检索结果-南通市图书馆

水禽3种免疫抑制性病毒多重PCR检测方法的建立与应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2024年第3期54卷 330-336页

作者：戴银杨雪童雨芹吴希陈瑝儿仲月怡胡晓苗王洁茹殷冬冬尹磊沈学怀潘孝成赵瑞宏安徽省农业科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病研究中心安徽合肥230031 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031

禽流感病毒 H9 亚型(AIV-H9)、鹅圆环病毒(GoCV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)是水禽常见病原,常发生混合感染且易导致水禽的免疫抑制性疾病。本研究针对 AIV-H9、GoCV 和 MDRV 的基因序列,分别设计特异性引物,通过优化多重 PCR 的反应条件,... 详细信息

禽流感病毒 H9 亚型(AIV-H9)、鹅圆环病毒(GoCV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)是水禽常见病原,常发生混合感染且易导致水禽的免疫抑制性疾病。本研究针对 AIV-H9、GoCV 和 MDRV 的基因序列,分别设计特异性引物,通过优化多重 PCR 的反应条件,建立了这 3 种病毒的多重 PCR 检测方法,并进行特异性、灵敏度和可重复性验证。结果显示,建立的三重 PCR 检测方法能特异性扩增 AIV-H9、GoCV 和 MDRV的目的片段,与新型鹅星状病毒、鸭瘟病毒、鹅细小病毒、禽腺病毒 4 型无交叉反应;最低检出浓度分别为2.93×10^(4)copies/ μL、2.5×10^(2)copies/ μL、3.0×10^(6)copies/ μL;利用该方法对 30 份临床样品进行检测,MDRV检出率为 6.7%,GoCV 和 AIV-H9 的检出率较高,分别为 36.7%和 26.7%。三重 PCR 与单重 PCR 的符合率为 100%。结果表明,该三重 PCR 检测方法特异、灵敏、稳定性好,能够用于这 3 种病毒的流行病学调查和临床检测。

关键词：禽流感病毒H9亚型鹅圆环病毒番鸭呼肠孤病毒三重PCR

鸡白痢沙门菌感染雏鸡的骨髓miRNA表达谱分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2022年第12期53卷 4527-4534页

作者：尹磊潘孝成沈学怀张丹俊戴银王洁茹安徽省农科院畜牧兽医研究所安徽省畜禽疫病研究中心合肥230031 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室合肥230031

旨在探究鸡白痢沙门菌(Salmonella enterica serovar Pullorum,S. Pullorum)感染雏鸡后骨髓miRNA的差异表达特征,为深入了解鸡白痢沙门菌的致病机制提供理论基础。将7日龄SPF雏鸡随机分为两组,分别口服鸡白痢沙门菌和PBS,于感染24 h后... 详细信息

旨在探究鸡白痢沙门菌(Salmonella enterica serovar Pullorum,S. Pullorum)感染雏鸡后骨髓miRNA的差异表达特征,为深入了解鸡白痢沙门菌的致病机制提供理论基础。将7日龄SPF雏鸡随机分为两组,分别口服鸡白痢沙门菌和PBS,于感染24 h后采集骨髓进行miRNA测序,筛选差异倍数≥2且P值≤0.05的差异表达miRNAs进行靶基因预测以及GO、KEGG富集分析,随机选取6个miRNAs进行qRT-PCR验证,构建与免疫过程相关的miRNA-mRNA靶点网络。通过miRNA测序,共获得20个已知的差异表达miRNAs,其中11个上调,9个下调。qRT-PCR结果表明,miRNA变化趋势与测序结果一致。GO分析结果表明,差异表达基因主要富集在膜运输、信号转导、免疫系统、碳水化合物代谢、糖类的生物合成和代谢等,KEGG的信号通路主要富集在Notch信号通路、Hedgehog信号通路、PPAR信号通路、AMPK信号通路、Hippo信号通路等,miRNA-mRNA网络互作发现,gga-miR-1466和gga-miR-6643-5p可能是参与免疫过程相关的关键miRNA。本研究解析了鸡白痢沙门菌感染雏鸡的骨髓miRNA表达谱特征,为了解鸡白痢沙门菌和鸡之间相互作用的复杂分子致病机制提供了新的见解,为防控鸡白痢沙门菌感染提供了新策略。

关键词：鸡白痢沙门菌感染骨髓 miRNA 免疫反应

重组酶辅助扩增结合CRISPR/Cas13a检测禽腺病毒4型方法的建立

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

云南农业大学学报:自然科学版 2023年第5期38卷 803-807页

作者：殷冬冬郭浩兰梦蝶尹磊王洁茹沈学怀戴银潘孝成安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽省畜禽疫病研究中心安徽合肥230001 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230001 肥西县农业农村局动物卫生监督所安徽合肥231200 宁国市动物卫生监督所安徽宁国242300

