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榕江香猪生长激素基因的鉴定及功能分析(英文)

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生理学报 2006年第3期58卷 217-224页

作者：李景冉雪琴王嘉福贵州大学农业生物工程省重点实验室贵州大学动物科学学院贵阳550025

生长激素是调节动物生长的主要激素。本研究应用聚合酶链式反应技术从榕江香猪的基因组文库中分离出1．903kb生长激素基因。克隆的生长激素基因由五个外显子和四个内含子组成。榕江香猪生长激素基因的碱基序列与已知四个国外猪种和9个... 详细信息

生长激素是调节动物生长的主要激素。本研究应用聚合酶链式反应技术从榕江香猪的基因组文库中分离出1．903kb生长激素基因。克隆的生长激素基因由五个外显子和四个内含子组成。榕江香猪生长激素基因的碱基序列与已知四个国外猪种和9个中国地方猪种之间的同源性为97%～99%,其间的差异主要集中在内含子2和4。通过限制性内切酶(Dde I,Nar I,Bsm NI)分析,鉴定出榕江香猪生长激素基因的五个多态性位点,分别位于5’-侧翼区274(T/C)位点,外显子2的622(G/A)和631 (G/A)位点,内含子2中的841(T/C)以及外显子4中的1358(A/G)位点。同时,1358(A/G)位的碱基必变导致榕江香猪生长激素成熟肽第108位异亮氨酸替换,三维结构分析表明,异亮氨酸的存在可能导致生长激素与受体间亲合力降低。

关键词：榕江香猪生长激素基因

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高低产群香猪X染色体的结构变异比较分析

农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1045-1058页

作者：刘畅王嘉福黄世会冉雪琴贵州大学生命科学学院/农业生物工程研究院贵州大学动物科学学院

为了明确香猪（Sus scrofa）基因组的结构变化与繁殖调节机制之间的联系,采用二代测序技术对6头香猪进行了基因组重测序。结合数种生物信息学分析方法,从香猪高产组（XH）与低产组（XL）X染色体中检测到丰富的结构变异（structural vari... 详细信息

为了明确香猪（Sus scrofa）基因组的结构变化与繁殖调节机制之间的联系,采用二代测序技术对6头香猪进行了基因组重测序。结合数种生物信息学分析方法,从香猪高产组（XH）与低产组（XL）X染色体中检测到丰富的结构变异（structural variations,SV）。在香猪X染色体（chr X）上检测到3 246个SVs,进一步比较发现有311个SVs是XH组特有的,138个SVs只存在于XL组,合计449个SVs;XH组chr X染色体上61;09 Mb发现一个SV热点区域,XH组的热点区中有138个SVs,其中65个为缺失类型。449个SVs中,80个SVs位于基因内,影响了47个蛋白编码基因,31个基因位于繁殖相关的数量性状位点（quantitative trait locus,QTL）区域内,其中包括NLGN4X、GPR143、ZDHHC15、ATRX、NXF2、AMOT、GRIA3、THOC2等。对47个基因进行基因本体论（Gene Ontology,GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路分析表明这些基因涉及繁殖、免疫及脂代谢相关的生物功能和通路,如肾上腺发育（adrenal gland development）、胞内类固醇激素受体信号调控通路（regulation of intracellular steroid hormone receptor signaling pathway）、RIG-I受体信号通路（RIG-I-like receptor signaling pathway）和脂蛋白代谢过程（lipoprotein metabolic process）。利用PCR方法对10/47个SVs进行群体验证,得出SV;PR143在高低产群中存在差异（P<0.05）,基因型DD的产仔数低于基因型NN的产仔数（n=1.96,P<0.05）,与产仔数有一定的相关性（ρ=0.217）。本研究深入细致的SV分析表明XH组存在更为丰富的SVs,可为解析香猪产仔数变化的遗传机制提供理论依据。

