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Continued evolution of the Eurasian avian-like H1N1 swine influenza viruses in China

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Science China(Life Sciences) 2023年第2期66卷 269-282页

作者： Fei Meng Yan Chen Zuchen Song Qiu Zhong Yijie Zhang chuanling qiao Cheng Yan Huihui Kong Liling Liu Chengjun Li Huanliang Yang Hualan Chen State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Veterinary Research InstituteChinese Academy of Agricultural SciencesHarbin 150069China

Animal influenza viruses continue to pose a threat to human public health. The Eurasian avian-like H1N1(EA H1N1) viruses are widespread in pigs throughout Europe and China and have caused human infections in several countries, indicating their pandemic potential. To carefully monitor the evolution of the EA H1N1 viruses in nature, we collected nasal swabs from 103,110pigs in 22 provinces in China between October 2013 and December 2019, and isolated 855 EA H1N1 viruses. Genomic analysis of 319 representative viruses revealed that these EA H1N1 viruses formed eight different genotypes through reassortment with viruses of other lineages circulating in humans and pigs, and two of these genotypes(G4 and G5) were widely distributed in *** studies indicated that some strains have become highly pathogenic in mice and highly transmissible in ferrets via respiratory droplets. Moreover, two-thirds of the EA H1N1 viruses reacted poorly with ferret serum antibodies induced by the currently used H1N1 human influenza vaccine, suggesting that existing immunity may not prevent the transmission of the EA H1N1 viruses in humans. Our study reveals the evolution and pandemic potential of EA H1N1 viruses and provides important insights for future pandemic preparedness.

关键词： H1N1 influenza immunity

H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白225位氨基酸对病毒致病性的影响

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中国农业科学 2022年第4期55卷 816-824页

作者：杨时鳗许程志许榜丰吴运谱贾云慧乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室辽宁中医药大学实验动物中心

【目的】流感病毒的致病性是由多个基因共同决定的，笔者之前的研究结果发现当两株具有相似基因特征的H1N1亚型猪流感病毒进行HA基因替换以后，病毒对小鼠的致病性发生了改变。通过确定影响病毒致病性的关键氨基酸位点，为进一步揭示流... 详细信息

【目的】流感病毒的致病性是由多个基因共同决定的，笔者之前的研究结果发现当两株具有相似基因特征的H1N1亚型猪流感病毒进行HA基因替换以后，病毒对小鼠的致病性发生了改变。通过确定影响病毒致病性的关键氨基酸位点，为进一步揭示流感病毒致病力差异奠定了基础。【方法】对ZD71和SY130的HA蛋白氨基酸序列进行比对，确认氨基酸差异位点并设计定点突变引物，构建单点突变的重组病毒并测定其鸡胚半数感染量（EID50）。将拯救的亲本病毒、HA单基因替换重组病毒及单点突变重组病毒以感染复数（MOI）为0.001和0.1的病毒量分别接种于MDCK和A549细胞，测定病毒的体外复制能力；将上述各株病毒以50μL含106EID50的剂量经滴鼻途径接种BALB/c小鼠，分别采集小鼠的脑、鼻甲、肺、脾、肾等脏器，匀浆处理后接种鸡胚分析病毒在小鼠体内各脏器的复制情况；将病毒分别以50μL含101-106 EID50的剂量经鼻腔感染BALB/c小鼠，感染后每天称量小鼠体重，当小鼠体重下降比率超过25%时判定为死亡，统计死亡情况，测定病毒的小鼠半数致死量（MLD50），评估各突变病毒对小鼠的致病性，与亲本病毒进行分析比较后，获知决定病毒致病性的关键氨基酸位点。【结果】ZD71和SY130病毒HA蛋白共存在4个氨基酸差异位点，分别为4、138、144和225位（H3 Numbering）。经过定点突变、病毒拯救及序列测定确认，分别获得含有单个位点突变的重组病毒。通过测定病毒在MDCK和A549细胞上的复制情况，结果发现与亲本病毒rZD71相比较，突变病毒rZD71-HA/G225E在感染MDCK细胞的各检测时间点、及感染A549细胞24—48 h后，复制滴度均显著提高；与rSY130相比较，突变病毒rSY130-HA/E225G在感染MDCK细胞12—36 h后、及感染A549细胞36—72 h后，复制滴度均显著降低。而4、138、144位点的突变对病毒的复制影响较小。进一步的小鼠感染试验发现HA 225位氨基酸的改变显著影响了病毒对小鼠的致病性，与亲本病毒rZD71相比，225位氨基酸由G突变为E后，病毒rZD71-HA/G225E的MLD50由4.32 log10EID50降低至3.0 log10EID50；病毒不仅在小鼠鼻甲和肺脏内检测到，而且在脾脏和肾脏中也均有一定水平的复制。【结论】HA蛋白225位氨基酸对两株H1N1 SIV对小鼠的致病性具有重要决定作用，提示在后续开展的病原学监测中要密切关注该位点氨基酸的变异情况，为更好地防控动物流感乃至人流感的大流行提供科学依据。

