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In vitro culture and differentiation of rat embryonic midbrain-derived neural stem cells

Neural Regeneration Research 2008年第11期3卷 1241-1244页

作者： Xingli Deng ruen liu Zhongtang Feng Jing Guo Wu Wang Deqiang Lei Hongyan Li Zhihua Chen Department of Neurosurgery First Affiliated Hospital of Kunming Medical College Kunming Department of Neurosurgery China-Japan Friendship Hospital Beijing 100029 China Department of Radiology China-Japan Friendship Hospital Beijing 100029 China Department of Neurosurgery Affiliated Union Hospital of Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology Wuhan 430022 Hubei Province China Clinical Medicine Research Institute China-Japan Friendship Hospital Beijing 100029 China

BACKGROUND： Midbrain-derived neural stem cells （mNSCs） can differentiate into functional mature dopaminergic neurons. The mNSCs are considered the ideal choice for cell therapy of Parkinson＇s disease. OBJECTIVE： To isolate rat embryonic mNSCs and to observe the differentiation characteristics of mNSCs induced by cell growth-promoting factors. DESIGN, TIME AND SETTING： An in vitro cell culture study based on the molecular biology of nerve cells was carried out at the Institute of Clinical Medicine, China-Japan Friendship Hospital （China） from March to November 2007. MATERIALS： Sprague Dawley rats at embryonic day 14 were used in this study. Nestin antibody, β-Ⅲ tubulin antibody, glial fibrillary acidic protein （GFAP） antibody and cyclic nucleotide 3＇-phosphohydrolase （CNPase） antibody were provided by Abcam; DMEM/F12 medium and N2 supplement were provided by Invitrogen; epidermal growth factor （EGF） and fibroblast growth factor-2 （FGF2） were provided by R＆D Systems. METHODS： The ventral mesencephalon was dissected from embryonic day 14 rat embryos. By trypsin digestion and mechanical separation, the brain tissue was triturated into a fine single-cell suspension. The cells were cultured in 5 mL serum-free medium containing DMEM/FI 2, 1% N： supplement, 20 ng/mL EGF and FGF2. The mNSCs at the third generation were coated with 10ug/mL polylysine and induced to differentiate in the DMEM/F12 supplemented with 1% fetal bovine serum and 1% N2. MAIN OUTCOME MEASURES： The neural spheres of the third passage were identified by nestin immunofluorescence; at the same time, the cells were induced to differentiate, and the types of differentiated cell were identified by immunofluorescence for β Ⅲ tubulin, GFAP and CNPase. RESULTS： Seven days after primary culture, a great many neurospheres could be obtained by successive pasage. Immunofluorescence assays showed that the neurospheres were nestin positive, and after differentiation, the cells expressed GFAP, CNPase and β -Ⅲ-tubulin.

关键词： neural stem cells cell differentiation in vitro rat embryonic midbrain

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A New Method for Predicting Intracerebral Hematoma Expansion:Volume Difference Measured by ABC/2 and Slicer Software

A New Method for Predicting Intracerebral Hematoma Expansion...

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第十三届中国医师协会神经外科医师年会

作者： Wu Gang liu ruen Department of Neurosurgery Peking University People’s Hospital

Back ground:Intracerebral hemorrhage has a tendency to enlarge over the time course of *** predicting the enlargement of hematoma is not easy,but significantly helpful for clinical management of the *** study is aimed to provide a new method to predict hematoma ***:Initial CT scan images of 128 patients with spontaneous intracerebral hematoma were *** volumes were measured with ABC/2 method and 3 D slicer *** difference of hematoma volume evaluated by the two methods was used to predict hematoma expansion in two criterions（≥6.0 cm3 growth;≥12.5 cm3 growth）,compared to hematoma shape ***:The hematoma volume initially measured by ABC/2 and 3 D slicer was 21.4±16.4 cm3,17.7±14.0 cm3 *** hematoma volume measured by ABC/2 method was bigger than that by 3 D slicer（t=11.869,P＜0.001）.The hematoma volume difference measured by the two methods was correlated with the volume of hematoma growth in different hematoma shape groups respectively（R=0.628,R=0.603 and R=0.591）.The area under curve of volume difference is significantly bigger than that of hematoma shape categories in two situations（hematoma expansion,≥6.0 cm3,P=0.027;≥12.5 cm3,P=0.020）.Conclusions:Comparing to hematoma shape categories,the difference of volume measured by ABC/2 and 3 D slicer could better predict the hematoma expansion.

