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Identification of (-)-bornyl diphosphate synthase from Blumea balsamifera and its application for (-)-borneol biosynthesis in Saccharomyces cerevisiae

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Synthetic and Systems Biotechnology 2022年第1期7卷 490-497页

作者： Rui Ma Ping Su Qing Ma Juan Guo suiqing chen Baolong Jin Haiyan Zhang Jinfu Tang Tao Zhou chenghong Xiao Guanghong Cui Luqi Huang School of Pharmacy Henan University of Chinese MedicineZhengzhouChina State Key Laboratory Breeding Base of Dao-di Herbs National Resource Center for Chinese Materia MedicaChina Academy of Chinese Medical SciencesBeijingChina School of Pharmacy Guizhou University of Traditional Chinese MedicineGuiyangChina

Borneol is a precious monoterpenoid with two chiral structures,(-)-borneol and(+)-*** diphosphate synthase is the key enzyme in the borneol biosynthesis ***(+)-bornyl diphosphate synthases have been reported,but no(-)-bornyl diphosphate synthases have been *** balsamifera leaves are rich in borneol,almost all of which is(-)-*** this study,we identified a high-efficiency(-)-bornyl diphosphate synthase(BbTPS3)from *** that converts geranyl diphosphate(GPP)to(-)-bornyl diphosphate,which is then converted to(-)-borneol after dephosphorylation in ***3 exhibited a K m value of 4.93±1.38μM for GPP,and the corresponding k cat value was 1.49 s−*** strategies were applied to obtain a high-yielding(-)-borneol producing yeast strain.A codon-optimized BbTPS3 protein was introduced into the GPP high-yield strain MD,and the resulting MD-B1 strain produced 1.24 mg⋅L^(-1)(-)-*** truncating the N-terminus of BbTPS3 and adding a Kozak sequence,the(-)-borneol yield was further improved by 4-fold to 4.87 mg⋅L^(-1).Moreover,the(-)-borneol yield was improved by expressing the fusion protein module of ERG20 F96W-N127W-YRSQI-t14-BbTPS3K2,resulting in a final yield of 12.68 mg⋅L^(-1) in shake flasks and 148.59 mg⋅L^(-1) in a 5-L *** work is the first reported attempt to produce(-)-borneol by microbial fermentation.

关键词： Metabolic engineering (-)-borneol (-)-bornyl diphosphate synthase Blumea balsamifera Saccharomyces cerevisiae

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Integrative analysis of metabolome and transcriptome provides new insights into functional components of Lilii Bulbus

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Chinese Herbal Medicines 2024年第3期16卷 435-448页

作者： Wenjun Wei Tao Guo Wenguang Fan Mengshan Ji Yu Fu Conglong Lian suiqing chen Wenjing Ma Wenfang Ma Shuying Feng School of Pharmacy Henan University of Chinese MedicineZhengzhou 450046China Henan Engineering Research Center of Medicinal and Edible Chinese Medicine Technology Zhengzhou 450046China School of Life Science and Engineering Lanzhou University of TechnologyLanzhou 730050China Lanzhou Shibai Agricultural Biotechnology Co. Ltd.Lanzhou 730050China Medical College Henan University of Chinese MedicineZhengzhou 450046China

Objective:Lilium brownii ***(LB)and ***(LL)are the main sources of medicinal lily(Lilii Bulbus,Baihe in Chinese)in ***,the functional components of these two species responsible for the treatment efficacy are yet not *** order to explore the therapeutic material basis of Lilii Bulbus,we selected *** ***(LD)only used for food as the control group to analyze the differences between LD and the other two(LB and LL).Methods:Metabolome and transcriptome were carried out to investigate the differences of active components in LD vs LB and LD vs *** of metabolome and transcriptome was analysed using various analysis methods,such as principal component analysis(PCA),hierarchical cluster analysis(HCA),and so *** expressed genes(DEGs)were enriched through KEGG and GO enrichment ***:The PCA and HCA of the metabolome indicated the metabolites were clearly separated and varied greatly in LL and LB contrasted with *** were 318 significantly differential metabolites(SDMs)in LD vs LB group and 298 SDMs in LD vs LL *** with LD group,the significant up-regulation of steroidal saponins and steroidal alkaloids were detected both in LB and LL groups,especially in LB *** HCA of transcriptome indicated that there was significant difference in LB vs LD group,while the difference between LL and LD varied ***,47540 DEGs in LD vs LB group and 18958 DEGs in LD vs LL group were ***,CYP450s involving in the biosynthesis of steroidal saponins and steroidal alkaloids were detected,and comparing with LD,CYP724,CYP710A,and CYP734A1 in LB and CYP90B in LL were all ***:This study suggested that steroidal saponins and steroidal alkaloids maybe the representative functional components of Lilii Bulbus,which can provide new insights for Lilii Bulbus used in the research and development of classic famous formula.

