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大肠杆菌mrNA膜周定位对其降解速度的影响

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大肠杆菌mRNA膜周定位对其降解速度的影响

作者：许良浙江师范大学

学位级别：硕士

mrNA转录与降解之间的平衡是调节mrNA丰度、调控基因表达的有效手段,对于生命体实施正常的生理功能具有重要意义。真核生物与原核生物mrNA降解方式包括:内切酶降解、5’→3’方向外切酶降解和3’→5’方向外切酶降解3种方式。细菌中最... 详细信息

mrNA转录与降解之间的平衡是调节mrNA丰度、调控基因表达的有效手段,对于生命体实施正常的生理功能具有重要意义。真核生物与原核生物mrNA降解方式包括:内切酶降解、5’→3’方向外切酶降解和3’→5’方向外切酶降解3种方式。细菌中最主要的降解途径是内切酶降解。核糖核酸酶E(ribonuclease E,rNase E)是参与rNA转录后处理和mrNA降解的重要核糖核酸内切酶,是大肠杆菌mrNA降解途径的关键组成部分。rNase E中存在一个片段(Segment-A,SA),是rNase E与细胞膜结合的必要且充分条件。体内和体外实验的结果均表明该片段的破坏会导致rNase E失去膜结合能力。PUF家族蛋白是一类高度保守的rNA结合蛋白,其包含一个进化上高度保守的rNA结合结构域,能特异性识别、结合特定rNA序列。科学家已经分析出PUF蛋白氨基酸序列与识别核苷酸序列的对应关系,为人工设计PUF蛋白并应用于识别结合特定rNA序列奠定了基础。为了探究大肠杆菌内膜周围mrNA降解速度是否与其它位置有所不同,本研究分别设计了结合ompC和gapA mrNA 3’非翻译区的PUF蛋白,并通过在PUF蛋白氨基端加上内膜定位片段,引导结合对应目标基因序列的PUF蛋白定位到内膜附近,进一步通过分析ompC和gapA mrNA含量与PUF蛋白表达的相关性,得到大肠杆菌胞内mrNA内膜周定位是否影响其降解速度的结论。利用片段SA将PUF蛋白定位至大肠杆菌细胞内膜,并利用绿色荧光蛋白作为信号方便PUF蛋白的定位分析。分别构建PUF1-GFP和SA-PUF1-GFP融合蛋白的原核表达载体,在大肠杆菌中分别诱导融合蛋白表达后,利用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在大肠杆菌胞内的分布,结果发现SA-PUF1-GFP融合蛋白相较于PUF1-GFP,其在大肠杆菌内所处位置明显更靠近大肠杆菌内膜。此结果说明SA片段发挥了内膜定位功能,成功将PUF1-GFP融合蛋白定位到大肠杆菌内膜。选择合适的大肠杆菌内源目标mrNA分子,并在体外验证PUF蛋白与目标rNA分子的互作。利用定量PCr技术,分析了ompC,gapA,aspC和recA四种基因的mrNA表达水平,确定相对表达量较高且分别主要分布于细胞膜和细胞质的ompC和gapA为mrNA目标分子。分别在ompC和gapA的3’非翻译区(untranslated regions,UTr)中选择合适的序列作为PUF蛋白识别序列,并设计合成PUF5(识别ompC 3’非翻译区5’-GCGGGCCC-3’),PUF6(识别gapA 3’非翻译区5’-AGAGCGAC-3’)核苷酸序列。为了方便后续PUF蛋白与目标寡核苷酸的互作分析,我们设计利用青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein,CFP)荧光和FAM形成荧光能量共振转移对(FrET pair),一旦他们结合,会产生较明显的信号。我们分别构建PUF5-CFP和PUF6-CFP融合蛋白的原核表达载体,并通过原核表达、纯化获得相应的融合蛋白。为了分析寡核苷酸6-FAM标记与PUF蛋白目标寡核苷酸的距离对其互作的影响,我们设计合成了6-FAM修饰与目标寡核苷酸之间有5,10,15,20和25个腺苷酸的寡核苷酸链(6-FAM-A-GCGGGCCC/AGAGCGAC)。通过PUF-CFP与FAM-寡核苷酸链的FrET实验,结果表明PUF5和PUF6蛋白识别、结合其目标rNA序列,且在识别序列与6-FAM之间间隔10个腺苷酸时亲和力最强,K值分别为0.45?mol/l和0.52?mol/l。在大肠杆菌细胞内,分析SA-PUF5和SA-PUF6的表达对目标ompC和gapA mrNA分子含量的影响。分别构建PUF5-GFP,SA-PUF5-GFP,PUF6-GFP和SA-PUF6-GFP四种融合蛋白的原核表达载体,经IPTG诱导在大肠杆菌胞内大量表达相应融合蛋白,并分析融合蛋白的表达量与目标mrNA分子含量变化的相关性。结果发现IPTG诱导蛋白表达3h后,PUF5-GFP表达量达到总蛋白的18.8%,而ompC含量下降至对照的79.3%,SA-PUF5-GFP表达量达到总蛋白的17.1%,而ompC含量下降至对照的61.2%;PUF6-GFP表达量达到总蛋白的19.0%,而gapA含量下降至对照的84.5%,SA-PUF6-GFP表达量达到总蛋白的17.1%,而gapA含量下降至对照的52.9%。此结果表明,利用SA序列定位至大肠杆菌内膜的PUF蛋白,可能结合目标mrNA分子并将其定位于内膜附近,且因为rNase E在细胞内膜的区域化分布,导致目标mrNA分子ompC和gapA的降解速度加快,含量降低。结论:基于膜定位信号和PUF蛋白特异性结合mrNA分子的特点,

