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Desulfovibrio desulfuricans aggravates atherosclerosis by enhancing intestinal permeability and endothelial TLR4/NF-kB pathway in Apoe^(-/-) mice

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Genes & Diseases 2023年第1期10卷 239-253页

作者： Kun Zhang Xian Qin Juhui Qiu Tong Sun Kai Qu Ahmad Ud Din Wenhua Yan Tianhan Li Yidan Chen Wei Gu xiancai rao Guixue Wang Key Laboratory for Biorheological Science and Technology of Ministry of Education State and Local Joint Engineering Laboratory for Vascular ImplantsCollege of BioengineeringChongqing UniversityChongqing 400044China College of Information and Management Sciences Henan Agricultural UniversityZhengzhouHenan 450046China School of Medicine Chongqing UniversityChongqing 400030China Department of Microbiology College of Basic Medical SciencesArmy Medical University(Third Military Medical University)Chongqing 400037China

It is increasingly aware that gut microbiota is closely associated with ***,which and how specific gut bacteria regulate the progression of atherosclerosis is still poorly *** this study,modified linear discriminant analysis was performed in comparing the gut microbiota structures of atherosclerotic and non-atherosclerotic mice,and Desulfovibrio desulfuricans(***)was found to be associatedwith ***-treated Apoe^(-/-) mice showed significantly aggravated *** proatherogenic effect of *** was attributed to its ability to increase intestinal permeability and subsequent raise in the transit of lipopolysaccharide(LPS)from the intestine to the *** LPS in the blood can elicit local and systemic inflammation and activate Toll-like receptor 4(TLR4)/nuclear factor-kB(NF-kB)signaling of endothelial ***-242,a specific inhibitor of TLR4,can ameliorate the development of *** atherosclerosis by blocking the LPS-induced activation of TLR4/NF-kB signaling.

关键词： Atherosclerosis Desulf ovibrio desulfuricans Gut microbiota Linear discriminant analysis TAK-242

Beyond the classroom lecture： Liang Wang＇s personal war on tuberculosis in China

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Protein & Cell 2016年第10期7卷 697-698页

作者： Ming Li Xiaomei Hu Fuquan Hu xiancai rao Department of Microbiology College of Basic Medical Sciences Third Military Medical University Chongqing 400038 China

Tuberculosis, historically one of the deadliest and most prevalent infectious diseases, is caused by the bacterium Mycobacterium tuberculosis. It is estimated that one-third of the world＇s population is infected by this agent （Zumla et al., 2014）, and tuberculosis is therefore a major topic for medical students. M. tuberculosis is a small aerobic bacillus, with a remarkably high lipid-content cell wall that plays a critical role in its pathoeenicitv.

关键词： Tuberculosis Monosodium Glutamate Prevalent Infectious Disease National Vaccination Program Sichuan Region

Optimizing a high-sensitivity NanoLuc-based bioluminescence system for in vivo evaluation of antimicrobial treatment

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mLife 2023年第4期2卷 462-478页

作者： Weilong Shang Zhen Hu Mengyang Li Yuting Wang Yifan rao Li Tan Juan Chen Xiaonan Huang Lu Liu He Liu Zuwen Guo Huagang Peng Yi Yang Qiwen Hu Shu Li Xiaomei Hu Jiao Zou xiancai rao Department of Microbiology College of Basic Medical SciencesKey Laboratory of Microbial Engineering Under the Educational Committee in ChongqingArmy Medical University(Third Military Medical University)ChongqingChina Department of Microbiology School of MedicineChongqing UniversityChongqingChina Department of Emergency Medicine Xinqiao HospitalArmy Medical University(Third Military Medical University)ChongqingChina Department of Pharmacy Xinqiao HospitalArmy Medical University(Third Military Medical University)ChongqingChina Department of Military Cognitive Psychology School of PsychologyArmy Medical University(Third Military Medical University)ChongqingChina.