关键词： intracerebral hemorrhage hematoma expansion hematoma shape category 3D slicer

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Safety and feasibility of low-dose fluorescein-guided resection of glioblastoma

Safety and feasibility of low-dose fluorescein-guided resect...

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第十四届中国医师协会神经外科医师年会

作者： Cungang FAN ruen liu Yilin JIANG Guangyong WU Gang Wu Bo liu Jingru ZHOU Feng Jiao Department of Neurosurgery Peking University People’s Hospital

Background The extent of resection is an independent predictor of prognosis in patients with glioblastomas. Although fluorescein sodium may enhance intraoperative visualization of tumor margin and increase the extent of glioblastoma, the dose related anaphylactic reaction is still a major concern. In the present study, we used allergy skin testing to exclude the patients susceptible to anaphylaxis preoperatively, and then investigated the feasibility of low-dose fluorescein sodium to guide glioblastoma resection intraoperatively, thereby to improve the safety of fluorescein-guided glioma resection. Methods Patients with suspected glioblastoma based on brain MRI were subjected to allergy skin intradermal tests for fluorescein sodium preoperatively. Only those with negative allergy skin tests received intravenous injection of low dose fluorescein sodium（1-2 mg/kg） during microsurgical tumor resection under dedicated Yellow 560 filter. The degree of fluorescent staining was documented and the extent of resection was evaluated by MRI scan. Results One patient with positive allergy skin test was excluded from fluorescein sodium administration and no anaphylactic reaction was found during fluorescein sodium guided surgery in the patients who were negative for allergy skin tests. The low dose fluorescein sodium（1-2 mg/kg） could provide enough visualization of tumors with sufficient discrimination from surrounding normal brain tissue and improve the resection extent of glioblastoma. Conclusion Preoperative allergy skin test is a useful method to exclude the patients susceptible to anaphylaxis, together with intraoperative low dose fluorescein sodium administration, may facilitate glioblastoma resection by fluorescence guidance while avoid safety concern of dose-related anaphylaxis.

关键词： Fluorescein sodium glioblastoma glioma allergy skin test anaphylaxis Yellow 560

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咀嚼肌痉挛的诊疗研究进展

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中华神经医学杂志 2022年第2期21卷 211-216页

作者：张子豪刘如恩北京大学人民医院神经外科北京100044

咀嚼肌痉挛(HMS)是一种罕见的由三叉神经运动支功能异常导致咀嚼肌功能紊乱的疾病,与面肌痉挛在症状上相似,但更为罕见,国际范围内迄今仅有数十余例报道。目前,HMS的病因尚未完全明确,其中三叉神经运动支受深部组织或血管压迫导致的脱... 详细信息

咀嚼肌痉挛(HMS)是一种罕见的由三叉神经运动支功能异常导致咀嚼肌功能紊乱的疾病,与面肌痉挛在症状上相似,但更为罕见,国际范围内迄今仅有数十余例报道。目前,HMS的病因尚未完全明确,其中三叉神经运动支受深部组织或血管压迫导致的脱髓鞘病变是学者们普遍接受的观点。笔者现围绕HMS的病因、临床表现、诊断及鉴别诊断、治疗方案等诊疗相关方面的研究进展进行综述,以期为临床医生更好地鉴别、诊疗该病提供思路。

关键词：咀嚼肌痉挛临床表现微血管减压术

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Meige综合征的治疗进展

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中华神经医学杂志 2019年第11期18卷 1180-1183页

作者：郑文韬刘如恩北京大学人民医院神经外科北京100040

Meige综合征是一种罕见的节段性颅颈部肌张力障碍疾病,以眼睑痉挛和口下颌、颈部肌肉不自主收缩为主要临床表现,严重影响患者生活质量。目前常用治疗方法包括药物治疗、A型肉毒杆菌毒素局部注射和手术治疗。本文围绕Meige综合征的发病... 详细信息

Meige综合征是一种罕见的节段性颅颈部肌张力障碍疾病,以眼睑痉挛和口下颌、颈部肌肉不自主收缩为主要临床表现,严重影响患者生活质量。目前常用治疗方法包括药物治疗、A型肉毒杆菌毒素局部注射和手术治疗。本文围绕Meige综合征的发病机制、临床表现及治疗方法综述如下。

