检索结果-南通市图书馆

Acta Oceanologica Sinica 2014年第12期33卷 163-169页

作者： ZHU Yanbing LI Hebin NI Hui LIU Jingwen xiao anfeng CAI Huinong College of Food and Biological Engineering Jimei University Fujian Provincial Key Laboratory of Food Microbiology and Enzyme Engineering Research Center of Food Microbiology and Enzyme Engineering Technology of Fujian Province Xiamen Medical College

Thermostable SOD is a promising enzyme in biotechnological applications. In the present study, ***3 was isolated from a deep-sea hydrothermal field in the East Pacific. A thermo-stable superoxide dismutase （SOD） from this strain was purified to homogeneity by steps of fractional am-monium sulfate precipitation, DEAE-Sepharose chromatography, and Phenyl-Sepharose chromatography. SOD was purified 13.4 fold to homogeneity with a specific activity of 3 354 U/mg and 11.1% recovery. SOD fromGeobacillussp. EPT3 was of the Mn-SOD type, judged by the insensitivity of the enzyme to both KCN and H2O2. SOD was determined to be a homodimer with monomeric molecular mass of 26.0 kDa. It had high thermostability at 50＆#176;C and 60＆#176;C. At tested conditions,SOD was relatively stable in the presence of some inhibitors and denaturants, such asβ-mercaptoethanol （β-ME）, dithiothreitol （DTT）, phenylmethylsulfonyl fluoride （PMSF）, urea, and guanidine ***. EPT3 SOD showed striking stability across a wide pH range from 5.0 to 11.0. It could withstand denaturants of extremely acidic and alkaline conditions, which makes it useful in the industrial applications.

关键词： Geobacillus sp. superoxide dismutase thermostability purification

Overexpression and characterization of a thermostable β-agarase producing neoagarotetraose from a marine isolate Microbulbifer ***1

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Acta Oceanologica Sinica 2019年第2期38卷 96-106页

作者： Yanbing Zhu He Gao Hebin Li Hui Ni Zedong Jiang Lijun Li anfeng xiao College of Food and Biological Engineering Jimei University Fujian Provincial Key Laboratory of Food Microbiology and Enzyme Engineering Research Center of Food Biotechnology of Xiamen City Key Laboratory of Systemic Utilization and In-depth Processing of Economic Seaweed Xiamen Southern Ocean Technology Center of China Department of Pharmacy Xiamen Medical College

An agarase gene containing 1 302 bp was cloned from Microbulbifer sp. AG1. It encoded a mature protein of 413 amino acids plus a 20-residue signal peptide. The recombinant enzyme without the signal peptide was expressed and purified from Escherichia coli BL21(DE3). When agarose was used as a substrate, the optimal temperature and pH for the enzyme were 60℃ and 7.5, respectively. The recombinant agarase showed excellent thermostability with 67% and 19% of residual activities after incubation at 50℃ and 60℃ for 1 h, *** SDS, the recombinant agarase had a relatively good resistance against the detected inhibitors, detergents and urea denaturant. Thin layer chromatography analysis and enzyme assay using p-nitrophenyl-α/β-Dgalactopyranoside revealed that the recombinant agarase was a β-agarase that degraded agarose into neoagarotetraose as the main end product. The enzymatic hydrolysis products with different degree of polymerization exhibited the antioxidant activities.

关键词： thermostable β-agarase neoagarotetraose Microbulbifer sp.

Substitution of His260 residue alters the thermostability of Pseudoalteromonas carrageenovora arylsulfatase

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Acta Oceanologica Sinica 2019年第6期38卷 75-82页

作者： Yanbing Zhu xiaoqian Yin Han Liu Hebin Li Yanhong Chen Lijun Li anfeng xiao Hui Ni College of Food and Biological Engineering Jimei UniversityXiamen 361021China Fujian Provincial Key Laboratory of Food Microbiology and Enzyme Engineering Xiamen 361021China Research Center of Food Biotechnology of Xiamen City Xiamen 361021China Key Laboratory of Systemic Utilization and In-depth Processing of Economic Seaweed Xiamen Southern Ocean Technology Center of ChinaXiamen 361021China Department of Pharmacy Xiamen Medical CollegeXiamen 361023China

