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香蕉凝集素基因启动子的分离、序列分析及鉴定

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生物工程学报 2006年第6期22卷 945-949页

作者：徐碧玉刘歌金志强中国热带农业科学院生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室海口571101

香蕉是世界上最重要的水果之一,由于香蕉果实是利用转基因方法生产重组药用蛋白或有价值的化合物的理想器官,构建能在香蕉果实中高水平表达异源蛋白质的表达载体是非常有意义的。而一个高效表达的载体,启动子则是其最重要元件之一,因此... 详细信息

香蕉是世界上最重要的水果之一,由于香蕉果实是利用转基因方法生产重组药用蛋白或有价值的化合物的理想器官,构建能在香蕉果实中高水平表达异源蛋白质的表达载体是非常有意义的。而一个高效表达的载体,启动子则是其最重要元件之一,因此,果实特异性表达启动子的获得是香蕉作为生物反应器的前提。香蕉凝集素是一种在香蕉果实中大量存在的蛋白质,其基因被证明在果肉组织中大量表达。利用染色体步移法克隆到香蕉凝集素基因5′端上游的一段长702bp的序列,经序列测定及软件分析表明,该序列具有典型的启动子结构。此序列置换植物表达载体pBI121的CaMV35s启动子,构建植物表达载体,命名为pBIL2,该启动子下游为gus基因。利用基因枪法转化香蕉的根、叶和果实薄片,对gus基因的瞬时表达进行测定,结果表明所获得的凝集素基因启动子,只在香蕉果肉中瞬时表达,该启动子的表达具有果实特异性,并且表达量较高。

关键词：香蕉香蕉凝集素基因启动子果实特异表达

蒙古冰草抗旱相关amo-miR5靶基因预测及表达载体构建

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基因组学与应用生物学 2018年第3期37卷 1302-1307页

作者：张旭婷刘旭婷马艳红于肖夏于卓内蒙古农业大学农学院

microRNA是植物体内普遍存在的非编码RNA，参与调控干旱、盐害、寒冷等多种逆境胁迫响应，是mRNA表达的关键调控因子之一。为研究蒙古冰草抗旱相关非保守amo—miR5的功能，本试验通过TargetFinder软件和在线PMTED数据库进行靶基因预测，... 详细信息

microRNA是植物体内普遍存在的非编码RNA，参与调控干旱、盐害、寒冷等多种逆境胁迫响应，是mRNA表达的关键调控因子之一。为研究蒙古冰草抗旱相关非保守amo—miR5的功能，本试验通过TargetFinder软件和在线PMTED数据库进行靶基因预测，用DNAstar MegAlign软件对预测得到的靶基因进行同源性分析，并构建***5表达载体。分析研究表明，预测到amo—miR5靶基因21个，有一部分靶基因功能与植物干旱胁迫有关，但大多功能未知；蒙古冰草的2个amo—miR5靶基因与小麦（Triticum aestivum）、水稻（Oryz0sati。曲、玉米（Zeamays）中预测的靶基因间相似性指数在19．3％～53％之间，同源性较低，推测与amo—miR5的非保守特异性有关。利用双酶切手段，切除pBI121载体中gus基因，连入amo—miR5前体，成功构建了以GaMV35s为启动子的表达载体pBI121-amo—miR5，为下一步遗传转化研究amo—miR5抗旱调控机理提供依据。

关键词：蒙古冰草抗旱相关microRNA 靶基因预测载体构建

杜仲胶合成相关基因EuREF 1的克隆及分析

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基因组学与应用生物学 2015年第5期34卷 917-925页

作者：王宇董旋赵德刚贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室贵阳550025 贵州大学绿色农药与农业生物工程国家重点实验室培育基地贵阳550025

根据本实验室已建立的杜仲转录组数据库提供的序列信息设计引物,以杜仲含胶组织叶和皮为材料提取总m RNA,采用RACE技术克隆了5'端700 bp和3'端600 bp c DNA片段,连接至p GEM-T载体,经测序拼接后获得全长1 075 bp的杜仲橡胶延长因子基因(... 详细信息

