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抗根肿病结球大白菜萝卜胞质雄性不育回交自交系和保持系的选育

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湖南农业科学 2011年第12期 1-5页

作者：和江明胡靖锋戴永娟汪骞吴丽艳李石开李卫芬和兆荣杨红丽钟利云南省农业科学院园艺作物研究所云南昆明650205 云南大学生命科学学院云南昆明650091

用韩国抗根肿病自交不亲合型结球白菜品种"白菜王"对日本不抗根肿病的萝卜胞质雄性不育型白菜品种"绿半白菜"进行5代回交,通过用病菌孢子浓度为1×108个/g菌土接种BC5代不育系CCR11239和F6代保持系CCR11240,进行了根肿病抗性鉴定。结果... 详细信息

用韩国抗根肿病自交不亲合型结球白菜品种"白菜王"对日本不抗根肿病的萝卜胞质雄性不育型白菜品种"绿半白菜"进行5代回交,通过用病菌孢子浓度为1×108个/g菌土接种BC5代不育系CCR11239和F6代保持系CCR11240,进行了根肿病抗性鉴定。结果表明:CCR11239病情指数为5.21,比对照品种83-1的病情指数92.59低87.38,表现高抗根肿病;CCR11240病情指数为3.51,比对照品种83-1的病情指数92.59低89.08,表现高抗根肿病;通过田间种植,进行性状测试,CCR11239表现不育性稳定,不育株率及不育度均达100%,蜜腺正常,与CCR11240差别不大;CCR11240性状稳定、整齐一致。

关键词：大白菜抗根肿病萝卜胞质不育系保持系

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采用CRISPR knockin技术实现VEGF165定点敲入HEK293T细胞系的构建

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国际生物医学工程杂志 2019年第1期42卷 39-44页

作者：郭再玉张合亮陈谦侯延伟水涛武莉莉刘艺洁费乔曼黄欢雷蕾孙琰孔雨赵秀娟韩雅婷杨冰张玲天津泰达医院神经外科 300457 中国人民武装警察部队后勤学院天津300162 天津医科大学基础医学院 300070

目的构建定点敲入血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的人肾上皮细胞系HEK293T,避免由慢病毒感染等方法实现过表达时所带来的脱靶效应。方法根据EZH2基因的DNA序列设计、构建两端带有同源臂的VEGF165表达载体(pUCm-T-VEGF165质粒)和能定... 详细信息

目的构建定点敲入血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的人肾上皮细胞系HEK293T,避免由慢病毒感染等方法实现过表达时所带来的脱靶效应。方法根据EZH2基因的DNA序列设计、构建两端带有同源臂的VEGF165表达载体(pUCm-T-VEGF165质粒)和能定点切割基因组DNA的小向导RNA(sgRNA)表达载体[pSpCas9(bb)-2A-Puro-sgRNA质粒],再将这两个质粒共转染HEK293T细胞,通过实时荧光定量PCR检测VEGF165和EZH2的mRNA表达情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测VEGF165和EZH2的蛋白表达情况。结果实时荧光定量PCR和Western Blot结果显示,与对照组、单独转染pUCm-T-VEGF165质粒和pSpCas9(bb)-2A-Puro-sgRNA质粒组比较,共转染pUCm-T-VEGF165和pSpCas9(bb)-2A-Puro-sgRNA质粒组VEGF165的mRNA和蛋白相对表达量均升高(VEGF165 mRNA:3.42±0.30比1.02±0.21、1.13±0.16、0.98±0.18,均P<0.01;VEGF165蛋白:3.12±0.10比1.02±0.06、0.88±0.03、0.80±0.05,均P<0.01),EZH2的mRNA和蛋白相对表达量均降低(EZH2 mRNA:0.14±0.06比1.08±0.11、1.02±0.12、1.13±0.16,均P<0.01;EZH2蛋白:0.23±0.03比1.05±0.13、0.91±0.04、0.81±0.06,均P<0.01)。该结果表明VEGF165基因被定点插入EZH2基因的基因组DNA序列中,并干扰了EZH2的表达。结论采用CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入VEGF165基因的HEK293T细胞系。