This study aimed to improve the thermostability of arylsulfatase from Pseudoalteromonas carrageenovora. A library of P. carrageenovora arylsulfatase mutants was constructed by introducing random mutagenesis using error-prone PCR. After screening, two mutants of H260L and D84A/H260L showed enhanced thermal stability than the wild-type predecessor (WT). Site-directed mutagenesis demonstrated that only amino acid residue at Position 260 plays an important role in the thermostability of P. carrageenovora arylsulfatase. Thermal inactivation analysis showed that the half-life (t1/2) values at 55°C for H260L, H260I, H260Q, H260F and H260R were 40.6, 48.4, 30.9, 29.1 and 34.5 min, respectively, while that of WT was 9.1 min. Structure modeling demonstrated that the additional hydrogen bonds and/or optimization of surface charge-charge interactions could be responsible for the increased thermostability imparted by H260L, H260I, H260Q, H260F and H260R.

关键词： arylsulfatase Pseudoalteromonas carrageenovora directed evolution error-prone PCR thermostability

单宁酶处理提高茶梗儿茶素含量及茶梗提取液生物活性

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农业工程学报 2013年第13期29卷 277-285页

作者：黄玉凤肖安风倪辉蔡慧农集美大学生物工程学院厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门361021 福建省高校食品微生物与酶工程技术研究中心厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心厦门361021

为综合利用茶叶加工副产物茶叶梗,试验设计利用固态发酵得到的单宁酶处理茶梗,比较不同处理条件下的茶梗提取液中儿茶素组成的差异及还原力、DPPH和OH自由基清除率、胰α-淀粉酶和胰脂肪酶抑制活性变化,探讨单宁酶处理提高茶梗提取物中... 详细信息

为综合利用茶叶加工副产物茶叶梗,试验设计利用固态发酵得到的单宁酶处理茶梗,比较不同处理条件下的茶梗提取液中儿茶素组成的差异及还原力、DPPH和OH自由基清除率、胰α-淀粉酶和胰脂肪酶抑制活性变化,探讨单宁酶处理提高茶梗提取物中儿茶素含量和生物活性可行性。研究发现:在50℃条件下,利用2U/mL单宁酶溶液作用于茶梗粉末60min,茶梗提取液中酯型儿茶素(EGCG、ECG、GCG)基本被水解生成非酯型儿茶素(EGC、EC、GC)和没食子酸(GA),从而减少单宁-蛋白质聚合物和茶乳的形成量;此外,经单宁酶处理的茶梗提取液抗氧化活性与对照比较明显增强,表现为OH和DPPH自由基清除率IC50分别降低了74%和26%;酶解茶梗提取液质量浓度为5000mg/L时,胰α-淀粉酶和胰脂肪酶抑制率分别提高了89%和107%。研究结果表明单宁酶可高效水解茶梗提取液中酯型儿茶素,提高茶梗提取液的抗氧化活性以及体外抑制胰α-淀粉酶和胰脂肪酶活性。

关键词：酶提取生物活性茶梗儿茶素转化

食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶的克隆、表达及酶学性质

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中国食品学报 2017年第3期17卷 20-27页

作者：殷勤肖安风倪辉蔡慧农朱艳冰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021

目的:在大肠杆菌中高效表达食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶基因,并对重组酶的酶学性质进行研究,为开发酶法去除琼脂硫酸酯的技术奠定基础。方法:通过PCR克隆芳香基硫酸酯酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化... 详细信息

目的:在大肠杆菌中高效表达食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶基因,并对重组酶的酶学性质进行研究,为开发酶法去除琼脂硫酸酯的技术奠定基础。方法:通过PCR克隆芳香基硫酸酯酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化,并对重组酶的酶学性质进行研究。结果:从食鹿角菜交替假单胞菌克隆得到芳香基硫酸酯酶基因(987 bp),预测编码328个氨基酸残基。将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中表达和纯化,SDS-PAGE分析显示,重组酶的分子质量为35.1 ku。以对硝基苯硫酸钾(p-NPS)为底物,酶的比活力达26.7 U/mg,最适反应温度50℃和最适反应pH 7.0,Km为0.65 mmol/L,Vmax为19.99μmol/(mg·min)。除了SDS,重组酶对其他测试的抑制剂和去垢剂具有一定的抗性。重组芳香基硫酸酯酶和龙须菜粗多糖在40℃反应2 h,酶解产物凝胶强度提高2.1倍,可脱除多糖84.9%的硫酸基团。结论 :重组芳香基硫酸酯酶能有效脱除龙须菜粗多糖的硫酸基团,为开发环保、高效的酶法琼脂生产技术奠定基础。

