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催乳素通过酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5信号通路促进奶牛乳腺上皮细胞乳铁蛋白合成和分泌

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动物营养学报 2024年第3期36卷 1916-1926页

作者：杨跃杰连帅武瑞王建发黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 黑龙江省牛病防制重点实验室大庆163319

本试验旨在研究催乳素(PRL)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)中酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5(JAK2/STAT5)信号通路介导的乳铁蛋白(LF)合成和分泌的影响。添加不同浓度的PRL[0(对照)、10、100、1000 ng/mL]处理BMECs 24 h,分析PRL对LF... 详细信息

本试验旨在研究催乳素(PRL)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)中酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5(JAK2/STAT5)信号通路介导的乳铁蛋白(LF)合成和分泌的影响。添加不同浓度的PRL[0(对照)、10、100、1000 ng/mL]处理BMECs 24 h,分析PRL对LF含量和LF、催乳素受体(PRLR)以及JAK2/STAT5信号通路基因表达量和相关蛋白表达的影响。为了验证STAT5在PRL促进BMECs LF合成和分泌的关键作用,添加STAT5抑制剂匹莫齐特(Pimozide)[未添加Pimozide(对照)、10μmol/L Pimozide、100 ng/mL PRL、10μmol/L Pimo⁃zide+100 ng/mL PRL]处理BMECs 24 h,测定PRL和Pimozide对LF含量和LF、JAK2/STAT5信号通路基因表达量和相关蛋白表达以及相对荧光强度的影响。结果表明:1)与对照组相比,10、100、1000 ng/mL PRL能够显著或极显著提高BMECs上清液中的LF含量(P<0.05或P<0.01);Pimozide组能够极显著降低BMECs上清液中的LF含量(P<0.01);PRL组能够极显著提高BMECs上清液中的LF含量(P<0.01)。2)与对照组相比,10 ng/mL PRL组LF、PRLR、JAK2及STAT5基因相对表达量显著升高(P<0.05);100 ng/mL PRL组LF、PRLR、JAK2和STAT5基因相对表达量极显著升高(P<0.01);1000 ng/mL PRL组PRLR和STAT5基因相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);Pimozide组LF基因相对表达量显著降低(P<0.05);PRL组BMECs中LF基因相对表达量显著升高(P<0.05)。3)100、1000 ng/mL PRL组BMECs中LF蛋白表达量极显著升高(P<0.01);10、100、1000 ng/mL PRL显著或极显著提高BMECs中p⁃JAK2/JAK2和p⁃STAT5/STAT5表达量(P<0.05或P<0.01);Pimozide组和Pimo⁃zide+PRL组极显著降低BMECs中LF蛋白表达量(P<0.01);PRL组极显著升高BMECs中LF蛋白表达量(P<0.01)。4)Pimozide组和Pimozide+PRL组显著或极显著降低BMECs中LF或p⁃STAT5的相对荧光强度(P<0.05或P<0.01);PRL组极显著升高BMECs中LF和p⁃STAT5的相对荧光强度(P<0.01)。综上所述,PRL通过JAK2/STAT5信号通路促进BMECs中LF合成和分泌。

关键词：乳铁蛋白催乳素信号通路基因表达调控

跨断层条件下工作面带式输送机的工作线形态优化

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露天采矿技术 2024年第1期39卷 96-99页

作者：张灵童王建法中煤科工集团沈阳设计研究院有限公司辽宁沈阳110015

某露天矿采用自移式破碎机半连续系统采煤,在采区中部遇到1条断距较大的正断层,直接导致工作线被切断;为了解决连续、半连续系统工作面带式输送机与露天矿的开采条件的适应性问题,以该矿自移式破碎机半连续系统作为研究对象,以双工作线... 详细信息

某露天矿采用自移式破碎机半连续系统采煤,在采区中部遇到1条断距较大的正断层,直接导致工作线被切断;为了解决连续、半连续系统工作面带式输送机与露天矿的开采条件的适应性问题,以该矿自移式破碎机半连续系统作为研究对象,以双工作线最优方案作为基准,采用“六因素模型”对单工作线不同方式的相对总费用进行测算,形成了完整的工作面带式输送机工作线形态优化理论体系,该理论体系同样适用于除断层外的其他类似条件。

