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Molecular cloning and transcriptional analysis of a NPY receptor-like in common Chinese cuttlefish Sepiella japonica

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Journal of Oceanology and Limnology 2018年第3期36卷 892-904页

作者： YANG Jingwen XU Yuchao XU Ke PING Hongling shi huilai LU Zhenming WU Changwen WANG Tianming National Engineering Research Center for Facilitated Marine Aquaculture Marine Science CollegeZhejiang Ocean UniversityZhoushan 316022China Marine Fisheries Research Institute of Zhejiang Province Zhoushan 316022China

Neuropeptide Y(NPY) has a pivotal role in the regulation of many physiological processes. In this study, the gene encoding a NPY receptor-like from the common Chinese cuttlefish Sepiella japonica( SjNPYR-like) was identified and characterized. The full-length SjNPYR-like cDNA was cloned containing a 492-bp of 5′ untranslated region(UTR), 1 182 bp open reading frame(ORF) encoding a protein of 393 amino acid residues, and 228 bp of 3′ UTR. The putative protein was predicted to have a molecular weight of 45.54 kDa and an isoelectric point(pI) of 8.13. By informatic analyses, SjNPYR-like was identified as belonging to the class A G protein coupled receptor(GPCR) family(the rhodopsin-type). The amino acid sequence contained 12 potential phosphorylation sites and five predicted N-linked glycosylation sites. Multiple sequence alignment and 3D structure modeling were conducted to clarify SjNPYR bioinformatics characteristics. Phylogenetic analysis identifies it as an NPYR with identity of 33% to Lymnaea stagnalis NPFR. Transmembrane properties of SjNPYR-like were demonstrated in vitro using HEK293 cells and the p EGFP-N1 plasmid. Relative quantifi cation of SjNPYR-like mRNA level confi rmed a high level expression and broad distribution of SjNPYR-like in various tissues of female S. japonica. In addition, the transcriptional profile of SjNPYR-like in the brain, liver, and ovary during gonadal development was analyzed. The results provide basic understanding on the molecular characteristics of SjNPYR-like and its potentially physical functions.

关键词： Sepiella japonica NPY receptor-like growth reproduction gene expression

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“上善若水”-昆山杜克大学生态景观设计

建筑学报 2018年第3期 94-100页

作者：时惠来林中杰未来都市规划建筑事务所苏州215021 夏洛特北卡罗莱纳大学建筑学院(美国)

论述了昆山杜克大学一期景观生态设计的理念,其设计利用基地多水的特点,将四季水位的变化纳入开放空间的设计中,形成分层式景观并带来空间个性的时空变化。基于大生态理念的设计把校园内的水体融合成一个连贯的生态系统,这个以水生态为... 详细信息

论述了昆山杜克大学一期景观生态设计的理念,其设计利用基地多水的特点,将四季水位的变化纳入开放空间的设计中,形成分层式景观并带来空间个性的时空变化。基于大生态理念的设计把校园内的水体融合成一个连贯的生态系统,这个以水生态为中心的项目在微观层面上为海绵城市的设计与实施提供了一个样本。

关键词：昆山杜克大学生态设计校园景观设计结合自然海绵城市

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论“新民主义”导引的思想教化运动

哈尔滨工业大学学报（社会科学版） 2000年第3期2卷 106-109页

作者：史会来夏潮哈尔滨工业大学黑龙江哈尔滨150001 中国人民大学北京100872

在抗战时期的华北沦陷区 ,“新民主义”是日伪统治者进行思想奴役的工具。以此为指导思想 ,“新民运动”演化为一系列具体的运动形态 ,并成为沦陷区社会教化的一大特点 ,也成为抗战时期中国思想领域的一个特有的现象 ,应当予以足够的重... 详细信息

在抗战时期的华北沦陷区 ,“新民主义”是日伪统治者进行思想奴役的工具。以此为指导思想 ,“新民运动”演化为一系列具体的运动形态 ,并成为沦陷区社会教化的一大特点 ,也成为抗战时期中国思想领域的一个特有的现象 ,应当予以足够的重视和研究。

关键词：新民主义新民运动思想教化

急性盐度胁迫对日本黄姑鱼肌肉组织转录组的影响

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水产学报 2021年第5期45卷 649-660页

作者：孟玮徐开达李振华史会来周永东浙江省海洋水产研究所浙江省海洋渔业资源可持续利用技术研究重点实验室农业农村部重点渔场渔业资源科学观测实验站

盐度是影响鱼类各种生理活动的重要环境因素,为探讨急性盐度胁迫对经济海水鱼类日本黄姑鱼基因表达水平的影响,实验基于Illumina HiSeq2500高通量测序平台,对不同盐度条件下日本黄姑鱼幼鱼肌肉组织进行转录组测序并开展生物信息学分析... 详细信息