关键词：食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶克隆表达酶学性质

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琼胶酶水解工艺条件的优化及产物分析

中国食品学报 2015年第12期15卷 99-106页

作者：肖琼肖安风姚德恒朱艳冰倪辉蔡慧农集美大学生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021

为探讨琼胶酶水解琼胶的动态过程变化,采用DNS法测定还原糖,结合苯酚-硫酸法测定体系总糖,根据二者比例,得出体系总糖随时间变化的平均聚合度,从而得出各因素对琼胶水解过程的影响。结果表明,来源于厦门红树林的海洋弧菌JMUAZ6菌株产生... 详细信息

为探讨琼胶酶水解琼胶的动态过程变化,采用DNS法测定还原糖,结合苯酚-硫酸法测定体系总糖,根据二者比例,得出体系总糖随时间变化的平均聚合度,从而得出各因素对琼胶水解过程的影响。结果表明,来源于厦门红树林的海洋弧菌JMUAZ6菌株产生的琼胶酶,其水解琼胶的适宜工艺条件为:水解温度40℃,p H 7.0,初始底物质量浓度12 g/L,加酶量25%,在120 r/min振荡条件下酶解反应90 min。此工艺条件下产生还原糖的质量浓度2.179 g/L,平均聚合度最低值(DP)3。通过20 L罐放大试验验证小试优化工艺条件具有良好的重现性。采用薄层色谱分析酶解产物的降解情况,结果显示:反应48 h后,终产物为二糖及少量的四糖。

关键词：琼胶酶水解工艺优化聚合度琼胶寡糖

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响应面法优化琼胶的酶解条件

中国食品学报 2016年第7期16卷 140-148页

为了优化琼胶酶酶解琼胶制备琼胶寡糖的工艺条件,在单因素试验的基础上,运用软件Design-Expert8.0设计中心组合试验,以反应体系中还原糖生成量为评价指标,采用响应面分析法确定琼胶酶酶解的最优条件。优化结果:酶解温度40℃,p H 7.04,Na... 详细信息

为了优化琼胶酶酶解琼胶制备琼胶寡糖的工艺条件,在单因素试验的基础上,运用软件Design-Expert8.0设计中心组合试验,以反应体系中还原糖生成量为评价指标,采用响应面分析法确定琼胶酶酶解的最优条件。优化结果:酶解温度40℃,p H 7.04,Na Cl添加量15 g/L,加酶量为体系的23.97%(14.4 U)、底物质量浓度11 g/L。在此最佳工艺条件下,还原糖质量浓度达1762.3 mg/L,比优化前提高了近3倍,同时琼胶的转化率达到30%。采用薄层色谱分析法优化前后酶解产物的降解情况,结果显示优化后的终产物基本只有新琼二糖,酶解反应比优化前更加完全,酶解效率更高。试验结果表明,采用基于中心组合设计的响应面分析方法能够较大地提高目标产物的产量,实现酶解工艺条件的优化。

关键词：琼胶酶酶水解琼胶寡糖响应面法

乙醇促进法夫酵母虾青素合成的机理及其代谢调控

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中国食品学报 2019年第8期19卷 41-48页

作者：茹毅沈宁燕倪辉陈艳红肖安风集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 福建省海洋功能食品工程技术研究中心福建厦门361021 厦门市海洋功能食品重点实验室福建厦门361021

采用代谢通量分析的方法,分析乙醇促进法夫酵母生物合成虾青素的代谢调控机理。研究发现,乙醇促进法夫酵母细胞代谢中丙酮酸、乙酰辅酶A代谢节点处的通量,使流向虾青素合成途径的通量增加,是对照组通量的2.3倍,进而促进了虾青素的合成... 详细信息