【目的】建立高效、灵敏、特异的禽腺病毒4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)检测方法。【方法】将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats associated protein 13a,CRISPR-Cas13a)技术相结合,针对FAdV-4 Hexon基因保守区设计RAA引物及CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a荧光检测,以qPCR为对照方法,评价所建立方法的灵敏度、特异性以及与qPCR法的一致性。【结果】本研究所建立的方法反应过程均在37℃恒温条件下完成,反应体系可检测的最低扩增拷贝数为101 copies/μL,灵敏度高,且与FAdV-1、FAdV-7、FAdV-8b、FAdV-9、FAdV-10、鸡传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感H9亚型疫苗和新城疫病毒等禽病原核酸检测无交叉反应。该方法检测30份临床样本与qPCR检测的阳性检出率一致。【结论】建立的RAA-Cas13a方法检测FAdV-4具有简便、灵敏、特异等特点,可用于FAdV-4的快速检测和流行病学监测。

关键词：禽腺病毒4型 CRISPR/Cas13a 重组酶辅助扩增检测

维普期刊数据库博看期刊

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

六安地区猪细小病毒流行病学调查

养猪 2023年第3期 114-118页

作者：王扬龙汪秀娟汪洁茹殷冬冬沈学怀尹磊赵瑞宏潘孝成安徽省霍邱县动物卫生监督所安徽霍邱237400 安徽省农科院畜牧兽医研究所安徽省畜禽疫病研究中心畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031

为了解六安地区猪细小病毒(PPV)感染和毒株变异情况,采用荧光PCR对2022年3~4月采集自六安地区11家规模猪场185份血清样本进行检测,并对阳性样本进行PPV VP2基因的扩增和分析。结果显示,当前六安地区猪群中PPV感染较为普遍,总体样本阳性... 详细信息

为了解六安地区猪细小病毒(PPV)感染和毒株变异情况,采用荧光PCR对2022年3~4月采集自六安地区11家规模猪场185份血清样本进行检测,并对阳性样本进行PPV VP2基因的扩增和分析。结果显示,当前六安地区猪群中PPV感染较为普遍,总体样本阳性率为23.2%(43/185),猪场感染率为45.45%(5/11),感染猪场的样品阳性率为10%~100%;自5家阳性猪场扩增的PPV VP2基因序列完全相同,与参考毒株均具有较高的序列同源性(94.8%~98.8%)和较近亲缘关系。本研究为六安地区猪细小病毒病防控提供了参考和依据。

关键词：猪细小病毒荧光PCR VP2基因序列分析

Diagnosis and Prevention of Colibacillosis in Chickens

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Animal Husbandry and Feed Science 2019年第5期11卷 149-152页

作者： shen xuehuai Zhang Danjun Zhao Ruihong Pan Xiaocheng Yin Lei Hu Xiaomiao Institute of Animal and Veterinary Science Anhui Academy of Agricultural SciencesHefei 230031China Livestock and Poultry Epidemic Disease Research Center of Anhui Province Hefei 230031China

The characteristics of chicken colibacillosis are introduced from the aspects of pathogen,epidemiology,clinical symptoms and necropsy,and clinical comprehensive diagnosis and laboratory diagnosis methods are *** disease is distinguished from diseases with similar symptoms such as chicken chlamydia,chicken streptococcus,chicken necrotic enteritis,broiler ascites syndrome and chicken paratyphoid ***,the preventive and therapeutic measures against the disease are put forward.

关键词： Chicken colibacillosis Pathogen Epidemiology Clinical symptoms Necropsy Diagnostic methods Prevention and control measures

Diagnosis and Prevention of Duck Virus Enteritis

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

Animal Husbandry and Feed Science 2019年第5期11卷 153-156页

作者： Pan Xiaocheng Zhao Ruihong shen xuehuai Yin Lei Zhang Danjun Da Yin Institute of Animal and Veterinary Science Anhui Academy of Agricultural SciencesHefei 230031China Livestock and Poultry Epidemic Disease Research Center of Anhui Province Hefei 230031China

The characteristics of duck virus enteritis(DVE)are introduced from the aspects of pathogen,epidemiology,clinical symptoms,autopsy pathological changes,etc.,and clinical comprehensive diagnosis and laboratory diagnosis methods are *** disease is distinguished from similar diseases including duck necrotic enteritis,duck candidiasis,duck hemorrhage,duck coccidiosis and duck vitamin A ***,the prevention and treatment measures of the disease are put forward.

关键词： Duck virus enteritis Pathogen Epidemiology Clinical symptoms Necropsy Diagnostic methods Prevention and control measures

猪圆环病毒3型和4型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

安徽农业大学学报 2023年第6期50卷 979-984页

作者：殷冬冬王洁茹尹磊沈学怀戴银赵瑞宏侯宏艳胡晓苗王桂军潘孝成安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽省畜禽疫病研究中心合肥230001 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室合肥230001 安徽农业大学动物科技学院合肥230036

为了建立一种快速检测猪圆环病毒3型(PCV3)和4型(PCV4)的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,根据Gen Bank已登录的PCV3和PCV4基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,经优化各反应条件,构建标准曲线,分析其敏感性、特异性和重复性,并... 详细信息

