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耻垢分枝杆菌新型毒素-抗毒素系统MSMEg_3435-3436基因功能的初步研究

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结核病与胸部肿瘤 2020年第2期 102-111页

作者：张蓝月耿艺漫贾红彦肖婧李自慧潘丽萍孙义成张宗德首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所/耐药结核病研究北京市重点实验室 101149 中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所/卫生部病原微生物系统生物学重点实验室首都医科大学附属北京儿童医院/北京市儿科研究所/教育部儿科重大疾病研究重点实验室

目的初步探讨耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,ta.系统基因的功能及其在细菌药物耐受中的作用。方法利用无水四环素(ATe)诱导穿梭质粒构建毒素基因(MSMEg_3436和MSMEg_6760)表达系统,检测毒素基因表... 详细信息

目的初步探讨耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,ta.系统基因的功能及其在细菌药物耐受中的作用。方法利用无水四环素(ATe)诱导穿梭质粒构建毒素基因(MSMEg_3436和MSMEg_6760)表达系统,检测毒素基因表达的抑菌作用。应用CRISPR-Cas12a基因编辑技术构建△MSMEg_3435-3436和△MSMEg_6762-6760敲除菌株,探究毒素-抗毒素系统对菌株生长的影响。通过计算菌株存活率检测MSMEg_3435-3436基因对异烟腓(96 ug/ml)和利福平(40 pgml)的耐受相关性。在耻垢分枝杆菌中用LacZ报告基因分别替换毒素-抗毒素基因(MSMEg_1277-1278、MSMEg_1283-1284、MSMEg_3435-3436、MSMEg_4447-448和MSMBg_5635-5634),构建5个启动子活性检测突变菌株(SY3328、SY3309、SY6407、SY310和SY3311),并将pMV261空载体和pMV261-抗毒素系列质粒分别电转至5个突变菌株中,通过测定吸光度值(***和Ana)计算β-半乳糖苷酶活性[酶活性单位为“Miller单位(MU)”],以检测毒素抗毒素系统的启动子活性。结果在耻垢分枝杆菌中,ATc诱导表达毒素基因MSMEg_3436可抑制细菌生长,而同时表达对应的抗毒素基因MSMEg_3435可消除抑制作用;ATe诱导表达毒素基因MSMEg_6760未发现明显的抑菌作用。与野生株相比,AMSMEg_3435-3436和△MSMEg_6762-6760敲除菌株在TH9液体培养基中生长表型无明显差异。野生株和△MSMEg_3435-3436敲除菌株经异烟阱和利福平处理后的存活率[分别为(4.38±1.48)%和(3.49±0.66)%,(0.15±0.04)%和(0.03±0.02)%]显示毒素-抗毒素基因MSMEg_3435-3436与药物耐受性无关(t=0.548,P=0.613;t=2.663,P=0.056)。启动子(SY328、SY3309、SY6407、SY3310和SY3311)在携带pMV261-空载体和pMV261抗毒素表达质粒的报告菌株中的β-半乳糖苷酶活性分别为(376.50±17.13)和(315.50±20.71)、(189.00±12.24)和(160.70±9.89)(1225.20±9.95)和(211.70±2.57)(221.40±12.07)和(186.60±13.17)(179.10±5.87)和(127.70±19.21)MU,差异均无统计学意义(t=2.272,P=0.086;t=1.795,P=0.147;t=1.319,P=0.258;t=1.949,P=0.123;t=-2.562,P=0.063)。结论成功构建了MSMEg_3435-3436和MSMEg_6762-6760在耻垢分枝杆菌中的诱导表达体系及敲除菌株,并发现MSMEg_3435-3436是一个新的有功能的毒素-抗毒素系统,以及这两个毒素-抗毒素系统与菌株生长表型及异烟阱和利福平耐受性无关,最后发现耻垢分枝杆菌中5对毒索-抗毒素系统的抗毒素基因可能在自身启动子调控中不发挥关键作用,可为进一步研究结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统的功能提供线索。