Focal and systemic infections are serious threats to human *** models enable the development of new drugs and therapeutic *** vivo,animal bioluminescence(BL)imaging has been used with bacterial reporter strains to evaluate antimicrobial treatment ***,high-sensitivity bioluminescent systems are required because of the limited tissue penetration and low brightness of the BL signals of existing ***,we report that NanoLuc(Nluc)showed better performance than LuxCDABE in ***,the retention rate of plasmid constructs in bacteria was *** construct stable Staphylococcus aureus reporter strains,a partner protein enolase(Eno)was identified by screening of *** strain USA300 for fusion expression of Nluc-based luciferases,including Nluc,Teluc,and *** substrates,such as hydrofurimazine(HFZ),furimazine(FUR),and diphenylterazine(DTZ),were used to optimize a stable reporter strain/substrate pair for BL *** USA300/Eno-Antares2/HFZ produced the highest number of photons of orange-red light in vitro and enabled sensitive BL tracking of *** in vivo,with sensitivities of approximately 10 CFU from mouse skin and 750 CFU from mouse ***300/Eno-Antares2/HFZ was a powerful combination based on the longitudinal evaluation of the therapeutic efficacy of *** optimized *** Eno-Antares2/HFZ pair provides a technological advancement for the in vivo evaluation of antimicrobial treatment.

关键词： antimicrobial evaluation bioluminescence imaging Nluc-based luciferases Staphylococcus aureus therapeutic efficacy

基于Antares2的金黄色葡萄球菌生物发光示踪系统的构建

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陆军军医大学学报 2023年第5期45卷 393-399页

作者：胡珍尚伟龙饶贤才陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆400038

目的构建融合型荧光素酶标记的金黄色葡萄球菌示踪菌株,建立金葡菌示踪系统。方法采用同源重组技术将融合型荧光素酶Antares2编码基因敲入到金葡菌USA300基因组中,与金葡菌烯醇酶编码基因eno融合,构建稳定表达的示踪菌株。将示踪菌株与... 详细信息

目的构建融合型荧光素酶标记的金黄色葡萄球菌示踪菌株,建立金葡菌示踪系统。方法采用同源重组技术将融合型荧光素酶Antares2编码基因敲入到金葡菌USA300基因组中,与金葡菌烯醇酶编码基因eno融合,构建稳定表达的示踪菌株。将示踪菌株与不同的底物混合,检测生物发光强度差异,筛选合适的菌株/底物示踪系统,并探究其在体外和体内的敏感性。结果通过构建基因敲入质粒pBT2-eno-antares2,转化金葡菌USA300菌株中进行基因敲入菌株筛选,经DNA测序和Western blot鉴定示踪菌株USA300/Eno-Antares2构建成功。细菌生长曲线和溶血实验表明所构建的示踪菌株与野生型USA300无明显差异。将示踪菌与DTZ、FUR和HFZ底物混合,肉眼均可观察到发光。不同浓度不同底物分析显示,USA300/Eno-Antares2/HFZ组成的系统发光性能最优,体外发光示踪的敏感性为50 CFU(菌落形成单位),小鼠体内示踪敏感性为100 CFU。结论金葡菌USA300/Eno-Antares2/HFZ示踪系统性能佳,可用于金葡菌感染、定植、播散等研究。

关键词：金黄色葡萄球菌生物发光示踪系统荧光素酶

WalK(S221P)突变促进金黄色葡萄球菌荚膜产生的作用研究

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陆军军医大学学报 2023年第23期45卷 2460-2466页

作者：郭祖文饶一凡彭华刚饶贤才陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400030

目的探究WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用及可能机制。方法采用转录组测序(RNA-seq)分析WalK(S221P)突变对金葡菌基因表达的影响,采用RT-qPCR检测荚膜合成基因的表达变化。利用荚膜染色和透射电镜观察确认WalK(S221P)突变促进... 详细信息