关键词： Lilium browniiF.E.Brown var.viridulum Baker Lilium davidii var.willmottiae(E.H.Wilson) Raffill Lilium lancifolium Thunb. metabolome transcriptome

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Modern Research Progress of Donglingcao Rabdosiae(Rubescentis Herba)

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Chinese Medicine and Natural Products 2021年第1期1卷 58-62页

作者： MA Jun chen suiqing College of Pharmacy Henan University of Chinese MedicineZhengzhouHenan 450046China

In recent years,the anti-tumor activity of Donglingeao(Rabdosiae Rubescentis Herba)has received much *** diterpenoid rubescensine A as its main anti-cancer active component has anti-tumor,anti-bacterial,anti-inflammatory pharmacological *** present,researches on the chemical composition,phar-macological effects and clinical application of Donglingeao(Rabdosiae Rubescentis Herba)have made impor-tant *** upstream key enzyme genes have basically been cloned in the biosynthesis pathway of ***,the synthetic route of rubescensine A is not clear,and there are few reports on the cyto-chrome P450 family that regulates the synthesis of rubescensine ***,it is necessary to further study the key enzyme genes that regulate the synthesis of rubescensine A to provide research basis for the in vitro synthesis of rubescensine A.

关键词： Donglingcao(Rabdosiae Rubescentis Herba) rubescensine A diterpenoids chemical efects

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工作记忆与口吃研究进展

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中国特殊教育 2012年第6期 39-44,33页

作者：陈穗清张积家华南师范大学心理应用研究中心广州510631

口吃是一种言语流畅性障碍。许多关于口吃者言语加工的研究都发现工作记忆对口吃具有重要的影响。文章分析了工作记忆各成分(包括中央执行系统、语音回路、视空间模板)与口吃的关系,综述了关于工作记忆与口吃关系的研究,并对今后的研究... 详细信息

口吃是一种言语流畅性障碍。许多关于口吃者言语加工的研究都发现工作记忆对口吃具有重要的影响。文章分析了工作记忆各成分(包括中央执行系统、语音回路、视空间模板)与口吃的关系,综述了关于工作记忆与口吃关系的研究,并对今后的研究方向提出了建议。

关键词：口吃工作记忆中央执行系统语音回路视空间模板

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GC-MS结合保留指数法解析太行菊挥发油的化学成分

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中国实验方剂学杂志 2022年第15期28卷 120-128页

作者：薛淑娟杨江凯陈随清河南中医药大学药学院河南省中药资源与中药化学重点实验室郑州450046

目的:研究太行菊挥发油的成分组成,为该药材的综合开发提供参考依据。方法:以小白菊、小黄菊和野菊花作为对照,采用气相色谱-质谱法(GC-MS)结合保留指数法对太行菊及3个对照菊花品种的挥发油进行定性及定量分析,GC条件为程序升温(初始温... 详细信息

目的:研究太行菊挥发油的成分组成,为该药材的综合开发提供参考依据。方法:以小白菊、小黄菊和野菊花作为对照,采用气相色谱-质谱法(GC-MS)结合保留指数法对太行菊及3个对照菊花品种的挥发油进行定性及定量分析,GC条件为程序升温(初始温度60℃,保持2 min;以5℃·min^(-1)升温至120℃,保持2 min;以2℃·min^(-1)升温至180℃,保持3 min;以8℃·min^(-1)升温至240℃,保持5 min;以10℃·min^(-1)升温至280℃,保持5 min),载气为高纯度氦气,分流比50∶1;MS条件为电子轰击离子源(EI),离子源温度230℃,电子碰撞能量70 e V,检测范围m/z 30~445。采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)筛选太行菊与3个对照菊花品种中挥发油的差异性成分,明确其特征性。结果:分别从太行菊、小白菊、小黄菊和野菊花的挥发油中鉴定出了86、96、112、109个化合物,其中四者共有成分73个。太行菊与对照菊花品种的挥发油含量差异较大,其中太行菊中α-侧柏酮、桉油精和4-松油烯醇的相对含量较高;而对照菊花品种中樟脑、桉油精和α-乙酸松油酯的相对含量均较高。PCA和OPLS-DA分析共筛选出11个化合物作为区分太行菊和3个对照菊花品种的特征性成分,其主要差异成分为兰香油薁和δ-杜松烯。结论:太行菊挥发油主要含醇类、萜烯类、酮类及酯类成分,药用价值较高;GC-MS结合保留指数法可提高挥发油定性分析的准确性,可为太行菊的开发与利用提供参考。

