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牦牛体细胞核移植电融合参数和重构胚胎培养方法的优化

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黑龙江畜牧兽医 2018年第7期 191-194,254页

作者：王森孙永刚李瑞哲马志杰陈生梅徐惊涛青海大学畜牧兽医科学院

为了探索牦牛体细胞核移植胚胎培养方法和体系,试验采用不同的脉冲电压和脉冲时间对牦牛重构胚胎进行融合,采用不同的培养方法对牦牛核移植重构胚胎进行培养,从而优化牦牛体细胞核移植胚胎的培养体系。结果表明：牦牛核移植重构胚胎采用... 详细信息

为了探索牦牛体细胞核移植胚胎培养方法和体系,试验采用不同的脉冲电压和脉冲时间对牦牛重构胚胎进行融合,采用不同的培养方法对牦牛核移植重构胚胎进行培养,从而优化牦牛体细胞核移植胚胎的培养体系。结果表明：牦牛核移植重构胚胎采用16 V、20μs、2次脉冲融合率最高,为（80.8±3.8）%。采用mSOF培养液、G1/G2培养液、输卵管上皮细胞共培养三种培养体系对牦牛体细胞克隆胚胎的卵裂率影响差异不显著（P〉0.05）,但是G1/G2培养液的囊胚率为（20.0±2.4）%,与输卵管上皮细胞共培养的囊胚率[（19.4±2.3）%]相比差异不显著（P〉0.05）,显著高于mSOF培养液的囊胚率[（13.7±3.8）%]（P〈0.05）。

关键词：牦牛体细胞核移植电融合胚胎培养优化

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体外受精生产性控犏牛胚胎条件的优化

家畜生态学报 2018年第4期39卷 49-54页

作者：王森孙永刚李瑞哲马志杰陈生梅徐惊涛青海大学畜牧兽医科学院青海西宁810016

为提高性控犏牛胚胎体外发育率,从性控精液的精子密度、受精时间、卵丘细胞的脱除程度、胚胎培养体系和胚胎培养环境各个环节进行优化。结果表明:(1)受精24h的卵裂率和囊胚率显著高于受精6h、18h(P0.05),均显著高于性控精液0.04×10~6~0... 详细信息

为提高性控犏牛胚胎体外发育率,从性控精液的精子密度、受精时间、卵丘细胞的脱除程度、胚胎培养体系和胚胎培养环境各个环节进行优化。结果表明:(1)受精24h的卵裂率和囊胚率显著高于受精6h、18h(P0.05),均显著高于性控精液0.04×10~6~0.06×10~6个/mL的卵裂率和囊胚率(P0.05),但均显著高于FBS CR1aa培养液的囊胚率(P0.05)。结果说明,生产性控犏牛胚胎最佳的条件是性控精液的浓度0.4×10~6~0.6×10~6个/mL,受精时间为24h,采取卵丘细胞不脱除的方法,胚胎培养方式采用输卵管上皮细胞共培养的方式,胚胎培养环境采用低氧环境。

关键词：犏牛体外受精性控精液卵母细胞氧浓度

地塞米松对脑缺氧、缺血迟发性神经元死亡的保护作用

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上海医学 2000年第2期23卷 81-83页

作者：周伟吴圣楣陈惠金陆良勇上海第二医科大学新华医院上海市儿科医学研究所 200092 南京军区上海肝病研究中心

目的　探讨地塞米松（ＤＥＸ）预处理神经保护作用的可能机制。方法　在建立新生大鼠脑缺氧缺血（ＨＩ）损伤标准动物模型（７ｄ龄新生大鼠，结扎其一侧颈总动脉后予缺氧２．５ｈ）基础上，运用ＨＥ染色光镜观察及原位末端标记技术... 详细信息