关键词：采区断距正断层工作线工作面带式输送机

BLV-miRNAs对牛乳过氧化物酶的影响

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中国兽医学报 2024年第6期44卷 1274-1279页

作者：王彦迪刘桂池杨跃杰王建发连帅武瑞黑龙江八一农垦大学动物科技学院农业农村部东北寒区牛病防治重点实验室/黑龙江省牛病防制重点实验室黑龙江大庆163319

为探究牛白血病病毒(bovine leukemia virus,BLV)编码的miRNAs(BLV-miRNAs)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)乳过氧化物酶(LPO)的影响。首先通过ELISA测定高低不同载量BLV阳性奶牛牛乳中LPO的含量;随后体外培养BMECs,分别感染(1 MOI)BLV全长... 详细信息

为探究牛白血病病毒(bovine leukemia virus,BLV)编码的miRNAs(BLV-miRNAs)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)乳过氧化物酶(LPO)的影响。首先通过ELISA测定高低不同载量BLV阳性奶牛牛乳中LPO的含量;随后体外培养BMECs,分别感染(1 MOI)BLV全长和缺失miRNAs的BLV(BLV-△miRNAs),通过荧光定量PCR、ELISA等方法检测各组BMECs LPO的表达水平;再通过StarMir等软件程序预测10种BLV-miRNAs是否靶向LPO;根据靶基因预测结果,进行BLV-miRNAs转染和靶基因初步验证。结果显示:BLV高载量阳性奶牛和低载量阳性奶牛牛乳中的LPO含量比阴性奶牛牛乳中的LPO分别降低了8.73%和9.68%;体外试验结果显示:与感染BLV全长病毒组相比,缺失BLV-miRNAs后BMECs中的LPO表达水平显著升高(P<0.05);靶位点预测结果显示BLV-miR-B1-5p、B3-3p和B4-5p可共同靶向LPO基因;转染BLV-miR-B1-5p到BMECs后LPO的基因表达显著下调(P<0.05),并随着转染剂量的增多,LPO的表达水平呈下降趋势;转染BLV-miR-B4-3p到BMECs后LPO的基因表达显著下调(P<0.05),但没有剂量依赖性。综上所述,BLV-miRNAs可以抑制BMECs中LPO的表达。

关键词：牛白血病病毒乳过氧化物酶 BLV-miRNAs 奶牛乳腺上皮细胞

外泌体miR-126-5P对脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症的调控作用

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黑龙江八一农垦大学学报 2024年第5期36卷 63-69页

作者：袁涛许浩天连帅杨跃杰王建发黑龙江八一农垦大学动物科技学院/农业农村部东北寒区牛病防治重点实验室大庆163319

外泌体是一类由各种类型细胞分泌的直径为30~200 nm的细胞外囊泡,其可通过内含的多种miRNA发挥相应的调节功能。为明确外泌体miR-126-5P对脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症的调控作用,应用TargetScan和miRanda两款软件预测miR-126-5P的... 详细信息

外泌体是一类由各种类型细胞分泌的直径为30~200 nm的细胞外囊泡,其可通过内含的多种miRNA发挥相应的调节功能。为明确外泌体miR-126-5P对脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症的调控作用,应用TargetScan和miRanda两款软件预测miR-126-5P的靶基因,之后使用脂质体转染技术构建miRNA的过表达与抑制细胞模型,并利用q-PCR与Western blotting方法进一步验证miR-126-5P对炎症的调控作用。结果发现,miR-126-5P在脂多糖刺激的细胞来源外泌体中下调了0.3倍。靶基因预测结果表明,肿瘤坏死因子超家族成员13B(TNFSF13B)、C-C基序趋化因子配体22(CCL22)、免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11)、白细胞介素5受体α亚基(IL5RA)和白细胞介素13(IL13)为miR-126-5p的主要靶基因。过表达miR-126-5p后,IL-6的转录水平与I-κBα蛋白的磷酸化水平均显著上调。抑制miR-126-5p后,IL-6转录水平与I-κBα蛋白的磷酸化水平均显著下调。结果为进一步探究奶牛乳腺上皮细胞来源外泌体miRNA的炎症调节机制奠定了基础。