关键词： Meige综合征肌张力障碍肉毒杆菌毒素脑深部电刺激术

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芍药苷调控转化生长因子-β抑制神经胶质瘤U87细胞间质化改变的分子机制

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中华行为医学与脑科学杂志 2017年第9期26卷 769-774页

作者：刘志王兆涛刘如恩江西省人民医院神经外科南昌330006 南方医科大学附属八一脑科医院广州510515 北京大学人民医院神经外科北京100044

目的探讨芍药苷对人神经胶质瘤U87细胞上皮间质转化和迁移侵袭的作用及其分子机制。方法不同浓度芍药苷分别加入培养基中处理胶质瘤U87细胞，CCK-8法检测芍药苷对胶质瘤细胞增殖的影响，用携带转化生长因子-β（TGF—β）慢病毒感染胶质... 详细信息

目的探讨芍药苷对人神经胶质瘤U87细胞上皮间质转化和迁移侵袭的作用及其分子机制。方法不同浓度芍药苷分别加入培养基中处理胶质瘤U87细胞，CCK-8法检测芍药苷对胶质瘤细胞增殖的影响，用携带转化生长因子-β（TGF—β）慢病毒感染胶质瘤U87细胞，建立稳定过表达TGF-B的U87细胞，划痕实验测量细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，Westernblot检测相关蛋白表达量的变化。结果芍药苷浓度为5mmol／L和10mmol／L时，细胞存活率分别为（96．00±3．61）％和（92．33±4．04）％，细胞增殖未受明显抑制（P5=0．593，P10=0．284），浓度为15mmol／L时，存活率为（75．67±4．58）％，细胞增殖能力明显下降（P=0．008）。在芍药苷浓度为5mmol／L和10mmol／L时，划痕愈合率分别为（68．20±4．39）％、（37．70±7．01）％，与0mmol/L组相比，差异有统计学意义（P5=0．005，P10=0．0003）；同时，在0mmol／L、5mmol／L和10mmol／L时，平均每视野侵袭细胞数分别为（237．67±24．00）个、（130．67±32．65）个、（59．67±18．15）个，与对照组相比，差异有统计学意义（P5=0．002，P10〈0．01）。另外芍药苷下调了神经胶质瘤U87细胞上皮间质转化和迁移侵袭相关蛋白的表达（P〈0．05），慢病毒感染过表达TGF-β逆转了芍药苷对神经胶质瘤U87细胞迁移侵袭和上皮间质转化的影响。结论芍药苷抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭，与芍药苷下调TGF-β抑制神经胶质瘤细胞的间质化改变有关。

关键词：芍药苷上皮间质转化转化生长因子-β

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芍药苷抑制血管内皮细胞迁移侵袭和血管生成及其机制

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中华实验外科杂志 2018年第2期35卷 264-267页

作者：刘志王兆涛刘如恩江西省人民医院神经外科南昌330006 南方医科大学广州510515 北京大学人民医院神经外科 100044

目的探讨芍药苷对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）迁移侵袭和血管生成的影响，以及与c-Met受体和下游分子的关系。方法用含10%胎牛血清的内皮细胞培养基（ECM）体外培养HUVEC细胞，并且加入20 ng/ml肝细胞生长因子（HGF）。用0、5、10、15、2... 详细信息

目的探讨芍药苷对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）迁移侵袭和血管生成的影响，以及与c-Met受体和下游分子的关系。方法用含10%胎牛血清的内皮细胞培养基（ECM）体外培养HUVEC细胞，并且加入20 ng/ml肝细胞生长因子（HGF）。用0、5、10、15、20 mmol/L芍药苷分别处理细胞，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测芍药苷对细胞的毒性作用。Lipofectamine？ 3000转染c-Met质粒，Transwell法观察细胞的迁移侵袭能力，血管生成实验检测细胞血管生成的作用，Western blot检测相关蛋白表达量的变化。结果当芍药苷浓度为15mmol/L时抑制HUVEC细胞的增殖（76.667±7.506，P＝0.000）。5、10mmol/L芍药苷可以抑制HUVEC细胞的迁移侵袭（249.333±42.360，P5＝0.001；97.667±21.032，P10＝0.000）和血管生成（12.667±1.528，P5＝0.001；6.333±1.528，P10＝0.000），抑制c-Met（0.833±0.702，P＝0.000）及其下游分子磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）（0.420±0.030，P＝0.000；0.370±0.050，P＝0.000；0.730±0.121，P＝0.001）和P70S6K的磷酸化（0.420±0.061，P＝0.000），并降低VEGF的表达（0.317±0.031，P＝0.000）。转染c-Met质粒后，HUVEC细胞c-Met表达量明显升高（0.793±0.045，P＝0.001），并且芍药苷抑制HUVEC细胞的侵袭迁移（269.000±18.520，P＝0.000）、血管生成（20.667±1.528，P＝0.000），抑制c-Met（0.387±0.067，P＝0.003）及下游通路的作用被逆转（PI3K：0.677±0.046，P＝0.000；Akt：0.577±0.055，P＝0.000；mTOR：0.543±0.078，P＝0.001；P70S6K：0.433±0.090，P＝0.000），降低VEGF的表达（0.763±0.042，P＝0.001）。结论芍药苷通过c-Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制HUVEC细胞的迁移侵袭，并调节VEGF的表达，从而使HUVEC细胞的血管生成减少。