关键词： mrNA降解 PUF蛋白 rNase E 定量PCr

多元线性回归分析法在蒙药森登-4汤谱效关系解析中的应用

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计算机与应用化学 2008年第10期25卷 1189-1192页

作者：许良毕开顺内蒙古民族大学化学学院内蒙古通辽028042 内蒙古民族大学蒙医药研究中心内蒙古通辽028042 沈阳药科大学药学院辽宁沈阳110016

多元线性回归分析法是常用的化学计量学方法之一。为了探索蒙药森登-4汤的药效物质基础，本文把该方法用于森登-4汤的谱效关系解析中。首先，选择l15（4^5）表正交设计，拆方森登4汤，将所得16个组方一一做抗炎镇痛药理实验，得到各处... 详细信息

多元线性回归分析法是常用的化学计量学方法之一。为了探索蒙药森登-4汤的药效物质基础，本文把该方法用于森登-4汤的谱效关系解析中。首先，选择l15（4^5）表正交设计，拆方森登4汤，将所得16个组方一一做抗炎镇痛药理实验，得到各处方的生物数据；利用反相高效液相色谱梯度洗脱技术，分析森登-4汤拆方所得到的16个处方的色谱，得到各处方的化学数据。其次，采用多元线性回归法分析以上化学数据和生物数据。回归分析的结果，在32个色谱峰中有15个与药理数据密切相关的色谱峰被引入回归方程，它们依次为X2、X3、X5、X6、X11、X12、X16、X20、X21、X23、X25、X26、X28、X29、X31色谱峰所代表的化学成分。可以初步判定原方至少有15种成分在协同作用，成为蒙药森登-4汤抗炎镇痛主要药效的物质基础。本实验为蒙药森登-4汤的二次开发和建立质量控制方法提供依据。

关键词：多元线性回归分析法森登-4汤谱效关系解析

HPlC法同时测定中风活心软胶囊中葛根素、蛇床子素的含量

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中药材 2015年第10期38卷 2187-2189页

作者：许良葵聂阳广东食品药品职业学院制药工程学院广州510520

目的：建立HPlC法同时测定中风活心软胶囊中葛根素、蛇床子素的含量。方法：采用HPlC法,Kromasil C18色谱柱（200 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）,梯度洗脱（0~10 min,25%~40%A;10~20 min,40%~60%A;20~40 min,6... 详细信息