根据本实验室已建立的杜仲转录组数据库提供的序列信息设计引物,以杜仲含胶组织叶和皮为材料提取总m RNA,采用RACE技术克隆了5'端700 bp和3'端600 bp c DNA片段,连接至p GEM-T载体,经测序拼接后获得全长1 075 bp的杜仲橡胶延长因子基因(Eucommia ulmoides rubber elongation factor 1,Eu REF 1)c DNA序列,其中开放阅读框678 bp,共编码225个氨基酸残基。在NCBI中blastp比对,Eu REF 1与葡萄、蓖麻REF序列同源性分别为42%和41%;预测的蛋白质Eu REF 1氨基酸序列经blastp比对,显示该预测蛋白质序列属于REF超家族。本研究首次克隆杜仲的橡胶延长因子基因c DNA序列,构建了表达载体p sH-35s-Eu REF 1,通过农杆菌介导法对烟草长脖黄进行遗传转化,经PCR检测和gus组织染色,获得转基因烟草43株,移栽生长四个月的转基因烟草在表型上与野生型在叶片长宽比上有明显差异。

关键词：杜仲橡胶延长因子基因克隆

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药物气相色谱分析专家系统的柱系统推荐

武汉大学学报（自然科学版） 2000年第4期46卷 407-412页

作者：肖玉秀相秉仁安登魁武汉大学生命科学学院武汉430072 中国药科大学分析计算中心南京210009

报道了药物气相色谱分析柱系统推荐专家系统 .该系统可提供文献报道的 GC分析方法及文献出处 ;判断样品能否直接采用 GC分析 ,推荐固定相、柱温、固定液用量范围、检测器、载气等 ,并能对所推荐的色谱初始条件进行优化 .对固定相 ,系统... 详细信息

报道了药物气相色谱分析柱系统推荐专家系统 .该系统可提供文献报道的 GC分析方法及文献出处 ;判断样品能否直接采用 GC分析 ,推荐固定相、柱温、固定液用量范围、检测器、载气等 ,并能对所推荐的色谱初始条件进行优化 .对固定相 ,系统可分别从 3个通道给予推荐 ,且选择通道的优先顺序依次为特殊组分 (同系物 ,异构体 )、组分的 kováts指数以及组分的结构和极性 .本文以 Turbo Prolog为程序设计语言 ,采用产生式规则和谓词逻辑的知识表达方式以及深度优先搜索的正向链推理控制策略 ,在 IBM PC机上编程实现了这一系统 .

关键词：专家系统柱系统推荐气相色谱药物分析

AtGDPD-Like 6和AtGDPD-Like 7基因启动子表达特性及AtGDPD-Like 6蛋白定位

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北方园艺 2015年第11期 90-94页

作者：王崇程玉祥东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室黑龙江哈尔滨150040

以野生型(Col-0)拟南芥为试材,采用RT-PCR法,研究AtGDPDL6和AtGDPDL7基因组织表达特性。以ProAtGDPDL6::gus和ProAtGDPDL7::gus转基因拟南芥为试材,采用gus组织化学染色法,研究AtGDPDL6和AtGDPDL7基因启动子表达模式,并以Pro35s::AtGDPDL6-GFP转基因拟南芥为试材,采用激光共聚焦显微镜进行荧光观察,研究AtGDPDL6蛋白的细胞内定位。结果表明:AtGDPDL6基因在拟南芥花组织中特异表达;AtGDPDL7基因在花和角果中特异表达。AtGDPDL6和AtGDPDL7基因特异表达在拟南芥成熟的花粉囊和柱头中。AtGDPDL6蛋白定位于细胞膜和细胞壁区域。

关键词：拟南芥 GDPD-Like 表达模式蛋白定位

超声辅助提高长春花毛状根诱导效率及转基因毛状根构建

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植物研究 2018年第4期38卷 604-610页

作者：贾姗姗王燕燕于放大连工业大学生物工程学院大连116034

在不同菌种、不同诱导部位、不同培养基以及不同的诱导方法对长春花进行毛状根诱导基础上,尝试改变侵染用试剂以及超声辅助的新方法,通过比较毛状根诱导效率以及毛状根的形态差异,筛选最优的长春花毛状根诱导方法与条件,并建立转基因毛... 详细信息

在不同菌种、不同诱导部位、不同培养基以及不同的诱导方法对长春花进行毛状根诱导基础上,尝试改变侵染用试剂以及超声辅助的新方法,通过比较毛状根诱导效率以及毛状根的形态差异,筛选最优的长春花毛状根诱导方法与条件,并建立转基因毛状根体系。最终以C58C1为侵染用菌株,以无菌苗的叶片为外植体材料,1/2Ms培养基为诱导培养基,预培养时间为2天,使用共培养缓冲液侵染,5 s超声辅助为诱导最优的诱导方法,成功获得乳白色、较为浓密的、无向地性并且多分枝的毛状根,并应用此条件成功构建转gus基因的毛状根,为以后代谢调控途径相关基因的功能研究以及长春花中次生代谢产物合成的调控奠定基础。