采用代谢通量分析的方法,分析乙醇促进法夫酵母生物合成虾青素的代谢调控机理。研究发现,乙醇促进法夫酵母细胞代谢中丙酮酸、乙酰辅酶A代谢节点处的通量,使流向虾青素合成途径的通量增加,是对照组通量的2.3倍,进而促进了虾青素的合成。根据代谢调控机理,对法夫酵母菌株JMU-MVP14合成虾青素代谢途径的α-酮戊二酸和5-磷酸核酮糖代谢节点进行调控,结果表明:在培养环境中添加0.5 g/Lα-酮戊二酸,能促进法夫酵母细胞生长,生长量提高0.4 g/L。添加3 g/L的谷氨酸时,法夫酵母总类胡萝卜素产量达67.9 mg/L,是对照试验总类胡萝卜素产量的1.7倍。

关键词：法夫酵母乙醇虾青素合成代谢通量分析代谢调控

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响应面法优化肌苷摇瓶发酵培养基及培养条件

中国食品学报 2014年第3期14卷 86-93页

作者：杨哲蔡慧农倪辉杨秋明肖安风集美大学生物工程学院福建厦门361021 福建省高校食品微生物与酶工程研究中心福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021

采用响应面法对肌苷发酵的培养基及培养条件进行优化。通过Plackeet-Burman设计从肌苷发酵工艺的9个因素中筛选关键因子,结果得出葡萄糖浓度、玉米浆浓度、装液量、接种量4个因子对肌苷产量具有显著的影响。针对4个显著因子进行最陡爬... 详细信息

采用响应面法对肌苷发酵的培养基及培养条件进行优化。通过Plackeet-Burman设计从肌苷发酵工艺的9个因素中筛选关键因子,结果得出葡萄糖浓度、玉米浆浓度、装液量、接种量4个因子对肌苷产量具有显著的影响。针对4个显著因子进行最陡爬坡试验和Box-Behnken试验,得到参数的最优值和回归模型,并验证结果。最佳工艺参数是:葡萄糖236.87 g/L、玉米浆23.91 g/L、装液量7 mL、接种量6.5%。在最优条件下做验证试验,肌苷产量均值达到8.26 g/L。优化后的肌苷产量较优化前提高了49.9%。

关键词：肌苷摇瓶发酵最陡爬坡法 Plackett-Burman设计 Box-Behnken设计

关键酶抑制剂对法夫酵母合成虾青素的代谢调控

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中国食品学报 2018年第9期18卷 76-89页

作者：张枫沈宁燕吴昌正肖琼倪辉李利君肖安风集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 福建省海洋功能食品工程技术研究中心福建厦门361021 厦门市海洋功能食品重点实验室福建厦门361021

本文研究烟碱、辛伐他汀、N-甲基吗啉、异烟肼、β-紫罗兰酮5种抑制剂对法夫酵母合成虾青素过程中各中间类胡萝卜素及虾青素含量的影响,以及乙醇对抑制效果的影响。通过高效液相色谱检测发现,5种抑制剂对JMU-VDL668和JMU-MVP14合成类胡... 详细信息

本文研究烟碱、辛伐他汀、N-甲基吗啉、异烟肼、β-紫罗兰酮5种抑制剂对法夫酵母合成虾青素过程中各中间类胡萝卜素及虾青素含量的影响,以及乙醇对抑制效果的影响。通过高效液相色谱检测发现,5种抑制剂对JMU-VDL668和JMU-MVP14合成类胡萝卜均有抑制作用。其中,法夫酵母JMU-VDL668含有95%左右的虾青素,添加烟碱和异烟肼后β-隐黄质比例明显提升。添加辛伐他汀后,JMU-MVP14虾青素合成途径中的中间类胡萝卜素基本转化为虾青素,虾青素的比例从82.37%提至98.64%。另外,研究发现乙醇对辛伐他汀、N-甲基吗啉引起的代谢抑制有补救作用,而与烟碱、β-紫罗兰酮组合时有叠加的抑制效应。

关键词：法夫酵母虾青素抑制剂代谢调控发酵