检索结果-南通市图书馆

作者： roselyn tehzee gblinwon 江苏大学

学位级别：硕士

角类动物药为中医临床常用中药种类。鹿(Cervids)为偶蹄目哺乳动物,梅花鹿、马鹿、驯鹿和水鹿是四个常见的鹿科物种,主要生活和分布在亚洲。鹿角的发育受多种环境的调节,因此每种鹿的角都有自己独特的形状和大小。中药鹿角为鹿科动物梅... 详细信息

角类动物药为中医临床常用中药种类。鹿(Cervids)为偶蹄目哺乳动物,梅花鹿、马鹿、驯鹿和水鹿是四个常见的鹿科物种,主要生活和分布在亚洲。鹿角的发育受多种环境的调节,因此每种鹿的角都有自己独特的形状和大小。中药鹿角为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervus elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角,具有较高的经济和治疗价值,可用于增强患者肾功能、强健骨骼、促进骨髓、补充血液。它也被用来治疗其他症状,如肢体不适和四肢寒冷,这对从手术中恢复的人很有益处。附着在头骨上的整个鹿角的大小和形状,传统上被用来识别鹿的种类,但是经过加工的鹿角商品则较难鉴定。因此,中国鹿角行业最常见的困难之一就是用较便宜的鹿角进行欺诈替代或贴错标签,给消费者带来了较高的健康风险。因此,需要不断发展遗传和蛋白质标记并建立相关检验技术来区分真鹿角和假鹿角。在本论文研究中,利用多种方法如DNA序列和基于PCR的技术,开发了一种用于识别假冒鹿角的分子鉴定方法,这可能用于一些假冒鹿角产品的特异快速识别。利用SDS-PAGE电泳、BCA法对不同蛋白及蛋白含量进行分析,结果显示加工后的鹿角的SDS-PAGE图谱中有多条明显的蛋白条带。进一步分析氨基酸含量,发现马鹿鹿角中含有丰富的氨基酸。目前,大约19种氨基酸和8种必需氨基酸已被确定。此外,经过加工的鹿角、羚羊角产品有5种氨基酸,其中脯氨酸含量最高,甘氨酸的含量次之,丝氨酸含量则是最低的。加工产物中总氨基酸的平均含量分别为60.1%和40%。本研究的主要内容如下:1.羚羊角的PCR扩增鉴定首先用Oligo和DNAMAN软件设计14对部分引物,对羚羊角及其伪品绵羊角、山羊角基原的DNA模板进行PCR扩增后,根据目标条带的存在和亮度选择3对引物。优化了PCR扩增条件和反应体系,最终实现了商品羚羊角的鉴定。在最佳PCR条件下,观察引物ST-1、OA-3、CH-1的浓度对扩增的影响。结果表明,当浓度为0.2μM、0.3μM和0.02μM,循环数为34,退火温度为60℃时,扩增效果良好,PCR反应特异性好,引物之间无交叉反应。此外,扩增产物的双向测序结果与基因数据库高度匹配,说明扩增条件可靠。此外,当退火温度较低时,三组引物表现出不同程度的非特异性扩增。随着退火温度的升高,引物表现出不同程度的非特异性升高。此后,利用建立的特异性引物扩增技术对市场上的羚羊角镑片和羚羊角粉进行鉴定。结果表明,在市售的8批羚羊角加工制品中,有2批羚羊角产品经引物PST扩增出目的DNA片段,鉴定为正品;其余六批则经引物POA和PCH扩增后鉴定为伪品基原绵羊和山羊。可见,羚羊角假冒产品比例高于35%。2.鹿角的DNA分子鉴定基于物种特异性引物扩增,建立了特异性强的鹿角鉴定技术。利用DNAMAN和Oligo软件设计鹿角及其伪品DNA扩增引物。根据目标条带的明暗程度选择3对引物PC、PRT和PRU。然后优化PCR扩增条件,考察特异性和敏感性,最后利用建立的检测方法鉴定商品鹿角的真伪。其次,在优化PCR条件下,即循环数是33,引物PC、PRT和PRU的浓度分别为0.2μM、0.4μM和0.2μM,退火温度分别为64℃、62℃和60℃,PCR反应的特异性良好,引物之间没有交叉反应。此外,扩增产物的双向测序结果与基因数据库高度匹配,说明扩增条件可靠。当退火温度较低时,三组引物表现出不同程度的非特异性扩增。此外,这种技术可以用来识别鹿角中的掺伪品,采用所建立的特异性引物扩增技术对市场上的鹿茸片和鹿茸粉进行了鉴定。结果表明,在14批市售鹿角加工制品中,引物PC扩增出鹿角目的DNA片段仅有8批,鉴定为鹿角真品,其余6批则为鹿角伪品驯鹿角。同时未发现这些商品经PRU扩增后有条带,说明无水鹿角仿冒品。可见,鹿角假冒产品所占比例约为40%。3.鹿角和鹿茸蛋白质的SDS-PAGE分析本章探讨基原动物在不同时期采收的同一药用部位中蛋白质的组成。实验结果表明,鹿茸的蛋白质比鹿角丰富。在SDS-PAGE蛋白图谱中,鹿角蛋白分布在14.4 kd～116 kd之间,鹿茸有4条蛋白条带I:70.2 kd,II:66.5 kd,III:45 kd,IV:18.4 kd,而鹿角中有两条清晰条带A:62 kd和B:662 kd,另一条C:18.4 kd则不甚明确,这些蛋白带可以用来区分两者。此后,对3批鹿茸和5批鹿茸的蛋白进行SDS-PAGE分析,发现鹿茸饮片中有2批具有鹿茸蛋白条带分布特征,1批符合鹿角蛋白SDS-PAGE图谱特征。它为经过专业处理的深度加工动物药产品的质量控制提供了科学依据,而且新策略为动物类天然药物的安全性和有效性提供了有力保障。4.BCA法测定鹿角和鹿角的蛋白质含量采用BCA法测定并比较了鹿角和鹿茸的蛋白质含量;结果显示,不同批次鹿角和鹿茸的蛋白质含量存在一定差异,蛋白质含量为30.26%～49.29%;总的来说,