目的探究WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用及可能机制。方法采用转录组测序(RNA-seq)分析WalK(S221P)突变对金葡菌基因表达的影响,采用RT-qPCR检测荚膜合成基因的表达变化。利用荚膜染色和透射电镜观察确认WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用,再用RT-qPCR筛选参与介导WalK(S221P)促进荚膜合成的调控分子,通过结合位点分析和凝胶迁移阻滞实验(EMSA)证实WalKR对目标分子的调控作用。结果RNA-seq分析显示WalK(S221P)突变对196个金葡菌基因的表达水平影响显著,其中16个荚膜合成操纵子基因在XN108中的表达均显著上调。RT-qPCR检测显示荚膜合成相关capA,capH和capK在含有WalK(S221P)突变的XN108及K-Newman菌株中分别较回复株XN108-R和野生型Newman菌株显著上调。荚膜染色和透射电镜观察显示XN108的荚膜合成相比于回复株XN108-R明显增多,增厚。RT-qPCR筛选提示WalK(S221P)促进金葡菌荚膜合成可能是通过上调MgrA表达水平实现的,结合位点检索分析及EMSA实验证实WalK激活的WalR具有直接结合mgrA基因调控区的功能。结论金葡菌WalK(S221P)突变具有促进金葡菌荚膜产生的作用,该作用的发挥可能通过上调MgrA的表达而实现。

关键词：金黄色葡萄球菌荚膜二元调控系统WalKR WalK(S221P) MgrA

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埃博拉病毒病之病原学

第三军医大学学报 2015年第4期37卷 282-286页

作者：饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD),以往称埃博拉出血热(Ebola haemorrhagic fever,EHF),是迄今发现的凶猛烈性传染病之一。自1976年发现于非洲的扎伊尔和苏丹后,至今已有8次较大规模的人群流行,均发生在非洲,平均病死率高达67.98%... 详细信息

埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD),以往称埃博拉出血热(Ebola haemorrhagic fever,EHF),是迄今发现的凶猛烈性传染病之一。自1976年发现于非洲的扎伊尔和苏丹后,至今已有8次较大规模的人群流行,均发生在非洲,平均病死率高达67.98%。EVD的病原体埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)是一种人兽共患病原体,虽然其自然储存宿主尚不完全清楚,但EBOV能造成非人灵长类动物(如黑猩猩、猴等)感染,并具有致死性。EBOV在分类上属于丝状病毒科(Filoviridae)的埃博拉病毒属(Ebolavirus),属内有5个种。各种间的毒力存在差异,以扎伊尔埃博拉病毒(Zaire-EBOV)致病性最强,也是引起2014年西非大规模流行的元凶。EBOV呈丝状,形态多样,以长丝分枝状为常见;病毒体由核心、核衣壳和包膜3部分构成,病毒基因组为单股负链RNA,可编码7种结构蛋白,在病毒复制、感染和致病中发挥重要作用。EBOV主要通过接触传播,目前对其致病机制尚不完全清楚。EBOV为生物危害度最高的4级病原体,与活病毒相关的检验和实验必须在生物安全4级(BSL-4)实验室中进行,其感染的临床诊断以检测血清中抗体、抗原和核酸为主,实时荧光定量反转录PCR检测阳性可作出诊断。EVD尚无特效治疗方法,疫苗尚在研制之中,临床上以辅助性支持疗法为主。

关键词：埃博拉病毒病埃博拉病毒生物学特性致病性检验

人血管内皮细胞上与2型登革病毒相互作用蛋白的筛选与鉴定

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免疫学杂志 2021年第1期37卷 79-87页

作者：杨杰饶贤才上海公安学院侦查系 200137 陆军军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的建立高效病毒受体筛选方法,筛选并鉴定人血管内皮细胞膜上与2型登革病毒(DENV-2)相互作用的蛋白。方法用纯化的DENV-2 E蛋白DⅢ区(EDⅢ)分子代替全病毒颗粒与转印至PVDF膜的人血管内皮ECV304细胞膜蛋白进行孵育,建立改良的VOPBA和2D... 详细信息

