志 2005年第10期38卷 628-631页

作者：张敏梅元武魏桂荣袁光雷俞水亮肖庚富华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科武汉430022 武汉大学生命科学院病毒学国家重点实验室CJD监测中心

目的研究及报道1例致死性家族性失眠症(fatalfamilial insomnia,FFI)的临床及人类朊蛋白(human prion protein,PrP)基因特征。方法分析了1例疑为FFI患者的临床特征,采集血样后抽提DNA,应用聚合酶链反应(PCR)方法结合DNA测序技术,分析患... 详细信息

目的研究及报道1例致死性家族性失眠症(fatalfamilial insomnia,FFI)的临床及人类朊蛋白(human prion protein,PrP)基因特征。方法分析了1例疑为FFI患者的临床特征,采集血样后抽提DNA,应用聚合酶链反应(PCR)方法结合DNA测序技术,分析患者PrP基因突变。结果根据患者临床表现及PrP基因检测结果(PrP基因532G→A:D178N突变,129基因型为MM)诊断FFI。结论该患者特征性的呼吸困难和内环境紊乱值得重视,PrP基因检测对于确立FFI的诊断具有极其重要的作用,该FFI患者的发现,具有较大的临床和科研意义。

关键词：失眠症,致死性家族性朊病毒

分子内二硫键对HERV囊膜蛋白融合核心结构的影响

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中国病毒学 2006年第5期21卷 437-442页

作者：冯慧星黄力勤龚睿彭小雪康舒里田波肖庚富武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

合胞素(Syncytin)是一类由人俘获的逆转录病毒囊膜蛋白,与胎盘的形态发生中细胞滋养层到合胞滋养层的分化过程十分相关。Syncytin与人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)囊膜蛋白(Env)在结构上具有相似的特点,二者可能具有相似的膜融合机制。本文通... 详细信息

合胞素(Syncytin)是一类由人俘获的逆转录病毒囊膜蛋白,与胎盘的形态发生中细胞滋养层到合胞滋养层的分化过程十分相关。Syncytin与人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)囊膜蛋白(Env)在结构上具有相似的特点,二者可能具有相似的膜融合机制。本文通过PCR对融合核心部位七肽重复区HR1和HR2之间linker中自然存在的一对保守的分子内二硫键进行定点突变,表达纯化该突变蛋白,并进行了相应的结构及稳定性探讨,通过与未突变蛋白的性质比较确证该分子内二硫键在蛋白结构的正确形成及稳定性上起着一定的作用。

关键词：合胞素二硫键膜融合

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水葫芦根厌氧发酵与沙角衣藻生长偶联研究

四川大学学报（自然科学版） 2009年第6期46卷 1877-1881页

作者：刘萍耿小娟刘翔傅华龙兰利琼四川大学生命科学学院成都610064

对水葫芦采用不同浓度的NaOH预处理,研究其对水葫芦厌氧发酵产气量的影响. 在培养基中分别加入乙酸钠、碳酸氢钠和发酵上清液培养沙角衣藻,讨论对沙角衣藻生长的影响. 结果发现,2% 浓度的NaOH预处理对根发酵产气最为有利,根叶混合物经... 详细信息

对水葫芦采用不同浓度的NaOH预处理,研究其对水葫芦厌氧发酵产气量的影响. 在培养基中分别加入乙酸钠、碳酸氢钠和发酵上清液培养沙角衣藻,讨论对沙角衣藻生长的影响. 结果发现,2% 浓度的NaOH预处理对根发酵产气最为有利,根叶混合物经预处理后可获得802.6 mL/100 g新鲜底物的最佳产气量;以乙酸钠作培养基碳源,沙角衣藻生物量能得到明显积累,可从初始的0.4×10~6个/mL达到10 d后的2.84×10~6个/***：Eichhornia crassipes Solms was pretreated with different concentration of NaOH to study the influence of pretreation on gas production volume. CH_3COONa、NaHCO_3 and supernatant of anaerobic fermentation of Eichhornia crassipes Solms liquor were separately added into culture medium of Chlamydomonas sajiao Lewin to study the effect of carbon source on the growth of algae. The 2% concentration was the best pretreation concentration for gas production, and each 100 g fresh substrate of the mixture (of roots and leaves) produced 802.6 mL biogas. And CH_3COONa obviously promoted the growth of Chlamydomonas sajiao Lewin, the biomass varied from the initial 0.4×10~6 algae per milliliter to the final 2.84×10~6 algae per milliliter.

关键词：芦根厌氧发酵沙角衣藻生长偶联 Eichhornia crassipes gas production anaerobic fermentation the growth 预处理发酵产气 culture medium carbon source 乙酸钠水葫芦培养基产气量 NaOH study influence

Microstructures of Ti–Ni–Fe wire after severe cold-drawing and annealing

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Rare Metals 2013年第6期32卷 550-554页

作者： Hui-Fang geng fu-Shun Liu School of Material Science and Engineering Beijing University of Aeronautics and Astronatics

The microstructures and mechanical properties of Ti–47 at%Ni–3 at%Fe shape memory alloy wire under the condition of severe cold-drawing at room temperature and different postdeformation annealing processes were intensively investigated using transmission electron microscope(TEM),X-ray diffraction(XRD),Vickers microhardness tester and electron tensile *** is indicated that the structure of the alloy evolves into a predominant amorphous structure with a trace of nanocrystalline B2 phase after the cold-drawing of 76%areal *** annealing process exerted significant influence on the microstructure and mechanical *** occurs when the cold-drawn wire was annealed at 300℃ for 30 *** ultimate tensile strength and ductility as well as the superelasticity of the wire are improved significantly by cold-drawing plus postdeformation annealing.

关键词： Ti–Ni–Fe wire Severe plastic deformation Cold-drawing Annealing Amorphous structure