关键词：太行菊气相色谱-质谱法(GC-MS) 保留指数挥发油定性分析化学计量学菊花

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论手语对聋人认知的影响

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中国特殊教育 2016年第7期 37-43页

作者：陈穗清张积家广州大学教育学院广州510006 中国人民大学心理学系北京100872 中国人民大学民族语言文化心理重点研究基地北京100872

手语是聋人的母语,是聋人在自然状态下习得的第一语言。手语具有鲜明独特的语法体系、词法和句法特性。手语同有声语言一样,具有表达复杂思想、细腻感情以及抽象语言的能力。Whorf的语言关联性假设认为,语言影响认知。使用手语也影响聋... 详细信息

手语是聋人的母语,是聋人在自然状态下习得的第一语言。手语具有鲜明独特的语法体系、词法和句法特性。手语同有声语言一样,具有表达复杂思想、细腻感情以及抽象语言的能力。Whorf的语言关联性假设认为,语言影响认知。使用手语也影响聋人的认知。本文将从颜色认知、空间认知、时间认知、概念联系、形象思维、社会认知和第二语言学习等方面,综述手语对聋人认知的影响。

关键词：手语认知聋人影响

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杜仲WOX家族基因鉴定及在叶片发育中的表达

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浙江农林大学学报 2023年第1期40卷 1-11页

作者：刘俊李龙陈玉龙陈随清河南中医药大学中医药科学院河南省中医方证信号传导重点实验室河南郑州450046 国际竹藤中心国家林业和草原局/北京市共建竹藤科学与技术重点实验室北京100102 国际竹藤中心安徽太平试验中心安徽黄山245716 西北农林科技大学林学院陕西杨凌712100 河南中医药大学药学院河南郑州450046

【目的】Wuschel(WUS)相关的同源异型盒(Wuschel-related homeobox,WOX)转录因子家族在植物生长发育中发挥重要作用。本研究旨在探索WOX转录因子在杜仲Eucommia ulmoides中的分布及表达特征。【方法】以杜仲基因组数据库为基础,利用生... 详细信息

【目的】Wuschel(WUS)相关的同源异型盒(Wuschel-related homeobox,WOX)转录因子家族在植物生长发育中发挥重要作用。本研究旨在探索WOX转录因子在杜仲Eucommia ulmoides中的分布及表达特征。【方法】以杜仲基因组数据库为基础,利用生物信息学方法对杜仲WOX家族进行全基因组鉴定;基于转录组数据分析EuWOXs在叶片发育及杜仲胶形成中的表达特征,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测EuWOXs在‘紫叶’杜仲‘Ziye’叶片不同发育时期的表达模式。【结果】杜仲基因组中共鉴定出8条EuWOXs,分布于8条染色体;EuWOXs蛋白质长度为182~352个氨基酸,理论等电点为5.10~6.47,分子量为20.7~40.4 kDa;亚细胞定位预测EuWOXs均定位在细胞核中,均为亲水性蛋白。根据系统进化关系,杜仲WOX家族包括3个亚家族,分别含2、1和5个EuWOXs基因。EuWOXs均含有内含子,并包含多个基序,启动子中富含激素、胁迫和光周期响应元件。大部分EuWOXs在杜仲叶片中表达量较低,EuWOX13-1随叶片发育表达量逐渐降低,EuWOX13-2在生长叶中表达量最高。【结论】杜仲中有8个EuWOXs基因,EuWOX13-1和EuWOX13-2可能在杜仲叶片发育中发挥重要作用。

关键词：杜仲 WOX家族基因生物信息学分析基因表达叶片发育

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中药山茱萸SCAR标记的研究

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中国中药杂志 2011年第9期36卷 1145-1149页

作者：陈随清卢小蕾王利丽河南中医学院河南郑州450008

目的：建立山茱萸的SCAR标记,为山茱萸药材分子鉴定提供科学依据。方法：用随机引物进行RAPD筛选,获取特异的RAPD标记条带,分离提取RAPD标记条带,进行克隆和测序,根据测定RAPD标记条带的两端序列设计1对特异引物进行常规PCR反应,获得SCA... 详细信息

