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新的分离纯化青霉素酰化酶方法的研究

生物工程学报 1994年第2期10卷 178-184页

作者：孙万儒中国科学院微生物研究所北京100080

按0.6％(w/w)的比例将皂土加到青霉素酰化酶发酵上清液中,可将酶100％吸附,而吸附的蛋白质仅占发酵上清液中的10％左右。吸附时的pH和无机盐对酶的吸附影响不大。使用不同pH和种类的缓冲液洗涤皂土-酶复合物,不能将酶洗脱,但可洗脱15％... 详细信息

按0.6％(w/w)的比例将皂土加到青霉素酰化酶发酵上清液中,可将酶100％吸附,而吸附的蛋白质仅占发酵上清液中的10％左右。吸附时的pH和无机盐对酶的吸附影响不大。使用不同pH和种类的缓冲液洗涤皂土-酶复合物,不能将酶洗脱,但可洗脱15％左右吸附的杂蛋白。使用含10％以上的PEG和NaCl的磷酸缓冲液可将酶全部洗脱,酶纯化25倍,浓缩6倍左右。此法特点是简便,酶活力收率高,可在常温下操作,也可直接从未除菌体的发酵液中提取酶,具有工业应用价值。

关键词：青霉素酰化酶皂土吸附分离

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短梗霉多糖超滤器的计算

生物工程学报 1991年第3期7卷 252-256页

作者：江宁孙万儒中国科学院微生物研究所

超滤浓缩是短梗霉多糖分离纯化过程中的重要工序。本文研究了短梗霉多糖溶液的浓度与超滤速率的关系,推导出新的超滤器计算公式。根据预定的生产规模及工艺条件,可以对超滤器进行设计计算。实验结果表明用这种方法计算的结果是可靠的。

关键词：短梗霉多糖超滤

化肥减量施用对双季稻氮磷吸收转化及利用率的影响

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江苏农业科学 2021年第17期49卷 100-106页

作者：孙婉薷巩宏杰李竹嵇康轩王波苏州大学江苏苏州215123

采用田间小区试验,研究不同化肥水平对双季稻产量、各生育期养分吸收与肥料利用效率的影响。结果表明,3个水稻季,50%常规氮磷施用水平(T1)、70%常规氮磷施用水平(T2)、100%常规氮磷施用水平(T3)、150%常规氮磷施用水平(T4)处理较不施氮... 详细信息

采用田间小区试验,研究不同化肥水平对双季稻产量、各生育期养分吸收与肥料利用效率的影响。结果表明,3个水稻季,50%常规氮磷施用水平(T1)、70%常规氮磷施用水平(T2)、100%常规氮磷施用水平(T3)、150%常规氮磷施用水平(T4)处理较不施氮磷肥(T0)处理的增产率分别为42.82%~79.62%、24.28%~48.37%、37.85%~77.48%,其中T2处理的边际效应最高;施肥处理水稻植株氮素和磷素的积累总量(3季平均)分别较T0处理显著提高39.48%~108.40%和46.08%~113.90%;随着化肥投入量的增加,氮肥、磷肥吸收利用率则呈先上升后下降趋势,其中T2处理最高、T4处理最低,T2处理的氮肥、磷肥吸收利用率较T4处理显著提高了21.26%~39.77%、28.25%~53.60%。综合产量、养分吸收和肥料利用率等指标,与100%常规氮磷施用水平(T3)相比,70%常规氮磷施用水平(T2)处理对水稻产量无显著影响,且氮肥、磷肥吸收利用率最高,所以双季稻产区有减肥30%的潜力。

关键词：化肥减施氮磷吸收氮磷利用率养分管理

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考虑个体异质性的大型活动参与意向选择行为

北京工业大学学报 2024年第1期50卷 105-112页

作者：崔洪军张冀强朱敏清孙婉茹河北工业大学土木与交通学院天津300131 河北工业大学建筑与艺术设计学院天津300131

为研究个体异质性对于大型活动参与意向选择的影响,构建了基于潜在类别选择模型的大型活动参与意向选择模型。使用D-optimal设计法生成了大型活动参与意向调查中的选择情景,并假设以天津市奥体中心为大型活动举办地,对天津市居民开展了... 详细信息

