检索结果-南通市图书馆

生物化学与生物物理进展 2005年第7期32卷 630-635页

作者：李红梅梅乐和 urlacher vlada SCHMID ROLF D 浙江大学化学工程与生物工程系杭州310027 Institute of Technical Biochemistry University of Stuttgart Stuttgart Germany

以催化吲哚产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于Bacillusmegaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得... 详细信息

以催化吲哚产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于Bacillusmegaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得了三个高于亲本酶的突变酶,突变酶的酶活分别是亲本酶的6.6倍(hml001),9.6倍(hml002)和5.3倍(hml003),并对突变酶的动力学参数进行了分析.突变酶DNA测序的结果表明,hml001含有一个有义氨基酸置换I39V,hml002含有三个有义氨基酸置换D168N,A225V,K440N,hml003含有一个有义氨基酸置换E435D,这些突变位点有些远离底物结合部位,有些位于底物结合部位.

关键词：细胞色素P450BM-3 定向进化靛蓝易错聚合酶链式反应催化活性

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定向进化细胞色素P450BM-3的研究

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生物加工过程 2006年第1期4卷 27-29,34页

作者：李红梅 yh 梅乐和 vlada urlacher Rolf D.Schmid 浙江大学化学工程与生物工程系 Institute of Technical Biochemistry University of Stuttgart StuttgartGermany

以来自于巨大芽孢杆菌的细胞色素P450BM-3为研究对象,采用随机突变和饱和定点突变定向进化技术对P450BM-3进行改造,通过突变体催化靛蓝显色的特性采用活性琼脂平板分析和96微孔板相结合的高通量筛选成功获得了几个具有更高催化性能的突... 详细信息

以来自于巨大芽孢杆菌的细胞色素P450BM-3为研究对象,采用随机突变和饱和定点突变定向进化技术对P450BM-3进行改造,通过突变体催化靛蓝显色的特性采用活性琼脂平板分析和96微孔板相结合的高通量筛选成功获得了几个具有更高催化性能的突变体。

关键词：定向进化细胞色素P450BM-3 靛蓝

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催化吲哚生成靛蓝的细胞色素P450BM-3定向进化研究

催化吲哚生成靛蓝的细胞色素P450BM-3定向进化研究

引用

浙江省生物化学与分子生物学学术交流会

作者：李红梅梅乐和 vlada urlacher Rolf D．Schmid 姚善泾浙江大学化学工程与生物工程系 Institute of Technical Biochemistry University of Stuttgart StuttgartGermany

以催化吲嗓产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于 Bacillus megaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获... 详细信息

以催化吲嗓产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于 Bacillus megaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得了三个高于亲本酶的突变酶,突变酶的酶活分别是亲本酶的6．6倍(hml0001),9．6倍(hml002)和5．3(hml003)倍,并对突变酶的动力学参数进行了分析．突变酶DNA测序的结果表明hml001含有一个有义氨基酸王换139V,hml002含有三个有义氨基酸置换D168N,A225V,K440N,hml003含有一个有义氨基酸王换E435D,这些突变位点有些远离底物结合部位,有些位于底物结合部位的．

关键词： P450BM-3 定向进化靛蓝易错聚合酶链式反应催化活性

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Copper-radical oxidases: A diverse group of biocatalysts with distinct properties and a broad range of biotechnological applications

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Engineering Microbiology 2022年第3期2卷 23-36页

作者： Katja Koschorreck Saadet Alpdagtas vlada B.urlacher Institute of Biochemistry Heinrich-Heine-University DüsseldorfUniversitätsstraße 1Düsseldorf 40225Germany Department of Biology Van Yuzuncu Yil UniversityVan 65080Turkey

Copper-radical oxidases(CROs)catalyze the two-electron oxidation of a large number of primary alcohols includ-ing carbohydrates,polyols and benzylic alcohols as well as aldehydes and𝛼-hydroxy-carbonyl compounds while reducing molecular oxygen to hydrogen ***,CROs like galactose oxidase and glyoxal oxidase were identified only in fungal *** the last decade,their representatives have also been identified in some *** are grouped in the AA5 family of“auxiliary activities”in the database of Carbohydrate-Active *** low overall sequence similarity and different substrate specificities,sequence alignments and the solved crystal structures revealed a conserved architecture of the active sites in all CROs,with a mononuclear copper ion coordinated to an axial tyrosine,two histidines,and a cross-linked cysteine-tyrosyl radical *** unique post-translationally modified protein cofactor has attracted much attention in the past,which resulted in a large number of reports that shed light on key steps of the catalytic cycle and physico-chemical properties of *** to their broad substrate spectrum accompanied by the only need for molecular oxygen for catal-ysis,CROs since recently experience a renaissance and have been applied in various biocatalytic *** review provides an overview of the structural features,catalytic mechanism and substrates of CROs,presents an update on the engineering of these enzymes to improve their expression in recombinant hosts and to enhance their activity,and describes their potential fields of biotechnological application.

关键词： Copper-radical oxidases Galactose oxidase,Glyoxal oxidase Cysteine-tyrosyl radical cofactor Carbohydrates Alcohols Aldehydes

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