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分子内二硫键对HERV囊膜蛋白融合核心结构的影响

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中国病毒学 2006年第5期21卷 437-442页

作者：冯慧星黄力勤龚睿彭小雪康舒里田波肖庚富武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

合胞素(Syncytin)是一类由人俘获的逆转录病毒囊膜蛋白,与胎盘的形态发生中细胞滋养层到合胞滋养层的分化过程十分相关。Syncytin与人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)囊膜蛋白(Env)在结构上具有相似的特点,二者可能具有相似的膜融合机制。本文通... 详细信息

合胞素(Syncytin)是一类由人俘获的逆转录病毒囊膜蛋白,与胎盘的形态发生中细胞滋养层到合胞滋养层的分化过程十分相关。Syncytin与人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)囊膜蛋白(Env)在结构上具有相似的特点,二者可能具有相似的膜融合机制。本文通过PCR对融合核心部位七肽重复区HR1和HR2之间linker中自然存在的一对保守的分子内二硫键进行定点突变,表达纯化该突变蛋白,并进行了相应的结构及稳定性探讨,通过与未突变蛋白的性质比较确证该分子内二硫键在蛋白结构的正确形成及稳定性上起着一定的作用。

关键词：合胞素二硫键膜融合

植物病毒弱株系及其应用 Ⅲ.烟花叶病毒番茄株弱毒疫苗N14的安全性测定

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微生物学报 1987年第1期 23-29页

作者：覃秉益张秀华田波中国科学院微生物研究所

烟花叶病毒番茄株弱毒疫苗N14接种17科54种植物,只能感染7科20种植物,其中除矮牵牛（Petunia hybrida）表现轻花叶症状外,其它植物均无症状。N14与CMV、PVX和PVK混合接种番茄时的病情指数只与CMV、 PVX和PVY单独接种番茄时的病情指数相... 详细信息

烟花叶病毒番茄株弱毒疫苗N14接种17科54种植物,只能感染7科20种植物,其中除矮牵牛（Petunia hybrida）表现轻花叶症状外,其它植物均无症状。N14与CMV、PVX和PVK混合接种番茄时的病情指数只与CMV、 PVX和PVY单独接种番茄时的病情指数相等或略高。6年来,N14已连续传代100多次,毒力无明显变化,使用N14多年的地区未出现问题,为使用N14的安全性提供了依据。

关键词：植物病毒弱株系烟花叶病毒番茄株弱毒疫苗N14

互补的烟草花叶病毒介导表达丙型肝炎的核心抗原

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高技术通讯 1998年第7期8卷 43-46页

作者：韩爱东刘玉乐康良仪李冬田田波中国科学院微生物研究所天津医科大学

ＴＭＶ两种突变体ＴＳＨｃ和ＴＢＤ，共同接种于烟草叶片。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的结果表明这两种突变体由于功能上互补而产生了系统侵染。ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ的检测结果表明烟草的上部叶片表达了丙型肝炎的核心抗原和ＴＭＶ外... 详细信息

ＴＭＶ两种突变体ＴＳＨｃ和ＴＢＤ，共同接种于烟草叶片。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的结果表明这两种突变体由于功能上互补而产生了系统侵染。ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ的检测结果表明烟草的上部叶片表达了丙型肝炎的核心抗原和ＴＭＶ外壳蛋白质。

关键词：病毒载体核心抗原互补烟草花叶病毒丙型肝炎

SARS-CoV N蛋白与病毒mRNA相互作用的初步研究

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中国病毒学 2005年第5期20卷 490-493页

作者：彭宇李姝李朝阳王菁菁田波郭德银武汉大学生命科学学院现代病毒学研究中心与病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

SARS冠状病毒(SARS-CoV)是一种新型的冠状病毒,其基因组大小约为30,000 nt,为单股正链RNA。病毒基因中的1-72个核甘酸为前导序列。核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白是冠状病毒的主要结构蛋白,它在病毒基因转录,翻译以及病毒颗粒包装中起重要... 详细信息