目的建立高效病毒受体筛选方法,筛选并鉴定人血管内皮细胞膜上与2型登革病毒(DENV-2)相互作用的蛋白。方法用纯化的DENV-2 E蛋白DⅢ区(EDⅢ)分子代替全病毒颗粒与转印至PVDF膜的人血管内皮ECV304细胞膜蛋白进行孵育,建立改良的VOPBA和2D-VOPBA技术筛选相互作用蛋白,筛选出的候选蛋白经质谱分析、Western blot和免疫共沉淀(Co-IP)实验鉴定;利用抗体阻断实验和激光共聚焦显微技术观察和验证候选蛋白与DENV-2感染的关系;经生物信息学分析,预测候选蛋白与DENV-2 EDⅢ蛋白的对接复合物模型及其结合热点残基。结果筛选出相对分子质量34 000、43 000和55 000这3个候选蛋白,其中相对分子质量43 000和55 000蛋白经鉴定分别为细胞骨架微丝蛋白(fibrous-actin,F-actin)和波形蛋白(vimentin),均可与DENV-2 EDⅢ蛋白在体外发生特异性结合,并且vimentin蛋白可表达于人血管内皮细胞表面,其抗体可部分阻断DENV-2感染;激光共聚焦显微镜观察到在DENV-2感染的前5 min就可引起ECV304细胞中actin的重排,并且actin与病毒E蛋白有明显的随感染时间增强的共存现象。最后,利用生物信息学分别预测了actin和vimentin与DENV-2 EDⅢ蛋白的结合模型及结合残基。结论成功建立了高效的病毒受体筛选技术,并证实筛选到的actin和vimentin蛋白可作为辅助受体或相互作用蛋白,通过与DENV-2 EDⅢ蛋白结合参与DENV-2感染人血管内皮细胞。

关键词：登革病毒 VOPBA/2D-VOPBA 人血管内皮细胞 Actin Vimentin

Characterization of a 43 kDa protein that is involved in DV-2 infection of ECV304 cells

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Characterization of a 43 kDa protein that is involved in DV-...

第二届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学三江论坛

作者： Jie Yang Zhen Hu Wei Chen Xin Fang Wenchang Yuan Xiaomei Hu xiancai rao Department of Microbiology College of Basic Medical SciencesThird Military Medical UniversityKey Lab of Microbial Engineering Under the Educational Committee in Chongqing

Virus absorbing to receptors on sensitive cell surface is the first step in virus *** studies have shown that human vascular endothelial cells（VECs） are the primary target cells for DV infection,but their receptors of DV have not been elucidated *** this study,we modified the virus overlay protein binding assay（VOPBA） to increase the screening rates,and identified proteins of 33,43,55 kDa from membrane protein extracts of ECV304 cells as the potential binding molecules for Dengue *** mass spectrometry（MS）,the peptide masses of a 43 kDa protein that matches to cell actin—a cytoskeleton protein in eukaryotic *** further identification of the 43 kDa protein and its interaction with DV-2 E protein domain III,we prepared the polyclonal antibody against the 43 kDa *** blot analysis shown that the 43 kDa protein could be recognized by both immunized anti-43 kDa murine polyclonal sera and commercial mouse anti-actin polyclonal *** binding specificity of DV-2 EDIII protein and the ECV304 cells 43 kDa actin protein was confirmed by competitive blocking assay and co-immunoprecipitation（co-IP） test.

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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细菌膜囊泡的工程改造与应用

生物医学转化 2023年第1期4卷 6-14,77页

作者：王玉亭黄晓楠饶贤才陆军军医大学基础医学院重庆400038

细菌膜囊泡(Bacterial Membrane Vesicles,BMVs)是原核细菌在生长繁殖过程中产生的一种囊泡状结构,直径在20~400nm之间。BMVs的主要成分为细菌蛋白质、核酸以及脂类。由于BMVs中蛋白和/或膜脂的免疫原性,可有效刺激机体的固有免疫和适... 详细信息

细菌膜囊泡(Bacterial Membrane Vesicles,BMVs)是原核细菌在生长繁殖过程中产生的一种囊泡状结构,直径在20~400nm之间。BMVs的主要成分为细菌蛋白质、核酸以及脂类。由于BMVs中蛋白和/或膜脂的免疫原性,可有效刺激机体的固有免疫和适应性免疫系统,产生针对相应抗原的免疫能力;同时因BMVs不含完整的基因组,无法自我增殖,具有较高的生物安全性,因而在疫苗制备、抗原/药物递送系统、抗肿瘤制剂研发方面具有广阔的应用前景。野生型细菌产生的BMVs通常产量较低,且携带内毒素等毒性成分,故常常需要对BMVs产生菌或BMVs本身进行工程改造,实现降低BMVs毒性,提高BMVs产量,增强BMVs的免疫原性,促进工程化BMVs的开发应用。

关键词：细菌外膜囊泡基因工程改造疫苗开发药物递送肿瘤治疗