关键词：猪流感病毒 HA蛋白氨基酸致病性

欧亚类禽H1N1猪流感病毒抗原性变异关键氨基酸的鉴定与分析

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中国农业科学 2023年第14期56卷 2828-2836页

作者：张乃心许程志杨玉莹张亚萍万云飞乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室

【背景】流感病毒的抗原性主要是由病毒的表面糖蛋白HA决定的，前期利用欧亚类禽型H1N1猪流感病毒（EA H1N1 SIV）HA蛋白单克隆抗体（mAb）筛选抗原逃逸株发现，HA蛋白190、230和269位（H3编码）氨基酸的改变能够导致病毒发生抗原逃逸... 详细信息

【背景】流感病毒的抗原性主要是由病毒的表面糖蛋白HA决定的，前期利用欧亚类禽型H1N1猪流感病毒（EA H1N1 SIV）HA蛋白单克隆抗体（mAb）筛选抗原逃逸株发现，HA蛋白190、230和269位（H3编码）氨基酸的改变能够导致病毒发生抗原逃逸，并发现在新近分离的EA H1N1 SIV HA蛋白广泛存在这3个氨基酸的变异。【目的】进一步探索哪些氨基酸对病毒的抗原性具有关键作用，为流感的防控提供科学依据。【方法】选取一株病毒A/swine/Liaoning/SY72/2018(H1N1) SY72为模式病毒，建立该病毒的反向遗传系统（RGS），又以SY72为骨架，拯救含有HA基因190、230和269单点突变重组病毒；利用rSY72病毒制备灭活疫苗，分别免疫SPF鸡和非免疫猪制备其相应的血清，通过中和试验和血凝抑制（HI）试验分析病毒的抗原性，确定影响病毒抗原性的关键氨基酸位点；继而评估HA蛋白不同位点氨基酸的改变对病毒复制特性及受体结合特性等的影响。【结果】分析SY72病毒的HA氨基酸序列发现，该病毒HA蛋白分别含有190D、230M和269R。利用反向遗传技术，分别拯救了病毒rSY72及单点突变病毒rSY72HA/D190N、rSY72HA/M230I和rSY72HA/R269M；中和试验结果表明，与rSY72相比较，3株突变病毒均能够与两株mAbs发生一定反应；HI试验结果显示，与rSY72相比较，突变病毒rSY72HA/D190N与rSY72免疫鸡血清和猪血清的反应减弱，HI抗体效价分别出现了4倍和8倍的差异，而病毒rSY72HA/M230I和rSY72HA/R269M与两种血清的反应差异不明显，表明HA蛋白190位氨基酸改变对病毒的抗原性影响最为明显；病毒蚀斑测定及复制动力学研究结果发现D190N的氨基酸替换导致病毒rSY72HA/D190N在MDCK细胞上形成的蚀斑减小，而R269M的氨基酸替换导致病毒rSY72HA/R269M在MDCK细胞上的复制能力下降；3个位点的氨基酸替换均未影响病毒的受体结合特性。【结论】HA蛋白190位氨基酸对EA H1N1 SIV抗原性具有决定作用，269位氨基酸突变使得病毒在MDCK细胞上的复制能力降低。这提示在后续开展的病原学监测中要密切关注这些氨基酸的变异情况，提高对动物流感的预警预报。

关键词：猪流感病毒 HA蛋白抗原性

不同种群小菜蛾对4种杀虫药剂的抗性及抗性基因频率

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农药学学报 2000年第3期2卷 25-29页

作者：乔传令王靖黄菁中国科学院动物研究所

用 FAO推荐的点滴法测定了日本、台湾、广州、东莞等地小菜蛾 (Plutella xy-lostella L .)的抗药性。测定结果表明 :日本、广州的小菜蛾对阿维菌素显示出抗药性 ,其抗性比率分别是 4 .85倍和 10 .2 7倍。杀虫药剂抗性基因型频率测定显... 详细信息