目的　探讨地塞米松（ＤＥＸ）预处理神经保护作用的可能机制。方法　在建立新生大鼠脑缺氧缺血（ＨＩ）损伤标准动物模型（７ｄ龄新生大鼠，结扎其一侧颈总动脉后予缺氧２．５ｈ）基础上，运用ＨＥ染色光镜观察及原位末端标记技术，观察分析缺氧缺血组、预给药组（ＤＥＸ预处理后予缺氧缺血）、后给药组（缺氧结束后即刻予ＤＥＸ）、假手术给药组（仅作颈正中切口后即缝合皮肤，不结扎颈动脉，假手术前１２ｈ予注射ＤＥＸ）以及正常对照组共５组新生大鼠的缺氧缺血侧大脑组织细胞凋亡情况。结果　在ＨＩ前给予ＤＥＸ预处理能显著减少脑细胞的凋亡，而ＨＩ后给予ＤＥＸ则对细胞凋亡无明显影响。结论　ＤＥＸ预处理对神经的保护作用可能是通过抑制细胞凋亡而实现的。

关键词：脑缺氧脑缺血神经元死亡地塞米松

Real-time PCR检测黄牛、牦牛、犏牛睾丸组织中Boule、Dazl基因mRNA表达

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生物技术通报 2012年第10期28卷 150-155页

作者：付永魏雅萍吴克选陈生梅张立成王谢忠孟茹青海省畜牧兽医科学院西宁810016 青海省动物疫病预防控制中心西宁810001 西宁市畜牧兽医站西宁810003

旨在探讨DAZ基因家族Dazl和Boule基因与犏牛雄性不育的关系。采用实时荧光定量PCR技术检测黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中DAZ基因家族Boule和Dazl基因mRNA表达并进行分析。结果表明,Boule和Dazl熔解曲线扩增产物呈现单特异峰,具有较高的灵... 详细信息

旨在探讨DAZ基因家族Dazl和Boule基因与犏牛雄性不育的关系。采用实时荧光定量PCR技术检测黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中DAZ基因家族Boule和Dazl基因mRNA表达并进行分析。结果表明,Boule和Dazl熔解曲线扩增产物呈现单特异峰,具有较高的灵敏度和特异性;标准曲线显示Ct值与重组质粒浓度间线性关系良好,相关系数均大于0.999;mRNA表达分析显示,3种牛中Dazl基因在犏牛睾丸组织中表达量最低,其中黄牛与牦牛、黄牛与犏牛差异显著(P0.05);Boule基因在3种牛睾丸组织中的表达量显示,黄牛与牦牛差异不显著(P>0.05),黄牛、牦牛与犏牛差异显著(P<0.05)。结果提示,Dazl和Boule基因可作为研究犏牛雄性不育的候选基因。

关键词：犏牛雄性不育 Boule基因 Dazl基因荧光实时定量PCR

加味生铁落饮治疗痰火上扰证狂病伴危险行为患者的效果

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中国医药导报 2015年第2期12卷 89-93页

作者：陈生梅艾春启王熙戴文敬湖北省十堰市中医医院湖北十堰442012

目的了解加味生铁落饮治疗痰火上扰证狂病伴危险行为患者的效果。方法选取符合狂病伴危险行为患者100例,将诊断为痰火上扰证且符合精神分裂症伴发危险行为的56例患者随机分为加味生铁落饮联用利培酮组(治疗组)与单用利培酮组(单用组)。... 详细信息

目的了解加味生铁落饮治疗痰火上扰证狂病伴危险行为患者的效果。方法选取符合狂病伴危险行为患者100例,将诊断为痰火上扰证且符合精神分裂症伴发危险行为的56例患者随机分为加味生铁落饮联用利培酮组(治疗组)与单用利培酮组(单用组)。疗程4周,随访12个月。于治疗前及治疗1、2、3、4周分别采用危险行为分级量表评定危险行为;治疗前后采用阳性和阴性症状量表(PANSS)、不良反应量表(TESS)、健康状况问卷(SF-36)、大体评定量表(GAS)评定疗效、不良反应、生存质量,统计复发、再住院情况、危险行为改善情况。结果治疗组总有效率为82.1%,单用组为75.0%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗组控制危险行为平均起效时间为(16.01±2.38)d,单用组为(20.93±2.25)d,两组比较差异有高度统计学意义(P0.05)。两组不良反应发生率比较差异有高度统计学意义(P<0.01)。治疗组的复发率、再住院率、社会功能缺陷率要显著低于单用组(P<0.01)。治疗组SF-36多个因子分及总分明显高于单用组(P<0.05或P<0.01)。结论加味生铁落饮联用治疗痰火上扰证狂病且符合精神分裂症危险行为患者的疗效等同于单用利培酮组,危险行为改善明显且起效时间短,不良反应发生率低,复发率、再住院率、社会功能缺陷率低,可以有效改善生存质量,是一种对痰火上扰证狂病且符合精神分裂症危险行为患者的较好疗法,宜扩大样本、延长随访时间深入研究。