目的：建立山茱萸的SCAR标记,为山茱萸药材分子鉴定提供科学依据。方法：用随机引物进行RAPD筛选,获取特异的RAPD标记条带,分离提取RAPD标记条带,进行克隆和测序,根据测定RAPD标记条带的两端序列设计1对特异引物进行常规PCR反应,获得SCAR标记。结果：根据RAPD标记条带的序列设计筛选了4对特异引物,其中YST38,YST43分别对7个山茱萸品种样本的DNA进行SCAR扩增,7个山茱萸栽培品种均能产生单一的PCR条带,可以用作山茱萸的鉴别;而YST38对圆柱形果型、长梨形果型还有1条特异性条带,可以做为这2个品种的鉴别依据;YST39对7个山茱萸品种进行扩增,纺锤形果型样本的谱带大小（350400 bp）比其余6个果型的谱带大小（650700 bp）短了300 bp左右,这条谱带可以做为纺锤形果型的鉴别依据;YST92对圆柱形果型、长梨形果型均产生了1条600700 bp的条带,椭圆形果型、短圆柱形果型产生了1条200300 bp的条带,长圆柱形果型、纺锤形果型、短梨形果型3个果型无扩增,YST92可用来筛选山茱萸的几种果型。结论：建立的SCAR标记,条带清晰明亮,结果稳定,可作为山茱萸品种选育和药材分子鉴定的依据。

关键词：山茱萸栽培品种混伪品 SCAR标记

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不同家庭结构对幼儿亲社会行为意向的影响

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学前教育研究 2019年第11期 51-61页

作者：李梦娜李堃陈穗清广州大学教育学院广州510006 广东省广州市南沙区第二幼儿园广州511455

受"全面二孩"生育政策影响,我国出现了"独生""准二孩""二孩"三种不同的家庭结构。为探索家庭结构的变化对幼儿亲社会行为意向的影响,本研究以6岁幼儿作为被试,运用艾森伯格亲社会道德两难情境范式,分别考察来自"独生""准二孩""二孩"家... 详细信息

受"全面二孩"生育政策影响,我国出现了"独生""准二孩""二孩"三种不同的家庭结构。为探索家庭结构的变化对幼儿亲社会行为意向的影响,本研究以6岁幼儿作为被试,运用艾森伯格亲社会道德两难情境范式,分别考察来自"独生""准二孩""二孩"家庭的幼儿在助人、合作、分享等亲社会行为上的意向表现,结果发现6岁幼儿的亲社会道德推理水平处于他人需求取向阶段,亲社会行为意向整体较高,其中助人意向最突出,其次是合作与分享;6岁幼儿的亲社会行为意向不存在性别差异;来自"独生"和"准二孩"家庭的幼儿的亲社会行为意向高于"二孩"家庭的长子女,可见家庭结构的变化会影响幼儿的亲社会行为意向。政府应为"全面二孩"生育政策启动全方位的家庭服务支持策略;幼儿园应大力开展亲职教育和同胞教育;家长应重视幼儿的家庭角色地位,把握"准二孩"家庭结构过渡阶段的教育契机,提高长子女照料二孩的参与度,发挥幼儿同胞竞争意识的正向作用。

关键词：家庭结构生育政策学前儿童亲社会行为意向

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兰花根石油醚部位化学成分研究

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世界科学技术-中医药现代化 2019年第12期21卷 2576-2582页

作者：陈俊葛晓瑾付钰陈随清河南中医药大学药学院郑州450046 河南省农业科学院经济作物研究所郑州450008

目的本研究对兰花根石油醚部位的化学成分进行分离鉴定,并对石油醚总提物及单体化合物进行体外细胞活性研究,为兰花根的开发利用提供理论依据。方法采用多种柱色谱法,对兰花根石油醚萃取部位进行分离纯化,并结合理化性质及波谱分析对单... 详细信息

目的本研究对兰花根石油醚部位的化学成分进行分离鉴定,并对石油醚总提物及单体化合物进行体外细胞活性研究,为兰花根的开发利用提供理论依据。方法采用多种柱色谱法,对兰花根石油醚萃取部位进行分离纯化,并结合理化性质及波谱分析对单体化合物进行结构鉴定;采用NO测定法及MTT法对所得石油醚总提物及单体化合物进行抗炎及抗肿瘤活性研究。结果石油醚部位经柱色谱法分离得到5个单体化合物,分别为豆甾-4-烯-3β,6β-二醇、β-谷甾醇,β-谷甾醇棕榈酸酯,邻苯二甲酸二丁酯,胡萝卜苷。细胞活性研究结果显示,石油醚总提物及豆甾-4-烯-3β,6β-二醇对人肝癌细胞SMMC-7721及小鼠乳腺癌细胞4T1均有显著增殖抑制作用,石油醚总提物具有明显抗炎作用。结论兰花根石油醚部位化学成分有一定的抗炎及抗肿瘤作用,具有进一步研究和开发的价值。

关键词：兰花根石油醚部位分离鉴定体外细胞抗炎活性抗癌活性

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