用 FAO推荐的点滴法测定了日本、台湾、广州、东莞等地小菜蛾 (Plutella xy-lostella L .)的抗药性。测定结果表明 :日本、广州的小菜蛾对阿维菌素显示出抗药性 ,其抗性比率分别是 4 .85倍和 10 .2 7倍。杀虫药剂抗性基因型频率测定显示 ,广州、广东东莞和北京种群的最高 ,基因型频率分别为 4 1.2 5%、4 1.2 5%和 58.2 3%。研究验证了快速测定杀虫药剂抗性基因型频率的方法 ,并提出了根据不同种群小菜蛾抗性基因型频率所应采取的综合治理策略。

关键词：小菜蛾抗性基因型频率杀虫剂抗性种群农药

不同地区小菜蛾种群的抗药性及酯酶同工酶的研究

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农药学学报 2000年第4期2卷 33-39页

作者：乔传令王靖邢建民中国科学院动物研究所

用淀粉凝胶电泳对中国 3个不同地理区域的小菜蛾种群和台湾敏感品系的抗性水平及酯酶同工酶进行了研究 ,结果发现 :生物测定显示 3个小菜蛾种群对杀虫双均没有明显的抗性 ;对阿维菌素的抗性分别为 1.2 1倍、4 .51倍和 1.2 5倍。在 Estα... 详细信息

用淀粉凝胶电泳对中国 3个不同地理区域的小菜蛾种群和台湾敏感品系的抗性水平及酯酶同工酶进行了研究 ,结果发现 :生物测定显示 3个小菜蛾种群对杀虫双均没有明显的抗性 ;对阿维菌素的抗性分别为 1.2 1倍、4 .51倍和 1.2 5倍。在 Estα和 Estβ基因位点 ,北京种群中存在 11种同工酶 ,其中 4种为 α同工酶 ,7种 β同工酶 ;河北种群中存在 3种 α同工酶 ,5种 β同工酶 ;云南种群中存在 3种 α同工酶 ,3种 β同工酶。 3个种群酯酶基因多态性的产生可能是携带不同抗性酯酶基因的小菜蛾被动运输的结果 ;杀虫双对于能引起酯酶活性升高的杀虫药剂可能无交互抗性。

关键词：小菜蛾抗药性酯酶同工酶遗传多态性蔬菜害虫抗性机制杀虫剂

利用基因工程菌BL21处理有机磷混合农药废水的研究

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环境工程学报 2008年第7期2卷 869-874页

作者：谢珊刘俊新李琳乔传令中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室北京100085 中国科学院动物研究所虫鼠害综合治理研究国家重点实验室北京100101

研究了悬浮状态和固定化状态的基因工程菌BL21对有机磷混合农药废水的降解特性。工程菌能快速、高效地降解有机磷混合农药,其最适底物是对硫磷,而马拉硫磷不能被工程菌降解。不同农药降解速率的差别造成了不同有机磷农药的降解过程需要... 详细信息

研究了悬浮状态和固定化状态的基因工程菌BL21对有机磷混合农药废水的降解特性。工程菌能快速、高效地降解有机磷混合农药,其最适底物是对硫磷,而马拉硫磷不能被工程菌降解。不同农药降解速率的差别造成了不同有机磷农药的降解过程需要用不同的动力学模型来描述。比较固定化状态和悬浮状态的工程菌的降解效果可知,固定化工程菌的降解活性较后者明显降低,其比降解速率大约仅为后者的20%。考察固定化工程菌长期运行的效果,发现其降解活性保存良好,工程菌稳定性大大提高,未出现固定化细胞溶涨、破碎现象。固定化后,工程菌的比降解速率虽然比悬浮工程菌降低了,但固定化工程菌更适用于长期运行的废水处理系统。

关键词：基因工程菌有机磷农药悬浮细胞 PVA固定法降解动力学

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抗性库蚊酯酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

微生物学报 2000年第2期40卷 126-131页

作者：闫艳春乔传令尚宏宇钱传范山东农业大学生命科学学院中国科学院动物研究所北京100080 中国科学院动物研究所 MadisonWI53703.USA 中国农业大学应用化学系

