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奶牛瘤胃需氧及兼性厌氧菌的PCR-16S rDNA鉴定及日粮的影响

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畜牧兽医学报 2008年第10期39卷 1367-1372页

作者：巩庆亮王振勇柴同杰侯志高贾玉东王允田马健山东农业大学动物医学院泰安271018

设计9个精料梯度的日粮饲喂干乳期成年荷斯坦奶牛,并对其瘤胃液中的部分细菌进行了分离,PCR-16SrDNA鉴定和动态检测。结果显示,以瘤胃液为原料,采用人工培养基共分离到56株细菌,并对7株具代表性的细菌进行了PCR扩增,经序列同源性比较,... 详细信息

设计9个精料梯度的日粮饲喂干乳期成年荷斯坦奶牛,并对其瘤胃液中的部分细菌进行了分离,PCR-16SrDNA鉴定和动态检测。结果显示,以瘤胃液为原料,采用人工培养基共分离到56株细菌,并对7株具代表性的细菌进行了PCR扩增,经序列同源性比较,最终把细菌鉴定为牛链球菌(A0625、A1212、0131)、蜡样芽孢杆菌(0113)、地衣芽孢杆菌(0091)、短小芽孢杆菌(0083)和嗜热链球菌(0123)。同时还发现随精料浓度的增加,牛链球菌、芽孢杆菌及嗜热链球菌的数量均呈不同程度的上升趋势。结果表明不同精料浓度的日粮对奶牛瘤胃需氧及兼性厌氧菌有着不同程度的影响,其中对牛链球菌影响最大,从系统发育分析可知所分离细菌虽未形成新的细菌进化枝,但牛链球菌和嗜热链球菌的核苷酸序列仍发生了多处碱基突变。

关键词：奶牛瘤胃细菌 PCR-16S rDNA鉴定日粮影响

四川部分地区肉牛鼻腔中支原体的PCR检测及分析

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西南民族大学学报（自然科学版） 2018年第3期44卷 254-262页

作者：马艳君阿比克哈莫汤承岳华西南民族大学生命科学与技术学院四川成都610041

为了解四川部分地区肉牛呼吸道病例中支原体的带菌情况及种类,从四川部分地区6个牛场的54头有呼吸道症状的肉牛鼻腔采取的棉拭子,经支原体属特异性PCR方法检测,并对特异性PCR产物克隆测序后比对分析鉴定支原体的种类;用牛支原体、牛眼... 详细信息

为了解四川部分地区肉牛呼吸道病例中支原体的带菌情况及种类,从四川部分地区6个牛场的54头有呼吸道症状的肉牛鼻腔采取的棉拭子,经支原体属特异性PCR方法检测,并对特异性PCR产物克隆测序后比对分析鉴定支原体的种类;用牛支原体、牛眼支原体、殊异支原体和牛鼻支原体的特异性检测引物对这54份样本进行了检测,调查支原体感染情况.结果从54份肉牛鼻腔棉拭子样本中检出23份支原体阳性样本;鉴牛支原体(12/54)、牛眼支原体(6/54)、殊异支原体(3/54)和牛鼻支原体(2/54)共4种支原体.4种支原体特异性检测结果显示,牛支原体的感染率为57.3%,殊异支原体的感染率为29.63%,牛眼支原体检出率为20.37%,牛鼻支原体的检出率为16.67%.在两种支原体混合感染中,检出率相对较高的是以牛支原体+殊异支原体模式的混合感染,检出率为16.67%;三种支原体混合感染的情况有出现,而四种支原体混合感染的情况没有被检出.结果表明,四川省肉牛呼吸道疾病样本中支原体感染较为普遍,且种类较多,其中牛支原体检出率最高,首次在国内牛中检出牛眼支原体,研究结果丰富了国内牛呼吸道疾病的病原谱.

关键词：肉牛呼吸道疾病牛支原体牛眼支原体殊异支原体牛鼻支原体

牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学诊断方法的建立

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新疆农业科学 2011年第1期48卷 139-142页

作者：简子健马素贞袁江玲沈炯玉吕伟孙其喆苗中秋新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

【目的与方法】在优化表达牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白和建立ELISA反应条件的基础上,进一步探讨牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白及其所建立的ELISA检测方法的特异性,从而建立牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法。【... 详细信息

【目的与方法】在优化表达牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白和建立ELISA反应条件的基础上,进一步探讨牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白及其所建立的ELISA检测方法的特异性,从而建立牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法。【结果】牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA检测方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与牛巴贝斯虫巢式PCR检测方法的阳性符合率为96%。【结论】所建立的GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法重复性好、特异性强、灵敏度高。这是国内首次利用重组蛋白抗原建立的牛巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。