关键词：芍药苷人脐静脉内皮细胞血管生成侵袭迁移

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显微血管减压治疗椎基底动脉相关性三叉神经痛

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中国微创外科杂志 2017年第10期17卷 930-932页

作者：向晖冷景兴刘如恩江西省人民医院神经外科南昌330006

目的探讨原发性三叉神经痛显微血管减压(microvascular decompression,MVD)术中对以椎基底动脉为责任血管或主要责任血管的处理方法。方法回顾性分析2008年10月~2016年6月我院28例以椎基底动脉为责任血管或主要责任血管的原发性三叉神... 详细信息

目的探讨原发性三叉神经痛显微血管减压(microvascular decompression,MVD)术中对以椎基底动脉为责任血管或主要责任血管的处理方法。方法回顾性分析2008年10月~2016年6月我院28例以椎基底动脉为责任血管或主要责任血管的原发性三叉神经痛患者行MVD的临床资料。行MVD 25例,MVD+感觉根部分离断3例。结果 28例术后疼痛均立即消失。3例行MVD+感觉根部分离断者术侧面部麻木。随访3~24个月,平均18.6月,无复发。结论对于以椎基底动脉为责任血管或主要责任血管的原发性三叉神经痛,MVD术中充分神经减压并恢复神经的自然走行是术后疗效的保证,对于张力大、无法一次性推移的血管,可以采用多点减压的方法完成。

关键词：原发性三叉神经痛显微血管减压术椎基底动脉多点减压

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2019年CNS《成人脑转移瘤新型及试验性疗法的循证指南》解读

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肿瘤防治研究 2020年第2期47卷 124-128页

作者：汤韫钰范存刚刘如恩北京大学人民医院神经外科北京100044

脑转移瘤是成人最常见的颅内肿瘤之一。美国神经外科医师大会(Congress of Neurological Surgeons,CNS)曾于2010年发布《脑转移瘤治疗的循证医学指南》,为脑转移瘤的规范化治疗奠定了基础。基于近年来新型疗法的进展,该学会在原指南基础... 详细信息

脑转移瘤是成人最常见的颅内肿瘤之一。美国神经外科医师大会(Congress of Neurological Surgeons,CNS)曾于2010年发布《脑转移瘤治疗的循证医学指南》,为脑转移瘤的规范化治疗奠定了基础。基于近年来新型疗法的进展,该学会在原指南基础上,回顾分析最新文献,制定了2019版《成人脑转移瘤治疗中新兴及试验性疗法的系统回顾和循证指南》,对高强度聚焦超声、激光间质热疗、放射增敏、免疫调节、分子靶向药物等新型治疗方法进行了讨论。本文将就新指南作一介绍和解读。

关键词：成人脑转移瘤放射增敏剂局部治疗免疫调节剂分子靶向药物

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微血管减压术治疗原发性三叉神经痛经验总结

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中华神经医学杂志 2017年第11期16卷 1167-1168页

作者：向晖冷景兴刘如恩江西省人民医院神经外科南昌330006 北京大学人民医院神经外科北京100044

原发性三叉神经痛是面部三叉神经分布区内短暂的、反复发作的阵发性剧痛，又称痛性抽搐。其病因目前尚无一致意见．但神经血管压迫学说已得到大多数学者的认同。

关键词：三叉神经痛微血管减压术责任血管

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