为研究个体异质性对于大型活动参与意向选择的影响,构建了基于潜在类别选择模型的大型活动参与意向选择模型。使用D-optimal设计法生成了大型活动参与意向调查中的选择情景,并假设以天津市奥体中心为大型活动举办地,对天津市居民开展了大型活动参与意向调查。根据调查获取的数据,使用EM算法对模型进行了参数估计。模型结果表明:天气、活动时间、票价、活动类型、政策复杂度等是影响大型活动参与意向选择的主要因素。模型将潜在的大型活动参与者划分为天气敏感型群体、活动时间敏感型群体、票价敏感型群体3类,分别占样本总体的30%、15%、55%,区分度为0.81,其中类别1对天气类型最为敏感,对活动举办时间和票价不敏感;类别2对活动举办时间最为敏感,对天气的敏感程度较低;类别3对票价最为敏感,对活动时间和政策复杂度不敏感。

关键词：异质性潜在类别选择模型大型活动 D-optimal设计 EM算法活动参与意向

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酵母菌

生物学通报 2007年第11期42卷 5-10页

作者：孙万儒中国科学院微生物研究所北京100101

酵母菌作为一类单细胞真核微生物的通俗名称已广为人知,对酵母菌的分类,细胞形态、结构,繁殖方式,营养、呼吸和生活习性,以及菌的分离、培养和应用做了简单的介绍。

关键词：酵母菌分离培养繁殖呼吸形态结构应用

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影响二氢嘧啶酶反应的因素

生物工程学报 1986年第4期 43-48页

作者：孙万儒中国科学院微生物研究所

恶臭假单孢菌（Pseudomonas putida）产生的二氢嘧啶酶催化5-苯海因水解产生 N-氨甲酰基-D-苯甘氨酸反应的转化率随使用的酶量增加和底物浓度的降低而提高。酶反应的最适温度为45℃,但在35℃时反应转化率最高,低或高于此温度转化率均降... 详细信息

恶臭假单孢菌（Pseudomonas putida）产生的二氢嘧啶酶催化5-苯海因水解产生 N-氨甲酰基-D-苯甘氨酸反应的转化率随使用的酶量增加和底物浓度的降低而提高。酶反应的最适温度为45℃,但在35℃时反应转化率最高,低或高于此温度转化率均降低。表面活性剂 Triton X-100和甘油磷酸钾不能使酶从细胞中分泌出来,并使酶活力下降,但加在反应混合物中可提高转化率。使用高浓度缓冲液可提高转化率,若加碱控制反应混合物 pH,转化率可进一步提高。氯化铵-氢氧化铵缓冲系统优于磷酸缓冲系统。采用氯化铵-氢氧化铵缓冲系统,用氨水控制 pH 可使底物转化率达95%以上。

关键词：二氢嘧啶酶 5-苯海因 N-氨甲酰基-D-苯甘氨酸

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产二氢嘧啶酶的菌种筛选和发酵条件的研究

微生物学报 1983年第2期 133-142页

作者：孙万儒中国科学院微生物研究所

从19个属共275株细菌中筛选出8株具有能不对称水解5-苯基海因产生N-氨甲酰基苯甘氨酸能力的菌株。经复筛和对它们的反应产物的元素组成、旋光性、红外光谱和核磁共振图谱的分析,发现恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）73104具有较高的... 详细信息