关键词：牛巴贝斯虫裂殖子表面抗原2c 融合蛋白间接ELISA 建立

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甲醛灭活牛支原体的条件探究

黑龙江畜牧兽医 2015年第11期 36-39,287页

作者：雷元元何生虎郭亚男马烨曹思婷白晓南宁夏大学农学院银川750021

为了优化牛支原体(Mycoplasma bovis,***)的灭活条件,确定灭活***的甲醛浓度和时间,为***灭活疫苗的研发提供可靠依据,试验采用不同浓度的甲醛对***进行灭活,每隔12 h测定***的最大代谢活力,并将灭活的***传代和感染家兔呼吸道以观察灭... 详细信息

为了优化牛支原体(Mycoplasma bovis,***)的灭活条件,确定灭活***的甲醛浓度和时间,为***灭活疫苗的研发提供可靠依据,试验采用不同浓度的甲醛对***进行灭活,每隔12 h测定***的最大代谢活力,并将灭活的***传代和感染家兔呼吸道以观察灭活效果,进一步通过血清抗体效价来测定免疫原性。结果表明:在36 h内终浓度为0.5%的甲醛就能将***彻底灭活,但其免疫原性大大降低,不利于灭活疫苗的制备;终浓度为0.3%的甲醛处理60 h后只能将***部分灭活;终浓度为0.4%的甲醛灭活48 h后能将***彻底灭活,免疫原性略微降低不影响免疫效果,为最佳灭活条件。

关键词：牛支原体灭活甲醛疫苗条件

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牛支原体广西分离株的致病性研究

黑龙江畜牧兽医 2018年第7期 99-101,249页

作者：吴翠兰陶立李军潘艳彭昊冯世文马春霞兰美益陈泽祥杨威广西兽医研究所南宁530001 广西兽医生物技术重点实验室南宁530001

为了研究牛支原体广西分离株的致病性,试验将10株牛支原体广西分离株（G12、BS2、LA、GL1、BS1、NN4、NN5、GL3、NN1和GG）以相同剂量注射到7日龄健康SPF鸡胚尿囊腔上,即为10个感染组,同时设阴性对照组和空白对照组,连续培养7 d,观察胚... 详细信息

为了研究牛支原体广西分离株的致病性,试验将10株牛支原体广西分离株（G12、BS2、LA、GL1、BS1、NN4、NN5、GL3、NN1和GG）以相同剂量注射到7日龄健康SPF鸡胚尿囊腔上,即为10个感染组,同时设阴性对照组和空白对照组,连续培养7 d,观察胚体的生长变化情况,同时收集尿囊液进行PCR鉴定。结果表明：10株分离株100%感染鸡胚,病死率为10%-50%,其中BS2引起的病死率最高;死亡鸡胚的胚体表面有充血、出血现象,与阴性对照组和空白对照组相比,大部分存活胚的胚体发育缓慢;10个感染组的尿囊液经PCR扩增得到相应的目的片段。说明鸡胚感染了牛支原体,经初步筛选可知广西分离株BS2的毒力较强。

关键词：牛支原体广西鸡胚致病性感染率致病率

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结核杆菌体内诱导基因的筛选及初步分析

中华医学杂志 2008年第3期88卷 189-193页

作者：张宗德李自慧杜博平贾红彦刘忠泉陈曦黄海荣邢爱英古淑香马玛北京市结核病胸部肿瘤研究所 101149

目的筛选结核杆菌在人体内诱导表达的基因，进而作为候选的免疫及药物分子新靶位。方法构建结核杆菌基因组表达文库，应用体内诱导的抗原技术，用吸收过的结核患者血清筛选文库，对阳性克隆测序得到开放阅读框（ORF）。结果实验共确定... 详细信息

目的筛选结核杆菌在人体内诱导表达的基因，进而作为候选的免疫及药物分子新靶位。方法构建结核杆菌基因组表达文库，应用体内诱导的抗原技术，用吸收过的结核患者血清筛选文库，对阳性克隆测序得到开放阅读框（ORF）。结果实验共确定了51个ORF。按照功能分为8类：毒力、解毒及调节相关基因1个，细胞壁与细胞处理相关基因13个，中间代谢和呼吸相关基因11个，脂类代谢基因7个，信号通路基因2个，PE／PPE蛋白家族基因3个，保守假设蛋白基因12个，与牛型分支杆菌同源的保守假设蛋白基因2个。结论应用体内诱导抗原技术可以筛选到结核杆菌进入人体后诱导表达的基因，其中部分基因可以作为结核病预防、诊断和治疗研究的候选靶位。