关键词：长春花毛状根诱导发根农杆菌超声辅助 gus基因

水稻CDPK12基因启动子的表达模式及其逆境应答元件分析

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农业生物技术学报 2015年第10期23卷 1261-1272页

作者：张利娜刘瑜林拥军华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室及国家植物基因研究中心

水稻(Oryza sativa)是人类赖以生存的重要粮食作物之一,但是各种不利的环境条件严重影响水稻的生长发育,进而限制水稻的生产。深入研究植物启动子的结构、功能及作用模式,有助于进一步探索植物对其生长环境的适应机制以及创造优良的抗... 详细信息

水稻(Oryza sativa)是人类赖以生存的重要粮食作物之一,但是各种不利的环境条件严重影响水稻的生长发育,进而限制水稻的生产。深入研究植物启动子的结构、功能及作用模式,有助于进一步探索植物对其生长环境的适应机制以及创造优良的抗逆转基因水稻。V9703Q8E(calcium-dependent and calmodulin-independent protein kinases,CDPKs)是一类仅在植物和部分原生生物中存在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在介导植物生长发育信号和逆境信号转导中具有重要作用。本研究主要对Os CDPK12的表达及其启动子区域顺式调控元件进行了分析。首先通过PCR技术从粳稻(Oryza sativa ***)品种日本晴基因组上克隆到Os CDPK12上游2 109 bp的启动子区域,命名为12P,将其融合报告基因β-glucuronidase(gus),转化粳稻品种中花11,组织化学染色结果显示主要在根茎过渡区、茎节、花药、种子中表达;之后对该启动子进行5’端缺失分析,构建8个融合报告基因gus的缺失载体,对其转基因水稻植株的研究发现,除12P687外,各个缺失启动子均能驱动gus基因在根茎过渡区、幼穗花药、枝梗、茎节、种子中表达,而在叶、叶鞘和根中不表达,12P687却能驱动gus基因在各个组织中表达,表现为组成型表达的特征。对比分析不同缺失启动子转基因植株各组织的染色结果,可以看出,在-966~-687 bp区域,存在关键的负调控元件;-687~-472 bp区域,具有正向调控的顺式作用元件。gus活性的定量测定结果显示,12P687启动子在叶和叶鞘组织中的活性约为35s启动子活性的1/2,而根中12P687启动子的活性约为35s启动子活性的1/3。此外,还对不同缺失启动子的转基因植株进行了低温、低氮和高盐胁迫处理,发现12P1828的转基因材料经冷胁迫后在叶片中表达上升,而12P687的转基因材料经高盐胁迫后在根中表达下降。本研究鉴定出12P驱动下游靶基因的表达特征及潜在的重要调控元件,并初步验证Os CDPK12基因的表达受低温和高盐调控,为今后抗逆转基因水稻的培育及基因功能研究工作提供参考。

关键词：水稻逆境胁迫启动子表达模式逆境应答元件

慢性阻塞性肺疾病呼吸衰竭合并肺部真菌感染患者预后的影响因素分析

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临床合理用药杂志 2016年第15期9卷 5-6页

作者：韦玉萍广西南宁市第八人民医院 530001

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)呼吸衰竭合并肺部真菌感染患者预后的影响因素。方法选取南宁市第八人民医院2013年5月—2015年6月诊治的COPD呼吸衰竭合并肺部真菌感染后死亡患者45例作为观察组,选取同期COPD呼吸衰竭合并肺部感染未死... 详细信息

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)呼吸衰竭合并肺部真菌感染患者预后的影响因素。方法选取南宁市第八人民医院2013年5月—2015年6月诊治的COPD呼吸衰竭合并肺部真菌感染后死亡患者45例作为观察组,选取同期COPD呼吸衰竭合并肺部感染未死亡患者45例作为对照组,采取单因素Logistic回归和多因素Logistic回归分析筛选COPD呼吸衰竭合并肺部真菌感染患者预后的影响因素。结果单因素Logistic回归分析结果显示,年龄、病程、机械通气、吸烟、两种及以上器官功能衰竭、两种及以上真菌感染、抗生素联合应用和低蛋白血症与COPD呼吸衰竭合并肺部真菌感染患者预后有关(Pstic回归分析结果显示,病程、两种及以上器官功能衰竭、抗生素联合应用以及低蛋白血症与COPD呼吸衰竭合并肺部真菌感染患者预后有关(P<0.05)。结论病程迁延、两种及以上器官功能衰竭和低蛋白血症为COPD呼吸衰竭合并肺部真菌感染患者死亡的危险因素,而抗生素联合应用为保护因素,早期预防控制上述危险因素可降低病死率,改善患者预后。