目的：建立HPlC法同时测定中风活心软胶囊中葛根素、蛇床子素的含量。方法：采用HPlC法,Kromasil C18色谱柱（200 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）,梯度洗脱（0~10 min,25%~40%A;10~20 min,40%~60%A;20~40 min,60%~80%A）;检测波长：270 nm;柱温：35℃;流速：1.0 m l/min。结果：葛根素和蛇床子素分别在9.60~192μg/m l（r_1=0.9995）、1.20~20.40μg/m l（r_2=0.9993）范围内与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率分别为99.04%、98.16%。结论：该方法快速、灵敏、准确、重复性好,可用于中风活心软胶囊的质量控制。

关键词： HPlC 中风活心软胶囊葛根素蛇床子素

基于IMU/GNSS的低功耗定位关键技术研究

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基于IMU/GNSS的低功耗定位关键技术研究

作者：许良备上海交通大学

学位级别：硕士

随着“智慧城市”等信息化过程加快，GNSS为代表的定位技术在生产和生活中发挥更大的作用。民用领域，复杂信号情况下的GNSS定位技术成为国内外研究热点。当前GNSS定位技术面临信号环境复杂（弱信号、高动态）和功耗限制的问题。本文针... 详细信息

随着“智慧城市”等信息化过程加快，GNSS为代表的定位技术在生产和生活中发挥更大的作用。民用领域，复杂信号情况下的GNSS定位技术成为国内外研究热点。当前GNSS定位技术面临信号环境复杂（弱信号、高动态）和功耗限制的问题。本文针对一般的手持GNSS应用，研究了高灵敏度GNSS定位的低功耗技术。本文重点内容在于基带处理，所提出的基带处理架构包括捕获（含比特同步）和跟踪，并利用IMU辅助间歇工作的跟踪环路。首先，为了提高捕获灵敏度，课题通过相干-非相干累加增加信噪比处理增益，并采用半比特交替法避免比特边沿跳变引起的信噪比损耗。仿真分析表明，当动态小于50Hz/s，捕获灵敏度最高达23dBHz。其次，为了减小运算量，利用混合码并行捕获多颗卫星或者多个码相位。仿真分析表明，当信号强度大于45dBHz，运算量减小约一半，捕获速度加快约一倍，功耗减小约一半。最后，采用频率补偿的比特能量同步方案进行比特同步。仿真表明，相比传统直方图方案，相同信号处理长度下，灵敏度增加7-8dB。另外论文研究了利用改进的DFT鉴频器改善2阶Fll辅助3阶Pll环路的灵敏度，相比反正切鉴频器，跟踪灵敏度提高2dB。仿真分析表明，当动态小于5Hz/s，使用200ms相干积分，灵敏度达到14dBHz。另外一方面，为了降低跟踪功耗，采用IMU辅助的间歇跟踪方案，重点研究了通道重启后，如何快速跟踪信号，并设计占空比控制策略。仿真分析表明，最好情况下可以减少80%的功耗。所研究的算法不仅适用GPS l1信号，而且针对2012年12月最新公布的BDS B1I信号进行优化。总之，本文研究对高灵敏度低功耗接收机的实际设计具有重要意义。

关键词：高灵敏度低功耗捕获间歇跟踪惯性传感器

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四季海棠与丽格海棠再生体系的建立

四季海棠与丽格海棠再生体系的建立

作者：许良飞四川农业大学

学位级别：硕士

本研究以四季海棠(Begonia Semperflorens)和丽格海棠(Begonia x hiemalis Fostsch)的叶片为试验材料,以器官发生途径对两种秋海棠进行无性繁殖体系的建立,并对它们最适宜的组织培养条件进行了对比。 1.消毒时间:试验研究了0.1%的HgCl... 详细信息