SARS冠状病毒(SARS-CoV)是一种新型的冠状病毒,其基因组大小约为30,000 nt,为单股正链RNA。病毒基因中的1-72个核甘酸为前导序列。核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白是冠状病毒的主要结构蛋白,它在病毒基因转录,翻译以及病毒颗粒包装中起重要作用。在本研究中,我们通过PCR的方法从SARS-CoV cDNA中克隆N基因,将基因克隆到大肠杆菌表达载体中,经表达纯化获得大量重组蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析获得高纯度的N蛋白。同时构建前导RNA的转录模板,经体外转录得到地高辛标记的RNA。使用Northwestern分析技术,我们证实纯化的N蛋白在体外可以与RNA发生特异性的结合。N蛋白与病毒RNA的结合特性及其在病毒生活周期中的所起作用的初步研究,为下一步设计出有效的阻断病毒周期从而达到抗病毒目的的药物或疫苗奠定了基础。

关键词： SARS冠状病毒核衣壳蛋白 RNA结合

小鼠热休克蛋白gp96羧基端片段的克隆、表达及纯化

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生物工程学报 2004年第4期20卷 619-622页

作者：韩金乐李宏涛李集林田波中国科学院微生物研究所北京100080 哈尔滨师范大学哈尔滨150080

热休克蛋白 (Heatshockprotein )gp96 (Grp94 )是近年来新发现的一类糖蛋白 ,除了分子伴侣的功能外 ,现有越来越多的文献报道了它在先天性免疫和获得性免疫中的重要作用。gp96可以促进抗原呈递细胞的成熟以及细胞因子的分泌。热休克蛋... 详细信息

热休克蛋白 (Heatshockprotein )gp96 (Grp94 )是近年来新发现的一类糖蛋白 ,除了分子伴侣的功能外 ,现有越来越多的文献报道了它在先天性免疫和获得性免疫中的重要作用。gp96可以促进抗原呈递细胞的成熟以及细胞因子的分泌。热休克蛋白抗原肽复合体可以引起特异性的细胞毒T淋巴细胞效应 ,应用这个特点可以设计抗病毒及抗肿瘤药物[1 ] 。但是gp96全长分子量大 ,蛋白在大肠杆菌中表达量低 ,不稳定 ,难纯化。组织提取的gp96又受组织来源和样品量的限制。对gp96的结构和功能的研究带来困难。克隆并表达了小鼠热休克蛋白gp96的羧基端 5 6 0 75 1aa约四分之一长的功能片段 ,该段包含gp96的一个肽结合区和二聚化位点[2 ] 。将该功能片段在大肠杆菌中进行融合表达 ,纯化后将融合的片段切掉 ,并对目的片段进行了分析 ,结果表明该段可能是形成二聚体密切相关的片段。

关键词：热休克蛋白 gp96 融合表达

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我国菊花褪绿斑驳类病毒鉴定

微生物学报 1987年第2期 121-127页

作者：李孟津杨希才田波中国科学院武汉病毒研究所中国科学院微生物研究所

从我国广州地区发现的带有褪绿斑驳症状的'广白'菊花病株中分离到一种小分子核酸,经鉴定其性质与国外报道的菊花褪绿斑驳类病毒(Chrysanthemum Chlorotic Mottlc Viroid,ChCMV)的性质完全一致。病株用酚提取后的粗核酸和制备的纯核酸经... 详细信息

从我国广州地区发现的带有褪绿斑驳症状的'广白'菊花病株中分离到一种小分子核酸,经鉴定其性质与国外报道的菊花褪绿斑驳类病毒(Chrysanthemum Chlorotic Mottlc Viroid,ChCMV)的性质完全一致。病株用酚提取后的粗核酸和制备的纯核酸经正反双向或垂直双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明为具有单链环状的RNA分子,其分子量与菊花矮化类病毒(Chrysanthemum Stunt Viroid,CSV)的相似。根据病株症状、寄主范围以及分段自我杂交等试验分析,证明这种小分子核酸是类病毒——ChCMV,而不是CSV。在检测过程中,我们改进了提取和鉴定类病毒的方法,并建立了可以区分不同种类病毒的分段自我杂交技术。

关键词：菊花褪绿斑驳类病毒正反双向或垂直双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分段自我杂交

马铃薯X病毒和烟花叶病毒对于马铃薯Y病毒侵染酸浆的干扰作用的研究

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微生物学报 1966年第1期27卷 86-90页

作者：田波覃秉益林传光中国科学院微生物研究所

把含有烟花叶病毒(TMV)或马铃薯X病毒(PXV)的烟汁,或把含有提纯的TMV或PXV的缓冲液与含有马铃薯Y病毒(PYV)的烟汁混合接种酸浆上,PYV所引起的局部病斑比单独接种的较少。 PXV对于PYV侵染酸浆的干扰作用仅发生于两病毒同时接种于同一叶... 详细信息