关键词：肺疾病,慢性阻塞性呼吸功能不全肺疾病,真菌性影响因素分析

苹果赤霉素氧化酶基因MdGA2ox8的克隆及功能分析

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中国农业科学 2018年第22期51卷 4339-4351页

作者：李飞鸿侯应军李雪涵余心怡渠慎春南京农业大学园艺学院

【目的】从‘苏帅’苹果(Malus domestica)中分离克隆赤霉素氧化酶基因MdGA2ox8的开放阅读框(ORF),分析其序列特征及在苹果中的组织表达特异性,通过在烟草中过表达MdGA2ox8研究其对烟草生长发育的影响,为该基因功能分析及应用提供理论... 详细信息

【目的】从‘苏帅’苹果(Malus domestica)中分离克隆赤霉素氧化酶基因MdGA2ox8的开放阅读框(ORF),分析其序列特征及在苹果中的组织表达特异性,通过在烟草中过表达MdGA2ox8研究其对烟草生长发育的影响,为该基因功能分析及应用提供理论参考。【方法】采用RT-PCR方法从苹果中克隆出MdGA2ox8的ORF区。利用NCBI、DNAMAN和Pfam在线软件进行氨基酸序列比对和保守结构域分析;利用Expasy在线软件对MdGA2ox8氨基酸组成、分子量、等电点进行分析;利用signalP和TMHMM server V.2.0分别在线分析蛋白质的信号肽和预测蛋白质的跨膜结构域;利用MEGA 7.0软件构建系统进化树。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测MdGA2ox8在苹果不同组织中的表达量。构建MdGA2ox8过表达载体,采用农杆菌介导的遗传转化技术将MdGA2ox8导入烟草中,获得具有潮霉素抗性的转基因烟草植株,通过gus染色、基因组PCR和RT-PCR鉴定转基因阳性植株;将野生型和转基因烟草移栽后,在第一朵花开放时测定转基因烟草的株高、节间长度和叶片长宽比以及烟草叶片叶绿素含量,激素GA1和GA4含量,并通过RT-qPCR方法分析烟草中相关基因的表达水平。【结果】成功克隆并获得了长为1 122 bp的MdGA2ox8 ORF区,编码373个氨基酸残基,蛋白相对分子质量为42.8 kD,理论等电点为5.44,不稳定系数为49.73,具有GA2ox的保守结构域DIOX和20G-Fellxy,但无明显疏水区,无跨膜区,无信号肽,为非分泌蛋白。序列系统进化分析结果显示MdGA2ox8与白梨GA2ox8亲缘关系最近。RT-qPCR结果表明,MdGA2ox8在苹果各组织中差异表达,在花中的表达量最高,其次为老叶>幼叶>韧皮部,在木质部和幼果中几乎不表达。将MdGA2ox8转入模式植物烟草中,获得了5个转基因阳性株系。与野生型相比,过表达MdGA2ox8烟草植株GA4含量降低,GA1含量有所升高,其中野生型和转基因烟草GA1平均含量分别为1.26和1.75 ng·g-1,GA4平均含量分别为5.43和1.07 ng·g-1。与野生型相比,转基因烟草植株GA1和GA4总含量降低,使植株节间缩短、矮化以及花期推迟,其中野生型和转基因烟草植株平均高度分别为38.50和7.36 cm,节间长度分别为9.5和3.3 cm;转基因烟草叶片颜色深绿,叶片长宽比降低。烟草内源赤霉素合成途径相关基因NtGA3ox1和NtGA3ox2的表达水平受MdGA2ox8的正反馈调节。【结论】获得苹果赤霉素氧化酶基因MdGA2ox8的开放阅读框,MdGA2ox8具有组织表达差异性。MdGA2ox8过表达烟草植株中GA1和GA4总含量降低,导致植株节间长度缩短、植株矮化。

关键词：苹果赤霉素氧化酶矮化 MdGA2ox8 过表达烟草