关键词：香猪 X染色体产仔数结构变异 SV PR143

香猪雌激素受体α、β基因cDNA的克隆及分析

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动物学报 2008年第4期54卷 733-738页

作者：刘金娟王嘉福冉雪琴贵州大学动物科学学院贵阳550025

本文采用RT-PCR技术,分别从香猪的子宫和卵巢总RNA中扩增了雌激素受体α和β(ERα、ERβ)两种cDNA,分别长1788bp和1581bp,包括起始密码子和终止密码子,碱基序列与大白猪的ERα、ERβ基因的相似性为99.3%和99.6%。ERα、ERβ两个基因编码... 详细信息

本文采用RT-PCR技术,分别从香猪的子宫和卵巢总RNA中扩增了雌激素受体α和β(ERα、ERβ)两种cDNA,分别长1788bp和1581bp,包括起始密码子和终止密码子,碱基序列与大白猪的ERα、ERβ基因的相似性为99.3%和99.6%。ERα、ERβ两个基因编码595、526个氨基酸,N-末端的20、24个氨基酸残基为信号肽,成熟肽序列与大白猪之间均有4个氨基酸不同。三维结构分析发现,与大白猪相比,香猪ERα成熟肽第192、231位氨基酸由Ser、Met变为Gly、Thr,位于DNA结合结构域,成熟肽438位氨基酸由Val变为Gly,位于ERα的配体结合结构域;ERβ成熟肽中,167位和360位氨基酸由Asp和Phe变为Glu和Pro,位于受体的DNA结合域和配体结合域,这五个位点的氨基酸替代可能影响ERs蛋白与雌激素受体应答元件、雌激素等配体的结合,改变相关基因的转录效率,并可能影响香猪的卵巢、子宫等繁殖系统的发育,与香猪的低繁殖力有关。

关键词：香猪雌激素受体α 雌激素受体β cDNA

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Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因表达文库的构建

贵州农业科学 2009年第3期37卷 101-103页

作者：王芳冉雪琴王嘉福贵州大学动物科学学院/农业工程省重点实验室贵州贵阳550025

为构建用于筛选Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的融合基因表达文库。采用自杀载体pGP704为骨架，将无启动子的cat基因作为报告基因克隆到自杀载体pGP704上，构建报告质粒pGPT04-cat将Ⅱ型猪链球菌基因组DNA的500～1000bp酶切片段克隆到报告质... 详细信息

为构建用于筛选Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的融合基因表达文库。采用自杀载体pGP704为骨架，将无启动子的cat基因作为报告基因克隆到自杀载体pGP704上，构建报告质粒pGPT04-cat将Ⅱ型猪链球菌基因组DNA的500～1000bp酶切片段克隆到报告质粒pGP704-cat中cat基因的上游，转化受体菌获得融合基因文库；将文库质粒电转化Ⅱ型猪链球菌，得到融合基因表达文库。结果表明：构建的融合基因表达文库以氯霉素作为选择标记，经体外培养，获得2％的菌株具有氯霉素抗性，融合基因表达文库存在可以启动cat基因表达的启动子序列，cat基因在体外可以表达。构建的融合基因表达文库可以用于Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的筛选。

关键词： Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因融合基因表达文库

贵州地方猪种UCP3基因多态性与肉质性状的相关性分析

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中国畜牧杂志 2008年第13期44卷 1-4,45页

作者：胡倩王嘉福冉雪琴贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 农业生物工程省重点实验室贵州贵阳550025

解耦联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)是调节能量和脂肪代谢的重要因子。以商品猪(杂交猪)为对照,采用SSCP方法对贵州地方猪品种糯谷猪和萝卜猪的UCP3基因进行了多态性分析。结果表明:3个猪群体中,都检测到了3种基因型(AA、BB、AB),... 详细信息