关键词：鹿角羚羊角聚丙烯酰胺凝胶电泳聚合酶链反应高效液相色谱法

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鹿角与鹿茸蛋白质鉴定

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中成药 2022年第6期44卷 1859-1864页

作者：杨欢 roselyn tehzee gblinwon 杨娅娅王强陈香卢梦瑶郑晗雪吴沅臻夏国华沈玉萍江苏大学药学院江苏镇江212013 镇江市食品药品监督检验中心江苏镇江212050

目的鉴定鹿角与鹿茸蛋白质。方法通过SDS-PAGE、2-DE分析鹿角与鹿茸蛋白质组成,比较两者电泳图谱,找出各自稳定的蛋白质条带或斑点及其差异。将两者SDS-PAGE蛋白质条带以胰蛋白酶进行胶内消化后,采用MALDI-TOF/TOF质谱分析,通过MASCO... 详细信息

目的鉴定鹿角与鹿茸蛋白质。方法通过SDS-PAGE、2-DE分析鹿角与鹿茸蛋白质组成,比较两者电泳图谱,找出各自稳定的蛋白质条带或斑点及其差异。将两者SDS-PAGE蛋白质条带以胰蛋白酶进行胶内消化后,采用MALDI-TOF/TOF质谱分析,通过MASCOT检索匹配以鉴定蛋白质。结果在SDS-PAGE图谱中,鹿角在约75、66.2 kD处呈现出2个清晰的蛋白质条带,而鹿茸则在约75、61、45、20 kD处呈出现4个蛋白质条带;2-DE分析显示,鹿角蛋白质斑点集中于Ⅰ区(pH5~7,M_(w) 45 kD)以及Ⅱ区(pH10,M_(w) 66.2 kD);鹿茸蛋白质斑点则主要分布在Ⅲ区(pH5~7,M_(w) 45 kD),另外,在pH5~6和M_(w) 20 kD的区域内存在3个稳定出现的蛋白质斑点。通过生物质谱分析,分别从鹿角与鹿茸中鉴定出2、4个蛋白质,评分高于100。结论鹿角与鹿茸蛋白质电泳图谱存在明显差异,可为两者鉴别提供科学依据。

关键词：鹿角鹿茸蛋白质电泳生物质谱

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