本研究以四季海棠(Begonia Semperflorens)和丽格海棠(Begonia x hiemalis Fostsch)的叶片为试验材料,以器官发生途径对两种秋海棠进行无性繁殖体系的建立,并对它们最适宜的组织培养条件进行了对比。 1.消毒时间:试验研究了0.1%的HgCl对两种秋海棠叶片的最佳消毒时间,结果表明:四季海棠叶片采用0.1%的HgCl灭菌5min较为适宜;丽格海棠叶片灭菌6min是较为适宜的。 2.最佳取材时间:试验分别于1月、3月、5月、6月、10月、11月、12月对两种秋海棠进行取材接种,研究了它们的最佳取材时间,得出11月至12月上旬是四季海棠接种的最佳时期:丽格海棠在3月份取材最佳,其次是10月份。 3.初代培养:试验采用三因素三水平的正交试验设计研究了两种秋海棠的最佳启动激素配方,四季海棠的最佳启动培养基是:1/2MS+6-BA0.5mg/l+IBA0.8mg/l;最有利于丽格海棠启动的诱导培养基配方是:1/2MS+6-BA1.0mg/l+NAA0.4mg/l。 4.继代培养:采用完全试验研究了两个组合6-BA与NAA,6-BA与IBA对两种秋海棠的增殖影响,研究表明:四季海棠最佳增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/l+NAA0.3mg/l;丽格海棠以MS+6-BA1.0mg/l+IBA0.5mg/l增殖效果较好。 5.生根壮苗培养:试验在液体生根培养研究出四季海棠和丽格海棠最适宜的基本培养基类型、蔗糖浓度、生长素种类的基础上,又进行了固体培养详细研究了各激素的最适浓度,结果表明,四季海棠以液体培养基+MS+GA0.5mg/l+NAA0.5mg/l+蔗糖30g/l;丽格海棠的最佳生根壮苗培养基为液体培养基+MS+IBA1.0mg/l+蔗糖20g/l。 6.移栽与炼苗:试验将具有不同类型根(由不同类型培养基培养所得)的小苗用三种浇水法——传统浇水法、浸水法、隔天种植法来培养,对比选出最佳的炼苗方法,得出四季海棠最佳的炼苗方案为液体培养所得的小苗用隔天种植法培养;丽格海棠最适炼苗方案为不加AC固体培养所得小苗用传统浇水法培养。

关键词：四季海棠丽格海棠组织培养

l型钻孔地面预注浆技术在煤矿井下巷道加固工程中的应用

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煤矿开采 2014年第1期19卷 56-59页

作者：安许良天地科技股份有限公司建井研究院北京100013 北京中煤矿山工程有限公司北京100013

l型钻孔地面预注浆技术将传统的地面预注浆技术与先进的定向钻进技术相结合利用地面预注浆压力大的优点,在井下水平巷道开挖前,从地面对其进行超前加固,从而提高围岩稳定性,降低开挖支护难度,节省开挖支护工期。在介绍l型钻孔地面预注... 详细信息

l型钻孔地面预注浆技术将传统的地面预注浆技术与先进的定向钻进技术相结合利用地面预注浆压力大的优点,在井下水平巷道开挖前,从地面对其进行超前加固,从而提高围岩稳定性,降低开挖支护难度,节省开挖支护工期。在介绍l型钻孔地面预注浆技术特点的基础上,阐述了该技术在信湖煤矿的应用情况,并对其关键施工装备进行了总结。

关键词： l型钻孔地面预注浆定向钻进超前加固

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TB6钛合金疲劳小裂纹扩展行为

材料工程 2019年第11期47卷 171-177页

作者：许良黄双君回丽王磊周松赵晴沈阳航空航天大学机电工程学院沈阳110136 沈阳航空航天大学航空制造工艺数字化国防重点学科实验室沈阳110136

为了研究TB6钛合金自然萌生小裂纹的扩展行为,针对单边缺口拉伸试样开展室温下不同应力比(r=0.1,0.5)的小裂纹扩展实验,采用复型法观测了小裂纹的萌生与扩展情况。结果表明:同一应力比下,随着应力等级的降低,小裂纹的萌生寿命由占全寿命... 详细信息