关键词：外泌体 miRNA 乳腺上皮细胞脂多糖炎症

BLV-ΔmiRNAs和BLV感染奶牛乳腺上皮细胞的基因转录组学分析

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黑龙江八一农垦大学学报 2024年第4期36卷 46-55页

作者：刘伟琦李宵吕观新连帅王建发黑龙江八一农垦大学动物科技学院/农业农村部东北寒区牛病防治重点实验室/黑龙江省牛病防制重点实验室大庆163319

地方流行性牛白血病(enzootic bovine leukosis,EBL)是由牛白血病病毒(bovine leukemia virus,BLV)感染所引起的一种肿瘤增生性疾病,在我国奶牛群中广泛流行,制约着我国奶牛养殖行业的发展。BLV一般通过子宫内感染及摄入受感染的牛奶和... 详细信息

地方流行性牛白血病(enzootic bovine leukosis,EBL)是由牛白血病病毒(bovine leukemia virus,BLV)感染所引起的一种肿瘤增生性疾病,在我国奶牛群中广泛流行,制约着我国奶牛养殖行业的发展。BLV一般通过子宫内感染及摄入受感染的牛奶和初乳发生感染,感染后的奶牛乳腺上皮细胞对金黄色葡萄球菌更易感。作为BLV高效复制所必需的功能元件,BLV-miRNAs在肿瘤形成的过程中起着关键的作用,但BLV-miRNAs对奶牛乳腺组织的影响缺乏报道。研究使用BLV和BLV-ΔmiRNAs 2种病毒分别感染奶牛乳腺上皮细胞,进行UMI绝对定量转录组测序。结果显示:BLV和BLV-ΔmiRNAs 2种病毒感染奶牛乳腺上皮细胞后,基因转录水平发生变化,差异基因主要富集在生物进程中,包括基因转录(HMGA1、C1QBP、PTMA等)、细胞衰老(HMGA1、SERP1等)、细胞增殖迁移(PTPRJ、EPPK1等)、病毒感染复制(HMGA1、C1QBP等)、蛋白质代谢(SERP1、USE1等)、免疫功能(PTMA、PTPRJ等),KEGG分析结果显示BLV-miRNAs可以激活代谢通路、miRNA与癌症、病毒感染、病毒致癌、IL-17信号通路、粘附连接等信号通路。因此,BLV-miRNAs在BLV感染奶牛乳腺组织时可能通过影响乳腺上皮细胞免疫功能,改变细胞状态,从而加快病毒感染进程,促进病原菌的侵染,加快奶牛乳腺疾病的发生发展。试验结果为进一步研究BLVmiRNAs的功能研究奠定了基础。

关键词：牛白血病病毒奶牛乳腺上皮细胞转录组学免疫

BLV-miR-B1-5p靶向牛MUC1基因的靶位点预测及验证

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黑龙江八一农垦大学学报 2024年第5期36卷 40-46,111页

作者：李宵廖献茂刘伟琦连帅王建发黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

牛白血病病毒(bovine leukemia virus,BLV)可经血液和淋巴系统下行持续感染奶牛乳腺上皮细胞,可导致细胞抗菌能力下降,而BLV编码的mi RNAs(BLV-mi RNAs)是BLV复制和致病所必需的功能元件。为探究BLV编码的BLV-mi R-B1-5p是否通过靶向牛... 详细信息

牛白血病病毒(bovine leukemia virus,BLV)可经血液和淋巴系统下行持续感染奶牛乳腺上皮细胞,可导致细胞抗菌能力下降,而BLV编码的mi RNAs(BLV-mi RNAs)是BLV复制和致病所必需的功能元件。为探究BLV编码的BLV-mi R-B1-5p是否通过靶向牛黏蛋白1(MUC1)基因参与抑制乳腺上皮细胞的抗菌防御屏障,在研究中首先通过STar Mir软件进行靶位点预测,再通过细胞转染、双荧光素酶报告试验、qRT-PCR和Western Blot进行验证。靶位点预测结果显示,BLV-mi R-B1-5p与MUC13′UTR有完全结合位点,结合的自由度为-35.6 kcal·mol^(-1);双荧光素酶报告试验结果显示:BLV-mi R-B1-5p可显著下调MUC1-3UTR-WT的荧光值(P<0.001);且通过mi RNA细胞转染、qRT-PCR和Western Blot体外验证结果显示,BLV-mi R-B1-5p可抑制奶牛乳腺上皮细胞MUC1 m RNA和蛋白的表达。综合以上结果表明,BLV-mi R-B1-5p可靶向并抑制牛MUC1,从而参与抑制乳腺上皮细胞的抗菌防御屏障。研究为BLV影响乳腺上皮细胞的防御能力提供了数据参考。