解耦联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)是调节能量和脂肪代谢的重要因子。以商品猪(杂交猪)为对照,采用SSCP方法对贵州地方猪品种糯谷猪和萝卜猪的UCP3基因进行了多态性分析。结果表明:3个猪群体中,都检测到了3种基因型(AA、BB、AB),χ2独立性检验结果显示,3种基因型在3个群体间的分布不一致,糯谷猪和萝卜猪以AB基因型为主,杂交猪以BB基因型占优势,杂交猪与地方猪种之间的差异显著(P<0.01);对纯合基因型的UCP3基因片段进行克隆测序,证实AA基因型中UCP3基因外显子6编码区第842位碱基发生了单碱基突变(T→C),导致编码的氨基酸从苏氨酸突变为甲硫氨酸。进一步分析3种基因型与胴体和肉质性状之间的相关性,证明AB基因型个体的肉质最优,贵州地方猪种的大理石纹、肌内脂肪含量和嫩度3项指标显著优于商品猪(P<0.01),因此推测UCP3基因与贵州地方猪种的肉质性状具有相关性,可能是贵州地方猪种肉质性状的候选基因。

关键词：肉质性状 UCP3基因 SSCP 胴体猪

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农田土壤中毒死蜱降解菌的分离与鉴定

贵州农业科学 2010年第4期38卷 103-106,109页

作者：金鑫冉雪琴王嘉福贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州大学农业工程省重点实验室贵州贵阳550025

为分离出能降解有机磷农药的有效菌株,从长期施用有机磷农药的土壤中筛选出101株菌株,利用紫外分光光度计在293 nm处测定了分离菌株的降解效率,结合形态学和16 S rDNA序列初步分析了随机挑选的10株分离菌株的遗传多样性。结果表明,长期... 详细信息

为分离出能降解有机磷农药的有效菌株,从长期施用有机磷农药的土壤中筛选出101株菌株,利用紫外分光光度计在293 nm处测定了分离菌株的降解效率,结合形态学和16 S rDNA序列初步分析了随机挑选的10株分离菌株的遗传多样性。结果表明,长期施用农药的土壤中存在大量能够降解毒死蜱农药的微生物,其中以杆状菌居多,共获得68株杆菌。经初步鉴定,10株菌株分别为葡萄球菌属(Staphylo-coccus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、肠杆菌属(Enterobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、气单胞菌属(Aero-monas)和黄杆菌属(Flavobacterium)6个属。首次分离出气单胞菌属的毒死蜱降解菌。

关键词：毒死蜱分离降解细菌贵州

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2株气单胞菌属毒死蜱降解菌的分离与鉴定

西南农业学报 2011年第6期24卷 2238-2242页

作者：金鑫冉雪琴王嘉福贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州大学教育部绿色农药与农业生物工程重点实验室贵州贵阳550025

为治理环境中的农药污染提供依据,从长期施用有机磷农药的土壤中筛选出特殊细菌,采用细菌学、形态学、生理生化及分子系统学进行鉴定,以特异性引物扩增分离菌株的16S rRNA基因,经克隆测序后比对其相似性。结果表明:筛选出的2株菌细菌均... 详细信息

为治理环境中的农药污染提供依据,从长期施用有机磷农药的土壤中筛选出特殊细菌,采用细菌学、形态学、生理生化及分子系统学进行鉴定,以特异性引物扩增分离菌株的16S rRNA基因,经克隆测序后比对其相似性。结果表明:筛选出的2株菌细菌均为革兰氏阴性菌,均可产生接触酶,有还原硝酸盐的能力,能发酵麦芽糖、并使明胶液化,可在中盐环境中生长,2株菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。经克隆测序后比对,与气单胞菌属相应基因的相似性为99%,对毒死蜱的降解力为21%左右,为中等强度的降解菌。2株嗜水气单胞菌降解毒死蜱的机理可能有一定的特殊性,可作为清除环境中毒死蜱等有机磷农药的候选菌株。