为了建立一种快速检测猪圆环病毒3型(PCV3)和4型(PCV4)的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,根据Gen Bank已登录的PCV3和PCV4基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,经优化各反应条件,构建标准曲线,分析其敏感性、特异性和重复性,并利用建立的荧光定量PCR方法对采自安徽省的临床样品进行检测,与普通PCR方法进行一致性评价。结果显示,PCV3的标准曲线为Y=–3.534 6 logX+41.11(R^(2)=1.00),PCV4的标准曲线为Y=–3.382 5 logX+40.67(R^(2)=1.00)。PCV3和PCV4的检测限分别为49.5和27.1 copies·μL^(-1)。对猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)无特异性扩增,组内和组间变异系数均<1%。临床样品检测结果显示,PCV3阳性检出率为40.8%,PCV4阳性检出率为20.4%,混合感染率为19.0%。建立了灵敏、特异,可同时快速、准确鉴别PCV3和PCV4的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,为PCV3和PCV4的检测和监测提供技术支撑。

关键词：猪圆环病毒3型猪圆环病毒4型 TaqMan 实时荧光定量PCR

禽源Klebsiella variicola引起宿主血流感染的SNP筛选分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2021年第4期41卷 676-682页

作者：尹磊沈学怀张丹俊赵瑞宏戴银胡晓苗周学利潘孝成安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽省畜禽疫病研究中心畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031

旨在筛选和分析禽源Klebsiella variicola引起宿主血流感染的转录组单核苷酸多态性(SNP)位点。采用转录组学测序(RNA-Seq)技术比较了Klebsiella variicola在LB肉汤培养基和SPF鸡血清中的转录组SNP,筛选出Klebsiella variicola在宿主血... 详细信息

旨在筛选和分析禽源Klebsiella variicola引起宿主血流感染的转录组单核苷酸多态性(SNP)位点。采用转录组学测序(RNA-Seq)技术比较了Klebsiella variicola在LB肉汤培养基和SPF鸡血清中的转录组SNP,筛选出Klebsiella variicola在宿主血清中生存和发展相关的SNP位点,对筛选出的SNP的碱基变异类型和所在位置类型进行注释分析,同时对筛选出的SNP位点对应的基因进行GO富集和KEGG通路富集分析,进一步探究其功能和涉及的生物信号通路;此外,随机选取7个位于富集通路中的基因,通过荧光定量PCR比较LB组与SPF血清组各基因mRNA转录水平。结果显示,相较于LB培养条件下,在血清中的Klebsiella variicola共获得143682个SNP位点,其中检测到单个碱基的转换(transition)有100790个,颠换(transversion)42890个,转换类型总数极显著高于颠换类型总数(P<0.01)。此外,对获得的SNP位点所在区域进行统计发现SNP主要集中在外显子区域(131093个)。筛选出的SNP位点对应的基因主要富集在ABC转运蛋白,二元调控系统,群体感应系统,脂多糖的生物合成等通路。荧光定量PCR结果表明相较于LB组,SPF血清组中的基因mRNA转录水平显著上调(P<0.01)。结果表明,本研究对禽源Klebsiella variicola在宿主血液环境中生存和发展的分子机制进行了初步分析和探索,为进一步研究Klebsiella variicola的致病机制提供理论依据。

关键词： Klebsiella variicola 血流感染 RNA-seq SNP位点

猪流行性腹泻病毒*** OmpA融合基因构建、表达及其免疫原性评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

养猪 2022年第3期 115-120页

作者：沈学怀汪洁茹尹磊周学利赵瑞宏潘孝成戴银殷冬冬张丹俊胡晓苗侯宏艳安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽省畜禽疫病研究中心安徽合肥230031 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031

为获得免疫原性更强的猪流行性腹泻病毒(PEDV)结构蛋白,试验将PEDV N蛋白基因和大肠杆菌(***)OmpA蛋白基因进行融合,采用柔性linker联接,得到OmpA-linker-PEDV N融合基因,并克隆至pCold I质粒,构建重组质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV N... 详细信息

为获得免疫原性更强的猪流行性腹泻病毒(PEDV)结构蛋白,试验将PEDV N蛋白基因和大肠杆菌(***)OmpA蛋白基因进行融合,采用柔性linker联接,得到OmpA-linker-PEDV N融合基因,并克隆至pCold I质粒,构建重组质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV N。重组质粒转入BL21感受态细胞,SDS-PAGE分析重组质粒的表达,并对其编码的融合蛋白进行二级和三级结构预测。Western-blot和ELISA分析融合蛋白的免疫原性。结果表明:构建了融合基因表达质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV N,表达了约88 ku的融合蛋白;融合蛋白的二级结构未发生明显变化,三级结构预测可折叠为正确的空间构像。该融合蛋白同时具有PEDV N蛋白和OmpA蛋白的免疫原性,并且其免疫原性显著高于单一PEDV N蛋白。说明试验获得了免疫原性较好的融合基因表达蛋白,可以为PEDV N蛋白功能研究、特异性抗体制备以及PEDV亚单位疫苗的研制提供材料和研究基础。

关键词： PEDV N基因 E.coli OmpA基因基因融合基因表达免疫原性