关键词：分枝杆菌耻垢类毒素类抗毒素类,基因表达调控,细菌药物耐受性

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醋酸和甘油合成三醋酸甘油酯的工艺研究

化学与生物工程 2009年第11期26卷 27-29页

作者：吴路平毛震波贾绘如计成竹李军刘群肖国民魏瑞平西南化工研究设计院四川成都610225 东南大学化学化工学院江苏南京211189

以醋酸和甘油为原料合成三醋酸甘油酯(ta.,考察了不同催化剂对酯化反应的影响,筛选出对甲苯磺酸作为酯化反应的催化剂。并考察了对甲苯磺酸用量、反应时间、采水和不采水工艺以及醋酸和甘油摩尔比对酯化反应的影响。结果表明,催化剂用... 详细信息

以醋酸和甘油为原料合成三醋酸甘油酯(ta.,考察了不同催化剂对酯化反应的影响,筛选出对甲苯磺酸作为酯化反应的催化剂。并考察了对甲苯磺酸用量、反应时间、采水和不采水工艺以及醋酸和甘油摩尔比对酯化反应的影响。结果表明,催化剂用量为甘油质量的5%,在采出水的条件下反应3.5 h,反应产物中ta.含量达到96%;随着醋酸和甘油摩尔比的提高,ta.量不断增加。

关键词：三醋酸甘油酯醋酸甘油合成

微量波动Ames试验在卷烟烟气毒理学评价中的应用研究

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湖南农业科学 2010年第6期 82-84,89页

作者：邹琳潘秀颉吴维佳刘姜瑾徐龙杨陟华周冀衡朱茂祥湖南农业大学烟草科学与健康重点实验室湖南长沙410128 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 湖南中烟工业有限责任公司公司技术中心湖南长沙410014

分别用传统的平板法和微量波动法2种鼠伤寒沙门氏菌突变试验方法(Ames试验)评价卷烟烟气的细菌致突变性。结果表明,对同一卷烟样品,2种Ames试验方法检测的卷烟烟气细菌致突变性均有良好的剂量效应关系;4种不同样品的卷烟,2种Ames试验方... 详细信息

分别用传统的平板法和微量波动法2种鼠伤寒沙门氏菌突变试验方法(Ames试验)评价卷烟烟气的细菌致突变性。结果表明,对同一卷烟样品,2种Ames试验方法检测的卷烟烟气细菌致突变性均有良好的剂量效应关系;4种不同样品的卷烟,2种Ames试验方法检测的卷烟烟气细菌致突变性结果一致。与传统的平板法Ames试验比较,微量波动法Ames试验操作简单、灵敏度高,并克服了传统Ames试验不能定量评价的缺点。

关键词：微量波动法 Ames试验卷烟烟气

MIL-88A光芬顿催化体系中羟基自由基的检测

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分析仪器 2021年第4期 132-138页

作者：丁奇王建凤王颖李冰宁马立利周欣燃周阳冯月超贾丽邵鹏刘艳北京市理化分析测试中心北京市食品安全分析测试工程技术研究中心北京100089

为了研究MOF光芬顿体系中·OH生成的影响,首先建立了2-羟基对苯二甲酸(HOTP)和对苯二甲酸(ta.高效液相色谱检测方法,检出限分别为0.5μg/L、0.8 mg/L。分析了光照时间和H_(2)O_(2)浓度变化对实验体系的影响,通过测定ta.HOTP的含量间接... 详细信息

为了研究MOF光芬顿体系中·OH生成的影响,首先建立了2-羟基对苯二甲酸(HOTP)和对苯二甲酸(ta.高效液相色谱检测方法,检出限分别为0.5μg/L、0.8 mg/L。分析了光照时间和H_(2)O_(2)浓度变化对实验体系的影响,通过测定ta.HOTP的含量间接反映·OH变化,结果表明无光照条件时,反应体系中没有检测到ta.耗及HOTP生成,因此该阶段没有产生·OH;增加光照,在光照60 min内不同体系的HOTP生成量明显递增,1.5 mL/L H_(2)O_(2)反应体系中含量最高,其次是1.0 mL/L,但60 min后有所下降,高浓度H_(2)O_(2)下降趋势较明显,表明此段产生过量的·OH会使HOTP发生降解反应,H_(2)O_(2)浓度越高降解强度越大,而·OH与ta.应仍在继续进行,直至下降到一定浓度后停止反应。通过比较本实验反应体系中检测·OH的高效液相色谱法及荧光分光光度法,对比检出限及分析实际样品得出两种方法均适用于·OH检测,但荧光分光光度法灵敏度低于高效液相色谱法。

关键词：羟基自由基光芬顿反应金属有机骨架材料检测