关键词：血管内皮生长因子165 CRISPR/Cas9 HEK293T细胞

维生素D受体Bsm I基因多态性及VDR mRNA表达与系统性红斑狼疮的相关性

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中华临床免疫和变态反应杂志 2011年第1期5卷 17-23页

作者：罗雄燕武丽君陈龙杨明辉刘宁涛库尔班江谢传美廖涛史冉庚唐中赵岩曾小峰袁国华川北医学院风湿免疫研究所四川南充637000 新疆维吾尔自治区人民医院风湿科乌鲁木齐83000 四川省遂宁市中心医院风湿科四川遂宁629000 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院风湿免疫科北京100730

目的检测维生素D受体(VDR)Bsm I基因多态性与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性,以及对SLE患者VDR mRNA表达的影响。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测VDR Bsm I多态性位点和基因型在242例系统性红斑狼疮患者... 详细信息

目的检测维生素D受体(VDR)Bsm I基因多态性与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性,以及对SLE患者VDR mRNA表达的影响。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测VDR Bsm I多态性位点和基因型在242例系统性红斑狼疮患者和162例健康对照组中的分布情况,并分析与SLE发病的相关性及对SLE患者临床的影响。同时应用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测VDR mRNA在48例SLE患者和38例健康对照组的表达。结果 VDR Bsm I多态性等位基因B和b频率在SLE组和健康对照组差异无统计学意义(P=0.166),但B等位基因阳性的SLE患者(bb基因型和bb基因型患者)肾脏损害的发生率较B等位基因阴性SLE患者明显升高(bb基因型患者,P=0.044)。VDR mRNA在48例SLE患者表达下调,其⊿Ct值(⊿Ct值越大,表达量越小)为9.26±2.37,高于健康对照组的7.82±3.05(P=0.026)。而在SLE患者,B等位基因阳性患者的VDR mRNA的⊿Ct值为9.53±0.53,明显高于B等位基因阴性患者的7.77±4.30(t=2.502,P=0.016)。结论 VDR Bsm I基因多态性与SLE发病易感性无关,但B等位基因阳性患者更容易发生肾脏损害,此可能与B等位基因下调SLE患者的VDR mRNA表达有关。

关键词：系统性红斑狼疮维生素D受体 Bsm I 基因多态性

Beclin1和Bcl2在侵袭性垂体腺瘤中的表达及关系

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中华内分泌外科杂志 2012年第4期6卷 253-256页

作者：冉住国冯清林宋毅杜江峰刘明冬范仕兵李骥霍钢吴留洋杨刚赵睿冯梅田坤韩秀华重庆三峡中心医院神经外科 404000 重庆医科大学附属第一医院神经外科 400016

目的检测Beclin1和Bcl2在侵袭性垂体腺瘤组织中的表达，探讨其与垂体腺瘤侵袭性的关系及2者之间的相关性。方法61例垂体腺瘤手术标本按侵袭性垂体腺瘤综合判定方法分为侵袭组（32例）和非侵袭组（29例），采用免疫荧光检测Beclin1和Bcl... 详细信息