用抗性库蚊酯酶基因,引入原核表达载体pRL439,转化大肠杆菌HB101细胞,获得表达。通过酶切、Southern杂交鉴定重组质粒。研究了重组菌酯酶的活性,重组质粒pRLB1表达的酯酶具有高酶活并能高效降解酯酶的特异性底物α乙酸萘酯(αNA)和β乙... 详细信息

用抗性库蚊酯酶基因,引入原核表达载体pRL439,转化大肠杆菌HB101细胞,获得表达。通过酶切、Southern杂交鉴定重组质粒。研究了重组菌酯酶的活性,重组质粒pRLB1表达的酯酶具有高酶活并能高效降解酯酶的特异性底物α乙酸萘酯(αNA)和β乙酸萘酯(βNA);经对重组菌进行细胞固定化后降解农药三氯杀虫酯(7504),反应时间短。

关键词：酯酶基因基因表达农药污染水体净化抗性库蚊

反转录聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

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畜牧兽医学报 2000年第3期31卷 262-266页

作者：乔传玲郑厚旌甘孟侯林志雄罗长保河南农业大学牧医工程学院郑州450002 中国农业大学动物医学院广州动植物检疫局

本研究成功地建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)的反转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术。根据PRRSV两个标准毒株 (美洲ATCCVR 2 332株及欧洲LV株 )膜蛋白和核衣壳蛋白的编码序列差异 ,自行设计合成了各自的引物 ,对两标准毒株及... 详细信息

本研究成功地建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)的反转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术。根据PRRSV两个标准毒株 (美洲ATCCVR 2 332株及欧洲LV株 )膜蛋白和核衣壳蛋白的编码序列差异 ,自行设计合成了各自的引物 ,对两标准毒株及广州分离株 (CDG9512 )进行扩增 ,获得了预期长度约为 1kb的扩增片段。酶切鉴定 ,结果进一步证实两标准毒株间基因差异显著 ,分离株与美洲株更为接近 ,而不同于欧洲株。对猪伪狂犬病病毒、细小病毒、猪瘟病毒、传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒及空白对照进行扩增 ,结果均为阴性。该技术能检测到病毒达 10 2 .5TCID50的水平。表明RT PCR对PRRSV的检测不仅具有特异、敏感、快速诊断的优点 ,而且还可以对毒株的基因类型加以鉴别。在RT PCR技术检测PRRSV方法上也进行了改进与探讨。

关键词： PRRS 病毒病 RT-PCR 病原检测

NA-MY助剂对玉米萌发及苗期抗旱性的影响

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核农学报 2017年第2期31卷 364-370页

作者：吉庆勋陈涛韩松曹育博鲁锐党永富乔传令河南奈安生物科技股份有限公司/农药副作用及药害防控技术河南省工程实验室河南郑州450001 华南农业大学生命科学学院广东广州510642 中国科学院动物研究所/农业虫鼠害综合治理研究国家重点实验室北京100080

为探究干旱条件下玉米种衣剂功能助剂对玉米种子萌发及幼苗生长的影响,将自行研制NA-MY助剂和种衣剂混合后对郑单958种子包衣,用15%PEG-6000溶液模拟土壤干旱环境,分别测定了干旱胁迫下比拌种衣剂单独包衣,以及NA-MY助剂和比拌种衣剂混... 详细信息

为探究干旱条件下玉米种衣剂功能助剂对玉米种子萌发及幼苗生长的影响,将自行研制NA-MY助剂和种衣剂混合后对郑单958种子包衣,用15%PEG-6000溶液模拟土壤干旱环境,分别测定了干旱胁迫下比拌种衣剂单独包衣,以及NA-MY助剂和比拌种衣剂混合后包衣的玉米种子在萌发及幼苗生长中的各项生理指标。结果表明,干旱胁迫下玉米发芽能力显著低于正常水分条件,幼苗中SOD、POD、CAT活性,相对电导率和MDA含量均增加,但叶绿素a+b含量、类胡萝卜素含量和根系活力降低。NA-MY助剂与比拌种衣剂混合后包衣可显著促进干旱胁迫下玉米种子的萌发和幼苗根系生长,有效提高幼苗活性氧清除系统中抗氧化酶活性和抗氧化物的含量,减少电解质渗出率和MDA的积累。由此可见,应用NA-MY助剂包衣可以减轻干旱胁迫对玉米萌发和幼苗伤害,提高玉米抗旱性。本研究结果为NA-MY助剂在田间的应用提供了参考数据。

关键词： NA-MY助剂包衣干旱胁迫玉米