关键词：牛白血病病毒黏蛋白1 奶牛乳腺上皮细胞 miRNA

临床思维训练在兽医临床实践教学中的应用初探

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黑龙江动物繁殖 2024年第2期32卷 54-58页

作者：连帅贺显晶耿子健王迪李春秋曲艳鹏钱伟东王建发黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

临床思维的建立作为兽医临床实践中不可或缺的核心内容,是动物医学专业学生转变为高级兽医专业人才的关键。但受学生人数、实践场所教学资源等客观条件的限制,临床实践效果很难达到预期,而“兽医临床思维训练系统”的建设是一种培养学... 详细信息

临床思维的建立作为兽医临床实践中不可或缺的核心内容,是动物医学专业学生转变为高级兽医专业人才的关键。但受学生人数、实践场所教学资源等客观条件的限制,临床实践效果很难达到预期,而“兽医临床思维训练系统”的建设是一种培养学生临床思维能力和实践应用能力的有效方法。文章以兽医临床诊断学课程为研究对象,设计“兽医临床思维训练系统”,并在动物医学专业学生中初步应用,通过课程考试和目标达成度分析等评估方法,探讨并评估临床思维训练在兽医临床实践教学体系中的应用效果。结果表明:兽医临床思维训练可有效提高学生的临床诊断逻辑思维,也可为培养具备创新精神和实践能力的高级兽医专业人才提供培养平台。

关键词：动物医学临床思维训练兽医临床诊断实践教学目标达成度

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应用型农业院校畜牧兽医类专业青年教师教学能力提升途径研究

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黑龙江动物繁殖 2024年第3期32卷 56-58,62页

作者：贺显晶郑家三王建发赵建军韩欢胜王新曲善民郭东华连帅孙东波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为加强应用型农业类本科高校的师资队伍建设、提升畜牧兽医专业应用型专业人才培养质量,笔者以地方应用型农业院校和青年教师为切入点,分析了高等农业院校畜牧兽医类专业青年教师教学能力的现状及存在的主要问题,从定期开展教学能力培... 详细信息

为加强应用型农业类本科高校的师资队伍建设、提升畜牧兽医专业应用型专业人才培养质量,笔者以地方应用型农业院校和青年教师为切入点,分析了高等农业院校畜牧兽医类专业青年教师教学能力的现状及存在的主要问题,从定期开展教学能力培训等方面探索青年教师教学能力提升路径,以期打造适应新农科建设和区域畜牧业健康发展的“双师双能型”教师队伍,为促进畜牧兽医类专业教育的高质量发展提供保障。

关键词：应用型农业院校畜牧兽医类专业教师队伍教学能力提升途径

Progress in the biological function of alpha-enolase

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Animal Nutrition 2016年第1期2卷 12-17页

作者： Hong Ji jianfa wang Jingru Guo Yue Li Shuai Lian Wenjin Guo Huanmin Yang Fanzhi Kong Li Zhen Li Guo Yanzhi Liu College of Animal Science and Veterinary Medicine Heilongjiang Bayi Agricultural University

Alpha-enolase(ENO1), also known as 2-phospho-D-glycerate hydrolase, is a metalloenzyme that catalyzes the conversion of 2-phosphoglyceric acid to phosphoenolpyruvic acid in the glycolytic pathway. It is a multifunctional glycolytic enzyme involved in cellular stress, bacterial and fungal infections, autoantigen activities, the occurrence and metastasis of cancer, parasitic infections, and the growth, development and reproduction of organisms. This article mainly reviews the basic characteristics and biological functions of ENO1.

关键词： α-enolase Glycolysis Plasma plasminogen Cancer Parasite