关键词：分支杆菌,结核抗原,细菌基因表达

检测牛分枝杆菌的噬菌体生物扩增法的建立及初步应用

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畜牧兽医学报 2007年第11期38卷 1224-1229页

作者：钟志军彭广能唐明霞白永平石梅马晓平胡忠义王洁秦莲花杨华四川农业大学动物医学院雅安625014 西南大学荣昌校区动物医学系重庆400715 上海市结核重点实验室上海200433

建立噬菌体生物扩增法（PhaB）检测牛分枝杆菌,将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见非结核分枝杆菌（NTM）及5种非分枝杆菌,同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测,其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比... 详细信息

建立噬菌体生物扩增法（PhaB）检测牛分枝杆菌,将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见非结核分枝杆菌（NTM）及5种非分枝杆菌,同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测,其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比较。结果表明,噬菌体工作浓度为1×10^9 PFU/mL、37℃感染2 h为最佳检测条件;杀毒剂浓度为100 mmol/L,室温作用10 min即可完全杀灭受试噬菌体;加热灭活的细菌和指示细菌不被噬菌体感染;牛分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和22株牛分枝杆菌临床分离株检测结果均为阳性,16种NTM和5种非分枝杆菌为阴性,4种NTM（偶然、胞内、金色、草分枝杆菌）在高浓度时（〉10^5CFU/mL）检测结果为阳性;该法可检测出60-120 CFU/mL牛分枝杆菌;批内、批间变异系数均小于15%,重复性良好;203头检测奶牛中,PhaB法、涂片法、皮内变态试验和罗氏培养结果分别有14头（6.9%）、17头（8.4%）、21头（10.3%）和12头（6.0%）为阳性,PhaB法与其他3种方法比较,阳性准确性、特异性都在96%以上,敏感性在71%-100%。该法检测牛分枝杆菌具有快速、简便、灵敏、特异性高等特点。

关键词：分枝杆菌噬菌体牛分枝杆菌检测方法牛乳

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牛无形体病研究进展

动物医学进展 2018年第2期39卷 91-95页

作者：戴熙廷宝玲麻明彪白若兰彭芸陶律延赵华沈龙强宝福凯柳爱华昆明医科大学/昆明医科大学云南省高校热带传染病重点实验室云南昆明650500

牛无形体是一种革兰阴性球状胞内寄生菌,这种病原体在牛及其他哺乳动物中广泛传播,多经蜱虫叮咬传播致病。由牛无形体感染所致的疾病为牛无形体病。该病的临床症状主要有高热、贫血、乏力、腹泻等,其致病机制尚不明确。根据相关研究报道... 详细信息

牛无形体是一种革兰阴性球状胞内寄生菌,这种病原体在牛及其他哺乳动物中广泛传播,多经蜱虫叮咬传播致病。由牛无形体感染所致的疾病为牛无形体病。该病的临床症状主要有高热、贫血、乏力、腹泻等,其致病机制尚不明确。根据相关研究报道,论文从牛无形体病的病原学特征、流行病学、临床表现、诊断及防治几个方面进行综述。

关键词：牛无形体病流行病学诊断防治

牛支原体脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞差异表达的转录组学研究

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中国预防兽医学报 2017年第4期39卷 267-271页

作者：王显兵汪洋李媛邵家日王琪陈莹周长平于艳超王莉莉辛九庆马红霞吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病研究室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为阐明牛支原体(Mycoplasma bovis,***)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞的免疫应答机制,本研究采用转录组测序(RNA-seq)技术结合生物信息学方法分析*** LAMPs诱导EBL细胞产生的差异表达基因。本实验首先分别构建LAMPs诱导组... 详细信息

为阐明牛支原体(Mycoplasma bovis,***)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞的免疫应答机制,本研究采用转录组测序(RNA-seq)技术结合生物信息学方法分析*** LAMPs诱导EBL细胞产生的差异表达基因。本实验首先分别构建LAMPs诱导组与对照组EBL细胞的c DNA文库并对其进行高通量测序,利用maS3.0软件对差异表达基因进行筛选,结果显示共筛选得到706个差异表达基因,其中上调和下调差异基因分别为364个和342个;GO注释显示,差异表达基因编码蛋白主要与细胞黏附、免疫应答以及细胞增殖等相关;利用荧光定量PCR对部分差异表达基因(PIM2、F2RL1以及PTPN2)的表达情况进行验证,结果与RNA-seq测序结果相符。本研究为进一步阐述***的致病机制及宿主的免疫应答机制提供依据。

关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白胎牛肺细胞细胞转录组测序