目的检测Beclin1和Bcl2在侵袭性垂体腺瘤组织中的表达，探讨其与垂体腺瘤侵袭性的关系及2者之间的相关性。方法61例垂体腺瘤手术标本按侵袭性垂体腺瘤综合判定方法分为侵袭组（32例）和非侵袭组（29例），采用免疫荧光检测Beclin1和Bcl2蛋白的表达，RT-PCR法检测Beclin1和Bcl2mRNA的表达，分析侵袭组和非侵袭组Beclin1和Bcl2表达水平的差异和相关性。结果侵袭组Beclin1蛋白和mRNA表达均低于非侵袭组（P〈0．01）；而Bcl2蛋白和mRNA表达均高于非侵袭组（P〈0．01）。Pearson相关分析显示：侵袭组中Beclin1和和Bcl2mRNA的表达呈负相关（r=-0．42，P=0．028）。结论Beclin1在侵袭性垂体腺瘤中的表达下降，垂体腺瘤的侵袭性与Bcl2蛋白及mRNA的高表达，Beclin1蛋白和mRNA的低表达密切相关；自噬活性的减低可能导致垂体腺瘤侵袭性增强，而其活性减低可能是Beclin1和Bcl2相互作用的结果。

关键词：自噬 Beclin1 Bcl2 侵袭性垂体腺瘤

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部分乌骨鸡血浆酯酶(Es-1)多态性研究

扬州大学学报（自然科学版） 2000年第4期3卷 25-28页

作者：王克华吴信生陈宽维张学余高玉时陆俊贤陆江华倪素珍陈国宏江苏省家禽科学研究所江苏扬州225003 扬州大学畜牧兽医学院动物科学系江苏扬州225009

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对我国 70～ 80日龄的泰和、南城、同安白绒、莆田白绒、雪峰、黑羽以及保种群泰和 7个乌骨鸡类群共 393羽乌骨鸡的血浆酯酶多态性进行了测定分析 .结果表明 :所测乌骨鸡类群酯酶 ,Es-1位点由复等位基因 Es-1 A... 详细信息

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对我国 70～ 80日龄的泰和、南城、同安白绒、莆田白绒、雪峰、黑羽以及保种群泰和 7个乌骨鸡类群共 393羽乌骨鸡的血浆酯酶多态性进行了测定分析 .结果表明 :所测乌骨鸡类群酯酶 ,Es-1位点由复等位基因 Es-1 A、Es-1 B和 Es-1 C所支配 ,其中 Es-1 B基因控制的条带可进一步划分为 Es-1 B1,Es-1 B和 Es-1 B2 .各乌骨鸡类群 Es-1位点主要基因型为 AB和 bb型 ,AA,BC和 AC型频率较低 .各鸡群 Es-1 B频率均有高于 Es-1 A的趋势 .此外 ,保种群泰和乌骨鸡的 Es-1 B频率 ( 0 .7549)明显高于江西省泰和县原种场的泰和乌骨鸡 ( 0 .62 50 ) .

关键词：乌骨鸡血浆酯酶多态性 Es-1位点复等位基因

ctsd、ctsl基因的多态性与“雪龙”黑牛胴体性状相关性研究

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中国农学通报 2012年第2期28卷 6-9页

作者：陈晓杰吴蒙张立敏陈翠刘喜冬周正奎张猛黄萌刘利高雪许尚忠李俊雅高会江张路培李姣中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 大连雪龙产业集团有限公司大连116001

为了提高雪龙黑牛的胴体性状,进行新品种选育,以组织蛋白酶D、L(Cathepsin D,Cathepsin L)基因为候选基因,利用PCR-RFLP方法对114头雪龙黑牛F1代商品牛进行多态性检测,应用SAS9.2软件采用最小二乘拟合线性模型进行分析,结果表明,ctsd、c... 详细信息

为了提高雪龙黑牛的胴体性状,进行新品种选育,以组织蛋白酶D、L(Cathepsin D,Cathepsin L)基因为候选基因,利用PCR-RFLP方法对114头雪龙黑牛F1代商品牛进行多态性检测,应用SAS9.2软件采用最小二乘拟合线性模型进行分析,结果表明,ctsd、c581t位点与雪龙黑牛的经济性状无明显的相关性,ctsl基因Xma I位点与雪龙黑牛的三角牛腩厚显著相关,且AB型个体三角牛腩厚与AA和bb型个体三角牛腩厚差异显著。

