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海岛棉GbWRKY32基因的克隆及特性分析

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分子植物育种 2016年第6期14卷 1361-1368页

作者：加得拉.吐留汗倪志勇邱迎风曲延英陈全家新疆农业大学农学院农业生物技术重点实验室乌鲁木齐830052

利用RT-PCR技术从海岛棉品种新海21中克隆了1个WRKY基因,在GenBank数据库中比对发现其与陆地棉GhWRKY32的序列高度同源,因此命名为GbWRKY32。该基因ORF为1 077 bp,编码358氨基酸,预测分子量为39.288 k D,等电点为5.02。序列分析表明该... 详细信息

利用RT-PCR技术从海岛棉品种新海21中克隆了1个WRKY基因,在GenBank数据库中比对发现其与陆地棉GhWRKY32的序列高度同源,因此命名为GbWRKY32。该基因ORF为1 077 bp,编码358氨基酸,预测分子量为39.288 k D,等电点为5.02。序列分析表明该基因含有一个WRKY保守结构域,锌指结构为:C-X5-C-X23-H-X1-H,属于WRKY转录因子家族Ⅱ类D组成员。GbWRKY32蛋白为疏水性蛋白,不具有跨膜区和信号肽结构。GbWRKY32转录因子不具有转录自激活活性。本研究成功构建GbWRKY32基因的植物表达载体并转入根癌农杆菌EHA105菌株中,这有助于该基因功能的后续研究。

关键词：海岛棉 GbWRKY32 转录自激活活性植物表达载体

海岛棉转录因子基因GbTCP44的克隆及特征分析

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中国农业大学学报 2021年第1期26卷 33-42页

作者：石颖颖郑凯曲延英陈琴赵柯柯滕露陈全家新疆农业大学农学院/农业生物技术重点实验室乌鲁木齐830052 新疆农业大学博士后流动站乌鲁木齐830052

为阐明TCP基因在棉花纤维发育中的功能,以海岛棉‘新海21号’为材料,运用RT-PCR技术克隆得到海岛棉GbTCP44基因的cDNA序列,并借助生物信息学、亚细胞定位、实时荧光定量PCR技术分析预测其结构和功能。结果表明:(1)GbTCP44基因的编码区... 详细信息

为阐明TCP基因在棉花纤维发育中的功能,以海岛棉‘新海21号’为材料,运用RT-PCR技术克隆得到海岛棉GbTCP44基因的cDNA序列,并借助生物信息学、亚细胞定位、实时荧光定量PCR技术分析预测其结构和功能。结果表明:(1)GbTCP44基因的编码区序列全长为1 035bp,共编码344个氨基酸,预测分子式为C1618H2538N484O525S13,分子量约为37.59ku,等电点为8.83,其序列(N端)有一个高度保守的TCP功能结构域,属于TCP转录因子家族Class I成员;(2)GbTCP44基因在细胞核中表达,属于核表达蛋白,该蛋白的结构域与其他植物TCP蛋白具有高度的保守性,并与雷蒙德氏棉的亲缘关系最近;(3)GbTCP44基因在花器官中的表达量显著高于营养器官的表达量;该基因在棉纤维发育20d时的表达量均为最高;当棉纤维发育至25和30d时,该基因在长纤维品种中的表达量低于在短纤维品种中的表达量,且存在显著差异(P<0.05),表明GbTCP44基因可能参与棉花纤维伸长期的纤维细胞伸长的发育。

关键词：海岛棉 TCP转录因子亚细胞定位表达特性

农杆菌介导的GbWOX9基因对海岛棉胚性细胞的遗传转化

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分子植物育种 2018年第13期16卷 4294-4300页

作者：芮存李娟曲延英陈全家汪志星高文伟张霞新疆农业大学农学院农业生物技术重点实验室乌鲁木齐830052

为探究WOX9基因在棉花体细胞胚胎发育过程中的功能,借助农杆菌介导化学试剂诱导型植物表达载体p TA7002/GbWOX9和pTA7002/GbWOX9 anti对海岛棉‘新海16’胚性细胞进行遗传转化,以此利用化学诱导剂在胚性细胞中诱导GbWOX9的过量或抑制表... 详细信息

为探究WOX9基因在棉花体细胞胚胎发育过程中的功能,借助农杆菌介导化学试剂诱导型植物表达载体p TA7002/GbWOX9和pTA7002/GbWOX9 anti对海岛棉‘新海16’胚性细胞进行遗传转化,以此利用化学诱导剂在胚性细胞中诱导GbWOX9的过量或抑制表达。研究结果表明在菌液OD600≈0.5~0.6时进行15 min的农杆菌侵染并共培养24 h之后,将侵染的细胞在500 mg/L头孢和20 mg/L潮霉素的抗性培养基上筛选继代两次,最终获得若干抗性阳性胚性细胞。进一步将抗性阳性细胞在化学诱导剂30μmol/L地塞米松处理5 h后,通过qRT-PCR技术对其进行GbWOX9的基因表达鉴定,结果表明与对照组相比,正、反义转基因抗性阳性细胞中的GbWOX9基因表达量皆有显著差异。该研究初步建立了以潮霉素为筛选标记的海岛棉遗传转化体系,并在此基础上将GbWOX9正义和反义链成功导入‘新海16’胚性细胞中,为其功能的鉴定提供了参考。