盐度是影响鱼类各种生理活动的重要环境因素,为探讨急性盐度胁迫对经济海水鱼类日本黄姑鱼基因表达水平的影响,实验基于Illumina HiSeq2500高通量测序平台,对不同盐度条件下日本黄姑鱼幼鱼肌肉组织进行转录组测序并开展生物信息学分析。结果显示,高盐组、低盐组和对照组分别获得46 379 598、36 130 844和38 715 820条Clean reads,总碱基数分别为5.27、4.87和5.53 GB。经组装得到91 667条转录本,去冗余后拼接得到61 601条Unigenes。与对照组相比,高盐组和低盐组分别有2 230和1 377个差异Unigene上调,1 959和2 447个差异Unigene下调,随机选取6条差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,结果与转录组测序一致。通过对显著差异表达基因进行筛选,在高盐组和低盐组中分别发现21和41个差异表达基因与离子通道相关,共有的离子通道相关基因为15个,其中14个基因表达趋势一致。而在高盐组和低盐组发现的离子转运体基因分别为6和10个。GO功能富集分析发现,差异基因显著富集在蛋白酶体、补体激活方面,KEGG通路富集分析发现,差异基因富集在绑定、催化活性、信号传导和分解代谢等方面。研究表明,日本黄姑鱼对急性盐度胁迫的适应可能是一个涉及多组织和多基因的复杂过程,盐度变化能够影响肌肉组织的离子通道、离子转运体,蛋白降解和免疫系统功能。研究结果为今后深入开展日本黄姑鱼盐度适应的调控机制及养殖育种研究提供了参考。

关键词：日本黄姑鱼急性盐度胁迫肌肉转录组测序离子通道离子转运体

曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白1(Spef1)基因克隆以及组织表达特异性

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水产学报 2018年第8期42卷 1189-1198页

作者：周林李颖吕振明迟长凤吴常文史会来浙江海洋大学海洋科学与技术学院国家海洋设施养殖工程技术研究中心海洋生物种质发掘与利用国家地方联合实验室浙江省海洋水产研究所

为研究精子鞭毛蛋白1(Spef1)在精子鞭毛结构的形成与组装中的生物学意义及功能,本研究采用RACE技术和荧光定量PCR技术对曼氏无针乌贼Spef1(简称Sj Spef1)基因cD NA全长进行克隆和组织表达特异性分析。结果显示,SjS pef1 cD NA全长序列共... 详细信息

为研究精子鞭毛蛋白1(Spef1)在精子鞭毛结构的形成与组装中的生物学意义及功能,本研究采用RACE技术和荧光定量PCR技术对曼氏无针乌贼Spef1(简称Sj Spef1)基因cD NA全长进行克隆和组织表达特异性分析。结果显示,SjS pef1 cD NA全长序列共1 135 bp,5′和3′非编码区分别为178 bp和165 bp,预测的开放阅读框(ORF)全长792 bp。编码的蛋白理论分子量为30.567 7 ku,等电点7.03,是一种亲水性蛋白。不存在跨膜区以及信号肽序列,是在细胞内发挥作用的蛋白。二级结构分析发现该蛋白含有丰富的螺旋结构(49%)。氨基酸同源建模显示其蛋白的CH2结构域主要由4个螺旋结构组成,并由多个loop结构串联而成。同源氨基酸序列比对发现,它与加州双斑蛸的相似性最高且仅为59.49%,表明Spef1在进化中并不保守。基于Spef1氨基酸序列构建的系统进化分析表明,曼氏无针乌贼和加州双斑蛸进化关系最近。组织特异性分析表明Spef1在曼氏无针乌贼的精巢中有显著表达。Spef1基因的成功克隆以及组织表达特异性分析对于深入研究其细胞定位以及生物学功能具有重要意义。

关键词：曼氏无针乌贼 Spef1 cDNA 生物信息学荧光定量PCR

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盐度胁迫下曼氏无针乌贼的行为和生理响应

生态学报 2023年第19期43卷 8087-8098页

作者：朱岚倩张秀梅张宗航史会来郭浩宇浙江海洋大学水产学院舟山316022 汕头大学理学院广东省海洋生物技术重点实验室汕头515063 浙江省海洋水产研究所舟山316021

盐度变化会引起头足类动物渗透调节、免疫能力和激素分泌异常等一系列生理应激反应,同时还会引发应激诱导的喷墨行为等异常行为变化,最终可能导致头足类因渗透失衡出现大量死亡。结合头足类苗种繁育过程中因海水盐度波动出现的摄食及行... 详细信息

盐度变化会引起头足类动物渗透调节、免疫能力和激素分泌异常等一系列生理应激反应,同时还会引发应激诱导的喷墨行为等异常行为变化,最终可能导致头足类因渗透失衡出现大量死亡。结合头足类苗种繁育过程中因海水盐度波动出现的摄食及行为异常等问题,探究了盐度胁迫对曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)行为活跃性、组织结构、渗透调节以及免疫相关酶活性的影响,明确了其对盐度变化的应激反应及适应能力。结果显示:在高盐胁迫下曼氏无针乌贼的行为活跃性显著增加(P<0.05),且倾向于绕水槽壁游动;与21‰组相比,27‰组和33‰组肌肉、鳃和肝脏组织结构呈现较严重的损伤,15‰组的各组织结构无明显变化;随着盐度的升高,鳃中Na^(+)/K^(+)-ATP酶活性呈现先降低后升高趋势(P<0.05);33‰组脑中皮质醇含量显著高于其他处理组(P<0.05);盐度升高或降低均会导致鳃和肝脏中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性显著升高(P<0.05),丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量显著增加(P<0.05),溶菌酶(Lysozyme,LZM)活性显著降低(P<0.05)。综合分析认为,曼氏无针乌贼具有较好的耐低盐能力,高盐胁迫会引发其类焦虑行为。此外,在研究设定的15‰—33‰盐度范围内,盐度变化还会引起其渗透调节以及免疫相关酶活性的改变。研究结果为阐释头足类适应盐度波动的调节机理,控制适宜的养殖环境提供了参考依据。