关键词：加味生铁落饮狂病精神分裂症痰火上扰证危险行为疗效

黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织Dazl基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

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西北农业学报 2013年第1期22卷 12-18页

作者：付永魏雅萍孟茹吴克选陈生梅张立成王谢忠青海省畜牧兽医科学院西宁810016 西宁市畜牧兽医站西宁810016 青海省动物疫病预防控制中心西宁810001

为了检测黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织Dazl基因mRNA表达水平。利用GenBank中牛Dazl mRNA序列,在其保守区设计并合成特异性引物,以牛肌动蛋白基因(β-actin)为内参,建立实时荧光定量PCR方法。结果表明,在100～10-6 7个拷贝量重组质粒稀释范... 详细信息

为了检测黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织Dazl基因mRNA表达水平。利用GenBank中牛Dazl mRNA序列,在其保守区设计并合成特异性引物,以牛肌动蛋白基因(β-actin)为内参,建立实时荧光定量PCR方法。结果表明,在100～10-6 7个拷贝量重组质粒稀释范围内,Dazl和β-actin基因的Ct值与重组质粒的含量均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999。熔解曲线产物为特异的单峰,具有较高的灵敏度和特异性。Dazl基因重组质粒最小检出含量达到10拷贝/μL,批内变异系数保持在1.351%以内,批间变异系数保持在3.217%以内,重复性较好。Dazl基因的mRNA表达量在犏牛睾丸组织中最低,这一分布可能与犏牛精子发生过程中减数分裂调控作用相关。

关键词：犏牛雄性不育 Dazl 荧光实时定量PCR

基于mtDNA Cyt b序列变异探究柴达木黄牛的母系遗传多样性及遗传背景

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浙江农业学报 2023年第2期35卷 285-292页

作者：杨秋蕾魏旭东马志杰陈生梅晁生玉乌兰巴特尔青海大学畜牧兽医科学院青海西宁810016 青海省海西州农业技术推广服务中心青海德令哈817099

为探究柴达木黄牛的母系遗传多样性及遗传背景,本研究随机选取柴达木黄牛5个主产区268个个体,通过PCR方法和直接测序技术得到其mtDNA Cyt b基因全序列,使用生物信息学软件分析其遗传多样性、分化及母系起源,进而在分子水平上揭示其母系... 详细信息

为探究柴达木黄牛的母系遗传多样性及遗传背景,本研究随机选取柴达木黄牛5个主产区268个个体,通过PCR方法和直接测序技术得到其mtDNA Cyt b基因全序列,使用生物信息学软件分析其遗传多样性、分化及母系起源,进而在分子水平上揭示其母系遗传多样性水平、分化程度及母系遗传背景。结果表明:柴达木黄牛Cyt b基因核苷酸序列长度为1140 bp,比对分析共检测到29个核苷酸多态位点,其中单一多态位点4个,简约信息位点25个;依据序列间核苷酸变异共确定了12种单倍型,其中优势单倍型为H2,品种单倍型多样度为0.5882±0.0300,核苷酸多样度为0.0040±0.0022,表明柴达木黄牛具有较丰富的母系遗传多样性。柴达木黄牛品种内5个群体间分化指数Fst值在-0.0104~0.1618,提示品种内群体间分化程度存在差异,其中格尔木群体与乌兰群体间分化程度最大(Fst=0.1618),大柴旦群体和茫崖群体间的分化程度最小(Fst=-0.0104)。基于UPGMA法的品种内群体间聚类关系表明,柴达木黄牛品种内5个群体可聚为2类,其中格尔木群体与都兰群体最先聚在一起,大柴旦群体与茫崖群体也最先聚为一起,随后它们再聚为1类,而乌兰群体单独为另一类,2类最后聚为一大类。系统发育分析表明,柴达木黄牛由普通牛和瘤牛2个母系遗传支系组成,表明柴达木黄牛有普通牛和瘤牛2个母系起源且以普通牛起源为主。此外,研究发现,茫崖、乌兰、都兰各群体均有1个个体为牦牛mtDNA Cyt b单倍型序列类型,占总头数的1.12%,提示柴达木黄牛品种中存在一定程度的牦牛基因渗入。