关键词：海岛棉 GbWOX9 农杆菌潮霉素胚性细胞

海岛棉转录因子基因GbTCP27的克隆及表达特性分析

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中国农业大学学报 2020年第2期25卷 24-33页

作者：郑凯曲延英倪志勇蔡永生石颖颖陈全家新疆农业大学农学院/农业生物技术重点实验室乌鲁木齐830052

为探究转录因子GbTCP27在棉花纤维发育中的作用,使用RT-PCR技术从海岛棉‘新海21号’中克隆GbTCP27,并对其进行生物信息学和表达特性分析。结果表明,该基因有1个1017 bp的开放阅读框,编码338个氨基酸,预测分子量约为35.37 ku,等电点为9.... 详细信息

为探究转录因子GbTCP27在棉花纤维发育中的作用,使用RT-PCR技术从海岛棉‘新海21号’中克隆GbTCP27,并对其进行生物信息学和表达特性分析。结果表明,该基因有1个1017 bp的开放阅读框,编码338个氨基酸,预测分子量约为35.37 ku,等电点为9.08,分子式为C1549H2511N439O483S11,序列中含有一个高度保守的TCP结构域;氨基酸序列对比表明,海岛棉GbTCP27基因在进化过程中是相当保守的,蛋白序列与其他植物中的TCP蛋白序列有较高的一致性;亚细胞定位结果显示,GbTCP27属于核定位基因,推测GbTCP27可能在复制和转录的过程中发挥作用;进化树分析表明,海岛棉GbTCP27基因与亚洲棉GaTCP9基因分布在同一分支上;实时荧光定量PCR表明,GbTCP27基因在开花当天的花瓣和开花当天的胚珠中表达量最高;综上所述,GbTCP27转录因子可能参与棉花纤维起始期胚珠表皮细胞的发育。

关键词：海岛棉 TCP 转录因子亚细胞定位表达特性

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种植密度对棉花常规制种产量和品质的影响

西北农业学报 2015年第2期24卷 79-83页

作者：付文敏苏秀娟曲延英杜荣光陈全家新疆农业大学农学院新疆农业大学农业生物技术重点实验室乌鲁木齐830052

为了探讨适于新疆北疆地区棉花常规制种田的种植密度,在大田生产条件下,选用3个棉花品种(系)100651、ND012和新陆早45号,设置3个密度1.25×104株/667m2(M1)、1.67×104株/667m2(M2)和2.08×104株/667m2(M3),随机区组设计,研究种植密度... 详细信息

为了探讨适于新疆北疆地区棉花常规制种田的种植密度,在大田生产条件下,选用3个棉花品种(系)100651、ND012和新陆早45号,设置3个密度1.25×104株/667m2(M1)、1.67×104株/667m2(M2)和2.08×104株/667m2(M3),随机区组设计,研究种植密度对种子产量和品质的影响。结果表明,3品种(系)株高和有效果枝数变化表现为M1>M2>M3,100651品系有效铃数表现为M3>M1,籽棉产量、种子产量、和发芽率均表现为M1>M3,种子酶活性表现为M2大于其他密度。ND012和新陆早45号有效铃数表现为M1>M2>M3,发芽势、发芽率和酶活性均表现为M2高于其他密度处理,籽棉产量和种子产量表现为M3大于其他密度处理。因此,100651品系在密度为1.25×104株/667m2时种子产量和品质最优;ND012和新陆早45号在密度为1.67×104株/667m2时产量和品质最优。

关键词：棉花密度种子产量种子品质

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大蒜芥SaPOD基因的克隆及序列分析响

分子植物育种 2015年第1期13卷 150-155页

作者：刘静静曲延英陈琴姚正培倪志勇陈全家新疆农业大学农业生物技术重点实验室乌鲁木齐830052

过氧化物酶(POD)是植物生长发育过程中调控生物体代谢及细胞抵御活性氧伤害的关键基因酶。本研究利用RACE结合RT-PCR技术克隆得到大蒜芥POD基因Sa POD全长c DNA序列。该基因全长1 315 bp,其中开放阅读框为975 bp,编码含有325个氨基酸,... 详细信息

过氧化物酶(POD)是植物生长发育过程中调控生物体代谢及细胞抵御活性氧伤害的关键基因酶。本研究利用RACE结合RT-PCR技术克隆得到大蒜芥POD基因Sa POD全长c DNA序列。该基因全长1 315 bp,其中开放阅读框为975 bp,编码含有325个氨基酸,预测编码蛋白质的等电点为4.94,分子量为109.62 k D。Sa POD与小盐芥、拟南芥、荠菜、琴叶拟南芥、盐芥、棉花和蓖麻子的POD蛋白质序列相似性分别为96%、92%、92%、91%、78%、74%和75%,说明该基因与POD同源。Sa POD基因的克隆将为进一步基因的功能分析奠定基础。