关键词：雪龙黑牛 ctsd基因 ctsl基因胴体性状

新疆主要植棉区棉蚜对吡虫啉和啶虫脒的抗性评价

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中国棉花 2012年第12期39卷 4-5,10页

作者：郭天凤马野萍丁荣荣杜晶周晶李国萍蔡晓丽王国平赵富强李家胜史雪岩高希武新疆生产建设兵团农七师农科所新疆奎屯833200 中国农业大学昆虫系北京100193

利用叶片浸渍法对新疆主要植棉区的棉蚜种群进行了吡虫啉和啶虫脒2种药剂的抗性评价,结果发现,整个新疆植棉区棉蚜对吡虫啉的敏感性好于啶虫脒,部分地区棉蚜对啶虫脒已经产生了低水平的抗性。

关键词：新疆主要植棉区棉蚜吡虫啉啶虫脒抗药性

端粒酶hTERT亚单位启动子靶向性慢病毒对肿瘤活体实时显像的实验研究

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实用临床医药杂志 2010年第3期14卷 4-12页

作者：余松涛杨应斌史春梦陈陵汤旭东黎川师红磊李长珠李宁王国珍吴玉云房殿春杨仕明重庆第三军医大学西南医院全军消化病研究所 400038 重庆西南大学生命科学院 400715 重庆第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所 400038

目的构建一种含优化型人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的慢病毒,结合小动物活体光学成像系统,研究该启动子对端粒酶阳性肿瘤的特异性活体成像作用。方法将文献报道的优化型hTERT启动子克隆到pGL-Basic质粒,对优化型hTERT启动子进行功... 详细信息

目的构建一种含优化型人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的慢病毒,结合小动物活体光学成像系统,研究该启动子对端粒酶阳性肿瘤的特异性活体成像作用。方法将文献报道的优化型hTERT启动子克隆到pGL-Basic质粒,对优化型hTERT启动子进行功能检测。确定其驱动活性之后,构建一种含该启动子和GFP的第3代慢病毒表达系统,以含CMV启动子的慢病毒作为对照。采用小动物荧光成像系统体内外研究优化型hTERT启动子在肿瘤实时诊断中的作用。结果启动子功能检测发现hTERT启动子具有严格的端粒酶阳性肿瘤细胞特异性,并且具有很高的报告基因报答水平。第3代慢病毒包装系统获得了高滴度的病毒颗粒并且能高效整合报告基因之宿主细胞。体外研究表明,含有优化型hTERT启动子的慢病毒体外感染细胞后,能够在端粒酶阳性肿瘤细胞内特异表达GFP,并且能维持长达40d的报告基因表达时间。体内实验发现,感染含优化型hTERT启动子的慢病毒之后24h,端粒酶阳性活体肿瘤能够被特异性的实时观察到,并且肿瘤内的GFP信号在存活裸鼠体内维持30d,随肿瘤增大而增强。结论优化后hTERT启动子对报告基因的调控具有严格的端粒酶特异性,第3代慢病毒系统可将该启动子和报告基因整合至细胞基因组,并实现在端粒酶阳性肿瘤细胞内的特异表达。结合小动物活体光学成像系统,荷瘤裸鼠内的端粒酶阳性肿瘤能够被无创的、实时的、特异性的成像,为肿瘤的特异性早期诊断提供新的实验理论基础。

关键词：分子显像报告基因端粒酶催化亚单位(hTERT) 启动子慢病毒

基于Blackboard平台的电子工程实习网络课程建设

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科技视界 2015年第2期 55-55,77页

作者：王金辉吴姝芹叶懋盘资春廖秋丽桂林电子科技大学机电综合工程训练中心广西桂林541004

本文详细介绍了桂林电子科技大学基于Blackboard(以下简称bb)平台建设的《电子工程实习》网络课程。实践证明,网络与课堂结合的教学模式,为学生提供了良好的自主学习平台,也为教师管理课程提供了方便,提高了教学效果。

关键词： Blackboard平台电子工程实习网络课程