关键词：柴达木黄牛 mtDNA Cyt b 遗传多样性分化母系起源

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非洲猪瘟病毒的流行与遗传演化:变与不变

中国兽医学报 2024年第7期44卷 1545-1555页

作者：陈盛媚王涛陆战豪蓝靖罗瑞付强孙元仇华吉佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528231 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室黑龙江哈尔滨150069

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪而引起的一种烈性传染病。ASFV在欧洲暴发流行过程中,已演化出无红细胞吸附特性的弱毒株。2018年,基因Ⅱ型ASFV强毒株传入我国后,相... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪而引起的一种烈性传染病。ASFV在欧洲暴发流行过程中,已演化出无红细胞吸附特性的弱毒株。2018年,基因Ⅱ型ASFV强毒株传入我国后,相继出现了基因Ⅱ型弱毒株、基因Ⅰ型弱毒株以及基因Ⅰ型和Ⅱ型重组的ASFV强毒株。这表明ASFV在流行过程中出现了复杂、多样的遗传演化,给疫苗研发和疫病的监测带来了严峻的挑战。本文首先对ASFV在我国和全球流行的新特点进行了总结;重点分析了ASFV在流行过程中的遗传变异和致病性的改变;在此基础上,探讨了ASFV遗传变异对病毒免疫逃逸和致病性的影响,以及对疫苗研发、疫病检测和监测带来的挑战;旨在加深对ASFV遗传演化规律与变异机制的认知,从而为疫苗和诊断技术研究提供理论依据。

关键词：非洲猪瘟非洲猪瘟病毒基因突变重组遗传演化疫苗

柴达木牛父系遗传多样性、群体结构及与中国北方部分黄牛品种的遗传关系

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2024年第6期50卷 942-953页

作者：魏旭东徐东辉曹萍陈生梅马晓慧晁生玉雷初朝马志杰青海大学畜牧兽医科学院青海西宁810016 农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室青海西宁810016 青海省高原家畜遗传资源保护与创新利用重点实验室青海西宁810016 青海省海西州农业技术推广服务中心青海海西817099 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨陵712100

本研究对包括25头柴达木牛在内的9个黄牛品种共计110头牛的Y染色体基因组单拷贝基因区进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)扫描,分析其父系遗传多样性和群体结构差异、分化状况及聚类关系。结果表明:9个品种共定义... 详细信息

本研究对包括25头柴达木牛在内的9个黄牛品种共计110头牛的Y染色体基因组单拷贝基因区进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)扫描,分析其父系遗传多样性和群体结构差异、分化状况及聚类关系。结果表明:9个品种共定义了14种Y染色体基因组单倍型,其中在柴达木牛中确定了4种Y染色体基因组单倍型(H7、H12、H13和H14)。遗传多样性分析表明,柴达木牛父系遗传多样性较为丰富(单倍型多样度为0.690±0.080),但与蒙古牛、延边牛、西藏牛和哈萨克牛相比较低。系统发育分析显示,柴达木牛父系遗传由普通牛Y1、Y2a和Y2b(亚)单倍型组组成,且以Y2b亚单倍型组为主,说明柴达木牛拥有普通牛父系起源。遗传分化结果表明,柴达木牛与蒙古牛、西藏牛之间的分化程度很低,与延边牛之间达到中等分化,与哈萨克牛、西门塔尔牛、安格斯牛之间的分化程度高。聚类分析显示,柴达木牛与蒙古牛聚类关系最近,与西藏牛、延边牛聚类关系较近,而与哈萨克牛、西门塔尔牛、安格斯牛聚类关系较远。本研究结果为深入了解柴达木牛的父系遗传多样性、群体遗传结构及与其他黄牛品种间的遗传关系等提供了参考,丰富了柴达木牛基因组数据库(集),为后续开展柴达木牛遗传资源的合理保护和分子育种实践奠定了基础。

关键词：柴达木牛 Y染色体基因组父系遗传多样性分化系统发育

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