把含有烟花叶病毒(TMV)或马铃薯X病毒(PXV)的烟汁,或把含有提纯的TMV或PXV的缓冲液与含有马铃薯Y病毒(PYV)的烟汁混合接种酸浆上,PYV所引起的局部病斑比单独接种的较少。 PXV对于PYV侵染酸浆的干扰作用仅发生于两病毒同时接种于同一叶表面的情况下。TMV的干扰作用则也能发生于先接种或在接种PYV之后24小时内接种TMV或两病毒分别在叶面和叶背接种的情况下。 PXV的浓度与干扰作用成比例。经过紫外线照射或热处理而钝化了的PXV没有干扰作用。预先系统感染PXV趋于消除混合接种时PXV对PYV的干扰。无论所用的X病毒毒株是强的或弱的都存在这种关系。

关键词：酸浆病斑汁液茄果类马铃薯土豆茄属病毒侵染干扰作用扰动作用

α-鹅膏蕈碱对绒毛烟斑驳病毒及其拟病毒复制的影响

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微生物学报 1987年第3期 233-237页

作者：吴建国卢文筠田波武汉大学病毒研究所中国科学院微生物研究所

在接种了绒毛烟斑驳病毒（VTMoV）的原生质体培养物中加入50μg/ml的α-鹅膏蕈碱和10μCi/ml的3H-尿嘧啶核苷,培养72小时后,从感病的原生质体内提取核酸,然后对核酸进行凝胶电泳分析并测定3H-放射活性,以此探讨α-鹅膏蕈碱对绒毛烟斑驳... 详细信息

在接种了绒毛烟斑驳病毒（VTMoV）的原生质体培养物中加入50μg/ml的α-鹅膏蕈碱和10μCi/ml的3H-尿嘧啶核苷,培养72小时后,从感病的原生质体内提取核酸,然后对核酸进行凝胶电泳分析并测定3H-放射活性,以此探讨α-鹅膏蕈碱对绒毛烟斑驳病毒壳内拟病毒RNA复制的作用。结果表明,拟病毒RNA的复制不受该抑制剂的影响。用酶联免疫吸附分析法（ELISA）测定从感病的原生质体内提取的病毒颗粒,表明α-鹅膏蕈碱对绒毛烟斑驳病毒的复制无影响。本文还对拟病毒RNA的复制机制进行了探讨。

关键词：拟病毒绒毛烟斑驳病毒复制

TMV-L运动蛋白基因植物表达载体的构建及其与番茄Tin-2～2基因的互作

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农业生物技术学报 1999年第1期7卷 11-15页

作者：刘国胜,刘玉乐,宫倩红,杨希才,康良仪,田波中国科学院微生物研究所!北京 100080 中国科学院微生物研究所!北京 100080 中国科学院微生物研究所!北京 100080 中国科学院微生物研究所!北京 100080 中国科学院微生物研究所!北京 100080 中国科学院微生物研究所!北京 100080

对含有烟草花叶病毒番茄株系（TMV－L）部分基因组CDNA的克隆进行缺失改造，得到了含有TMV－L运动蛋白（MP）基因的克隆。MP片段分别与组成型启动子CaMV35S和病原特异诱导型启动子CHS、PiII和BG体外重组，构建成植物表达载体P35S－30K，... 详细信息

对含有烟草花叶病毒番茄株系（TMV－L）部分基因组CDNA的克隆进行缺失改造，得到了含有TMV－L运动蛋白（MP）基因的克隆。MP片段分别与组成型启动子CaMV35S和病原特异诱导型启动子CHS、PiII和BG体外重组，构建成植物表达载体P35S－30K，pCHS－30K，pPiII－30K和pBG－30K。通过农杆菌LBA4404介导，分别转化含Tin－22抗性基因的番茄品种Geneva80。转化p35S－30K的基因工程植株在苗期观察到了部分坏死和黄化现象，初步证明TMV－LMP与Tm－22存在基因对基因的互作关系。诱导型启动子控制下的MP转基因番茄已得到部分潮霉素抗性愈伤组织，为进一步获得广谱高效抗病植株奠定了基础。

关键词： TMV-L Tm-22 30kD运动蛋白转基因番茄抗病性