关键词：曼氏无针乌贼盐度胁迫行为反应组织结构渗透调节免疫

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横带髭鲷精子超微结构及其生理特征

中国水产科学 2024年第3期31卷 257-265页

作者：林慧史会来张涛平洪领邹京华杨淑越浙江海洋大学海洋与渔业研究所浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室

为探究横带髭鲷(Hapalogenysmucronatus)精子形态和生理特性,以提高人工繁殖的受精率,利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察其精子结构,并设置不同梯度的盐度、pH和温度,探讨横带髭鲷精子快速运动时间、寿命与环境因子的关系。结果表... 详细信息

为探究横带髭鲷(Hapalogenysmucronatus)精子形态和生理特性,以提高人工繁殖的受精率,利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察其精子结构,并设置不同梯度的盐度、pH和温度,探讨横带髭鲷精子快速运动时间、寿命与环境因子的关系。结果表明:横带髭鲷精子由头部、中部和鞭毛3段组成,精子头部呈近球形或椭球形,头部直径为(1.56±0.05)μm,细胞核中染色质高度浓缩,核膜紧贴于质膜,无顶体;中段主要由袖套腔与中心粒复合体构成;鞭毛细长有侧鳍,为典型“9+2”微管结构。横带髭鲷精子的适宜盐度范围为22～28,盐度为26时精子寿命达到最大值425 s;适宜pH范围为7～10,在pH为7时,精子活力最强,精子寿命达到最大值430 s;适宜温度范围18～26℃,在水温为22℃时精子寿命最长,为427s。综上所述,建议横带髭鲷卵子和精子受精时的最佳水环境盐度为24～26、pH为7～8、温度为20～22℃。

关键词：横带髭鲷精子超微结构环境因子精子活力

来源：博看期刊

超越场地的多维度观察：昆山杜克花园的情境生成

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景观设计学（中英文） 2019年第5期7卷 108-119页

作者：时惠来林中杰陈嘉诚尹奕涵(翻译) Futurepolis未来都市规划建筑设计事务所宾夕法尼亚大学斯图尔特-韦茨曼设计学院不详

观察是阅读场地与启发设计的开始。当设计场地缺乏明显特征时,设计者不仅需要细致观察,同时也要跳出场地现状限制,通过研究拓展观察范围。这个过程包括对场地内在因素的思考,以及针对设计对象的核心内涵进行场景参照与延伸,形成情境的... 详细信息

观察是阅读场地与启发设计的开始。当设计场地缺乏明显特征时,设计者不仅需要细致观察,同时也要跳出场地现状限制,通过研究拓展观察范围。这个过程包括对场地内在因素的思考,以及针对设计对象的核心内涵进行场景参照与延伸,形成情境的模拟、选择与表达。江苏省昆山市杜克花园的场地现状属于典型中国城郊景观,缺乏明显的地理特征,这迫使设计师进行场所精神的深度挖掘。这样依托于情境生成的另类观察过程从三个角度入手:一是对同一脉络下异地先例的审视比较;二是对超越场地范围的区域生态开展地文学研究;三是从时间维度考察前期项目的效果及其与后期项目的关联性。这三个方面的观察使杜克花园的设计得以探索“花园”一词的当代精神内涵,最终表达为具体的设计形式。

关键词：杜克花园花园精神异地性地文学延时性情境观察与表达

厦门以南近岸海域表层沉积物中有机质和氮的初步研究

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热带海洋 1986年第3期 42-49页

作者：施文彬林惠来国家海洋局第三海洋研究所国家海洋局第三海洋研究所

海洋沉积物中的有机质和氮化合物都是生物的营养物。但是,如果沉积物中有机质和氮含量太高,也会产生底质富营养化问题。1961—1964年,笔者参加了福建省海岸带综合调查,对这些问题有了一定的认识。最近,参考了有关文献,写成本文。考虑到... 详细信息

海洋沉积物中的有机质和氮化合物都是生物的营养物。但是,如果沉积物中有机质和氮含量太高,也会产生底质富营养化问题。1961—1964年,笔者参加了福建省海岸带综合调查,对这些问题有了一定的认识。最近,参考了有关文献,写成本文。考虑到当初福建省的工农业生产水平还比较低,调查结果基本上可作为本区的环境基线值,供今后环境质量评价时对比之用。此外,本文对海洋化学、海洋地质、海洋生物和环境科学等研究也有一定的参考价值。

关键词：表层沉积物近岸海域富营养化问题总氮环境质量评价有机质含量农业生产水平海洋地质氮化合物海岸带