从19个属共275株细菌中筛选出8株具有能不对称水解5-苯基海因产生N-氨甲酰基苯甘氨酸能力的菌株。经复筛和对它们的反应产物的元素组成、旋光性、红外光谱和核磁共振图谱的分析,发现恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）73104具有较高的二氢嘧啶酶活力。此菌产酶的发酵条件的研究表明,柠檬酸和葡萄糖对产酶有明显的抑制作用,甘油和乳酸对产酶有促进作用,酵母膏对产酶起十分重要作用。5-甲基海因、5-苯基海因、海因、脲嘧啶、腺嘌呤和乳清酸均是二氢嘧啶酶的有效诱导物,Cu2+对产酶有明显抑制作用,其它所试金属离子对产酶无明显作用。此菌产酶最适培养基组成为（%）:乳酸1.0,酵母膏2.0,NaCl0.3,Na2HPO4 0.2,5-甲基海因0.2。最适初始pH为5.5,28℃培养13.5小时后每毫升发酵液酶活力为2.5单位。

关键词：发酵条件酶活力酶活性菌种筛选产酶酵母膏海因

β-受体阻滞剂及其类似物的毛细管电泳手性分离

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分析化学 2001年第6期29卷 671-675页

作者：王建军郑国钧王佳亮杨柳吴襟沙倩孙万儒中国科学院微生物研究所微生物资源国家重点实验室!北京100080

在毛细管电泳仪上对１２种β－受体阻滞剂和类似物的光学对映体进行了分离，研究了它们的拆分条件。使用０．１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ３．０的磷酸－三乙醇胺缓冲液，２０ｋＶ电压，１２～３６ｍｍｏｌ／Ｌ羟丙基－β－环糊精作为手性识... 详细信息

在毛细管电泳仪上对１２种β－受体阻滞剂和类似物的光学对映体进行了分离，研究了它们的拆分条件。使用０．１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ３．０的磷酸－三乙醇胺缓冲液，２０ｋＶ电压，１２～３６ｍｍｏｌ／Ｌ羟丙基－β－环糊精作为手性识别试剂。其中１１种β－受体阻滞剂及其类似物以及苯乙醇胺、胺酵素在５０ｃｍ普通毛细管上获得了较好的手性分离效果，普罗勒沙的对映体在本条件下未获分离。同时发现，芳香环上取代基位置对迁移时间的影响有一定规律。

关键词：毛细管电泳手性分离 β-受体阻滞剂与类似物

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霉菌实时荧光核酸恒温扩增检测技术研究

河南农业大学学报 2019年第5期53卷 769-776页

作者：孙皖如马玉帅许向华乌日琴张玉妥河北北方学院河北张家口075000 上海仁度生物科技有限公司上海201201 张家口健垣科技有限公司河北张家口075000

以霉菌几丁质合酶Ⅲ保守序列作为靶序列设计引物,合成分子信标探针;以黑曲霉菌ATCC(16404)DNA为模板,通过PCR、分子克隆、转录构建靶标RNA,进而建立实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT),并对体系内... 详细信息

以霉菌几丁质合酶Ⅲ保守序列作为靶序列设计引物,合成分子信标探针;以黑曲霉菌ATCC(16404)DNA为模板,通过PCR、分子克隆、转录构建靶标RNA,进而建立实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT),并对体系内相应成分进行优化;最后利用优化的SAT体系检测食品污染中常见的病原微生物,评价SAT方法的特异性;针对不同浓度的黑曲霉菌孢子悬液,提取RNA进行SAT检测,评价SAT方法的灵敏性。结果表明,SAT检测体系中引物浓度为10μmol·L^-1及探针浓度为10μmol·L^-1时,反应曲线最佳;扩增过程中累计荧光量达到设定的荧光阈值所需循环数与培养的黑曲霉菌孢子量的对数存在线性相关关系(y=-7.061x+59.567,R^2=0.961 1),该方法的灵敏度为10^3个·mL^-1孢子,用该方法检测食品中常见污染菌,发现仅黑曲霉菌出现荧光信号。初步建立了黑曲霉菌的SAT检测体系,可与食品常见污染细菌相鉴别,特异性达100%,进一步提高灵敏度后,可成为食品中黑曲霉菌检测的新方法。

关键词：实时荧光恒温检测技术黑曲霉菌核糖核酸(RNA)