为了研究TB6钛合金自然萌生小裂纹的扩展行为,针对单边缺口拉伸试样开展室温下不同应力比(r=0.1,0.5)的小裂纹扩展实验,采用复型法观测了小裂纹的萌生与扩展情况。结果表明:同一应力比下,随着应力等级的降低,小裂纹的萌生寿命由占全寿命的60%增加到80%,但应力等级对TB6钛合金小裂纹扩展速率没有明显影响。裂纹早期扩展速率受微观组织的影响大,TB6钛合金扩展速率转变临界值是200μm,一旦裂纹长度达到200μm,裂纹扩展速率将不受取向不同的晶界或晶粒影响而迅速提升。TB6钛合金疲劳小裂纹起源于试样缺口根部,所有试样的裂纹大部分为角裂纹,疲劳小裂纹萌生寿命占全寿命的绝大部分。

关键词：钛合金小裂纹疲劳源裂纹扩展速率应力等级

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不同腐蚀环境下高强铝合金腐蚀行为

中国机械工程 2017年第16期28卷 2000-2007页

作者：周松许良回丽王磊马少华韩放沈阳航空航天大学航空制造工艺数字化国防重点学科实验室沈阳110136

针对航空铝合金材料在服役过程中因恶劣环境而导致材料腐蚀的问题,通过分析腐蚀形貌、腐蚀坑开口面积、腐蚀深度、点腐蚀坑数量、pH值、腐蚀产物等变化,研究2xxx航空铝合金在不同腐蚀环境(3.5%NaCl水溶液、模拟油箱积水溶液和潮湿空气)... 详细信息

针对航空铝合金材料在服役过程中因恶劣环境而导致材料腐蚀的问题,通过分析腐蚀形貌、腐蚀坑开口面积、腐蚀深度、点腐蚀坑数量、pH值、腐蚀产物等变化,研究2xxx航空铝合金在不同腐蚀环境(3.5%NaCl水溶液、模拟油箱积水溶液和潮湿空气)中的腐蚀行为和机理。结果表明,在3.5%NaCl水溶液中,铝合金试样表面腐蚀坑的产生主要发生在前24h内,其最大腐蚀坑深约为45μm,而在72~120h,随预腐蚀时间的延长,腐蚀坑深度、个数的增加并不明显;铝合金试样在模拟油箱积水环境中的腐蚀规律与在3.5%NaCl水溶液中的相似,但腐蚀坑最大开口面积和腐蚀坑的个数明显减少;与前两种环境相比,试样在潮湿空气环境中的腐蚀程度明显减小,腐蚀坑总体个数最少,最大腐蚀坑深约在20μm以内,最大开口面积约在5000μm^2左右,且随着腐蚀时间的增长,腐蚀坑之间的深度差距越来越小。

关键词：高强铝合金腐蚀行为点蚀腐蚀环境腐蚀产物

湿热-高温循环老化对碳纤维增强双马树脂基复合材料界面性能的影响

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高分子材料科学与工程 2018年第3期34卷 54-59,66页

作者：马少华许赞许良回丽沈阳航空航天大学机电工程学院沈阳航空航天大学航空制造工艺数字化国防重点实验室辽宁沈阳110136

采用层间剪切的测试方法,研究了湿热-高温循环老化对碳纤维双马树脂基复合材料界面性能的影响,分析了复合材料的质量变化过程以及不同循环老化次数下的层间性能、表面和断口形貌、动态力学性能及红外谱图。结果表明,随着湿热老化次数的... 详细信息

采用层间剪切的测试方法,研究了湿热-高温循环老化对碳纤维双马树脂基复合材料界面性能的影响,分析了复合材料的质量变化过程以及不同循环老化次数下的层间性能、表面和断口形貌、动态力学性能及红外谱图。结果表明,随着湿热老化次数的增加,饱和吸湿率逐渐增大后又减小,但达到吸湿饱和所用时间逐渐缩短;随着高温老化次数的增加,老化前期的质量损失速率降低得不多,但最终的质量损失率有着小幅度的升高。湿热-高温循环老化导致了纤维与基体间的界面破坏,但层间剪切强度降低的幅度不大,有着较高的保持率。随着循环次数的增加,每次湿热老化后的Tg都较前一次有所升高,但在每次高温老化后的Tg都相差不大。高温老化在循环老化过程中起主导作用,期间发生了热老化效应和氧化反应。

关键词：碳纤维双马树脂基复合材料湿热老化高温老化界面性能动态力学性能