关键词：大蒜芥 POD 过氧化物酶序列分析液

陆地棉HRD转录因子基因原核表达与亚细胞定位分析

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棉花学报 2019年第2期31卷 121-128页

作者：陈琴曲延英倪志勇韩玉慧程浩然陈全家新疆农业大学农学院/新疆农业大学农业技术重点实验室乌鲁木齐830052

【目的】AP2/ERF家族基因在植物生长和逆境胁迫中起重要作用,GhHRD转录因子基因是该家族的一员。本试验首次克隆了GhHRD基因,为研究其功能提供理论依据。【方法】选用相对耐旱的新陆中36作为试验材料,通过反转录聚合酶链式反应的方法获... 详细信息

【目的】AP2/ERF家族基因在植物生长和逆境胁迫中起重要作用,GhHRD转录因子基因是该家族的一员。本试验首次克隆了GhHRD基因,为研究其功能提供理论依据。【方法】选用相对耐旱的新陆中36作为试验材料,通过反转录聚合酶链式反应的方法获得GhHRD基因,并通过生物信息学、原核表达、亚细胞定位和酵母杂交分析预测其结构和功能。【结果】GhHRD基因开放阅读框为555 bp,编码184个氨基酸,相对分子质量为19.539×10~3 Da,等电点为5,具有典型的AP2/ERF保守结构域。原核表达分析发现,pET-28a(+)-GhHRD可以被诱导表达,且在37℃、IPTG浓度1 mmol·L^(-1)条件下高效表达。与GFP融合的重组蛋白GhHRD-GFP定位在细胞核,且具有明显的转录自激活特征。【结论】推测GhHRD可能参与了棉花逆境胁迫应答反应,为进一步探索该转录因子的DNA结合位点和转录调控网络奠定了基础。

关键词： HRD转录因子原核表达亚细胞定位酵母杂交

大豆gma-miR169c启动子的克隆及植物表达载体构建

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分子植物育种 2015年第2期13卷 287-293页

作者：倪志勇于月华任燕萍陈全家张桦曲延英新疆农业大学农学院新疆农业大学农业生物技术重点实验室乌鲁木齐830052

本研究以大豆Williams 82基因组DNA为材料,根据预测的gma-mi R169c启动子序列设计引物,采用PCR方法克隆得到gma-mi R169c上游一段长度为1 935 bp的启动子序列。采用Plant CARE启动子在线预测工具分析表明,gma-mi R169c启动子序列具有TAT... 详细信息

本研究以大豆Williams 82基因组DNA为材料,根据预测的gma-mi R169c启动子序列设计引物,采用PCR方法克隆得到gma-mi R169c上游一段长度为1 935 bp的启动子序列。采用Plant CARE启动子在线预测工具分析表明,gma-mi R169c启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与非生物胁迫和植物激素应答相关的顺式作用元件。将gma-mi R169c启动子部分缺失序列替代p BI121载体中的Ca MV35S启动子,构建了与GUS融合的启动子元件缺失表达载体。研究结果为进一步分析gma-mi R169c启动子元件的功能和调控机制奠定了基础。

关键词：大豆 gma-mi R169c 启动子植物表达载体

棉花bZIP转录因子基因GhbZIP15的克隆与表达分析

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棉花学报 2015年第6期27卷 515-523页

作者：李月许朋斐陈全家代培红刘超曲延英刘晓东新疆农业大学农学院/农业生物技术重点实验室新疆乌鲁木齐830052

b ZIP转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中有重要作用。本研究依据生物信息学分析,采用RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)方法从棉花中克隆了一个b ZIP转录因子基因,命名为Ghb ZIP15(Gen Bank登录号为KP938299)。... 详细信息

b ZIP转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中有重要作用。本研究依据生物信息学分析,采用RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)方法从棉花中克隆了一个b ZIP转录因子基因,命名为Ghb ZIP15(Gen Bank登录号为KP938299)。该基因c DNA全长1980 bp,其开放阅读框为966 bp,编码321个氨基酸的蛋白,预测分子量为37.1 k D,等电点为7.44。SMART蛋白结构预测发现,该蛋白含有b ZIP家族典型的BRLZ碱性结构域和亮氨酸拉链,属于B-zip1家族。系统进化树分析表明Ghb ZIP15属于b ZIP转录因子AREB亚家族,和拟南芥A亚家族的Atb ZIP12,At ABF1和At ABF2亲缘关系最近。洋葱表皮细胞中瞬时表达分析表明,Ghb ZIP15主要定位于细胞核中。RT-PCR分析表明Ghb ZIP15对干旱、高盐、低温等处理都有一定程度的响应,推测该基因对棉花非生物胁迫的调控起重要作用。

关键词：棉花 b ZIP转录因子非生物胁迫 Ghb ZIP15 克隆表达