关键词：有机磷农药毒死蜱降解基因气单胞菌 16SrDNA

贵州矮马鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及其致病力研究

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中国畜牧兽医 2016年第10期43卷 2756-2761页

作者：邓显佑薛艳王嘉福冉雪琴贵州大学农业生物工程研究院贵阳550025 铜仁学院铜仁554300 贵州大学动物科学学院贵阳550025

为了探究贵州矮马的腹泻病原,试验以腹泻粪样为材料进行病原菌的分离鉴定。经SS和XLD培养基筛选,得到1株菌株S6,经革兰氏染色、生理生化检验以及16SrRNA基因序列比对分析,S6菌株可在SS和XLD琼脂培养基表面生长,革兰氏染色呈阴性;生理生... 详细信息

为了探究贵州矮马的腹泻病原,试验以腹泻粪样为材料进行病原菌的分离鉴定。经SS和XLD培养基筛选,得到1株菌株S6,经革兰氏染色、生理生化检验以及16SrRNA基因序列比对分析,S6菌株可在SS和XLD琼脂培养基表面生长,革兰氏染色呈阴性;生理生化检验结果与沙门氏菌的生化特性相符;16SrRNA基因序列与已知的鼠伤寒沙门氏菌ATCC 13311（登录号：NR_119108）的亲缘关系最近,序列同源性为99%。形态学和分子系统学分析表明,该菌株为鼠伤寒沙门氏菌。采用PCR方法从S6菌株基因组中得到侵袭蛋白A（invasion protein A,invA）基因,与已知基因序列有6～8bp不一致,编码的氨基酸发生了一个替换。通过改良寇氏法测定S6菌株对小鼠的半数致死量（LD50）为4.71×102 CFU,属于强致病力菌株。推测S6 invA基因的变异可能与菌株的毒力强弱有关。贵州矮马群体中沙门氏菌的检出率为57%。本研究提示贵州矮马的腹泻病原之一可能是强毒力的鼠伤寒沙门氏菌。

关键词：贵州矮马鼠伤寒沙门氏菌侵袭蛋白A基因致病力

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贵州地方猪品种毛色与KIT基因拷贝数之间的关联分析

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中国畜牧兽医 2015年第3期42卷 676-684页

作者：何树芳冉雪琴王嘉福贵州大学农业生物工程研究院贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

为了研究KIT基因的拷贝数与贵州地方猪毛色之间的关系,本试验以黔北黑猪、柯乐猪、糯谷猪、香猪4个地方品种为试验材料,采用实时荧光定量PCR方法检测基因组中KIT基因的拷贝数变异,并与荣昌猪和大白猪2个白毛色猪品种相比较。结果显示,4... 详细信息

为了研究KIT基因的拷贝数与贵州地方猪毛色之间的关系,本试验以黔北黑猪、柯乐猪、糯谷猪、香猪4个地方品种为试验材料,采用实时荧光定量PCR方法检测基因组中KIT基因的拷贝数变异,并与荣昌猪和大白猪2个白毛色猪品种相比较。结果显示,4个贵州地方猪种中,全黑/全棕毛色个体的KIT基因拷贝数以缺失为主,黑色带白斑个体的KIT基因拷贝数全部缺失,而棕色带白个体的KIT基因拷贝数增加、正常各半。大白猪的KIT基因拷贝数显著增加,荣昌猪KIT基因拷贝数以正常类型为主。表明大白猪的白毛色由KIT基因拷贝数增加决定,但荣昌猪的白毛色可能与KIT基因的拷贝数变异之间没有直接的联系;4个贵州地方品猪的全黑/全棕色毛色与KIT基因拷贝数的缺失有关,但柯乐猪和香猪中带白斑个体的KIT基因拷贝数并未增加,提示贵州地方猪品种的白斑毛色的形成机制有一定的特殊性。

关键词：贵州地方猪品种荣昌猪 KIT基因拷贝数变异