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线粒体DNA介导细胞焦亡放大肺泡巨噬细胞炎症反应

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中华危重病急救医学 2018年第2期30卷 97-100页

作者：赵宁李勇刘芬江榕邵强胡世林陈家泉钱克俭南昌大学第一附属医院重症医学科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院肿瘤科江西南昌330006

目的观察线粒体DNA（mtDNA）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用，并初步探讨其可能机制。方法提取SD大鼠肝脏组织mtDNA，采用超微量分光光度计及1％琼脂糖凝胶电泳检测其浓度及质量。分离和培养SD大鼠肺泡巨噬... 详细信息

目的观察线粒体DNA（mtDNA）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用，并初步探讨其可能机制。方法提取SD大鼠肝脏组织mtDNA，采用超微量分光光度计及1％琼脂糖凝胶电泳检测其浓度及质量。分离和培养SD大鼠肺泡巨噬细胞，取处于对数生长期的细胞，并将其分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS组、mtDNA组和LPS＋mtDNA组4组，前3组分别在肺泡巨噬细胞培养基中加入等体积的PBS、LPS1mg／L或mtDNA10mg／L刺激6h和12h；LPS＋mtDNA组在肺泡巨噬细胞培养基中加入1mg／LPS刺激6h后再加入10mg／LmtDNA共同刺激6h。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞焦亡关键蛋白Gasdermin D（GSDMD）的表达。结果①所提取的大鼠肝脏组织mtDNA在波长260nm和280nm处的吸光度比值（A260/280）介于1．8-2．0，琼脂糖凝胶电泳可见大小约16kb的单一条带。②LPS、mtDNA分别刺激肺泡巨噬细胞6h和12h后IL-1β、TNF-α含量均较PBS组明显升高。LPS刺激6h后再加入mtDNA共同刺激6h组IL-1β含量较LPS12h组进一步升高（ng／L：366．27±23．35比154．70±23．32，P〈0．01），而TNF-α含量与LPS12h组相比差异无统计学意义（ng/L：836．13±25．01比802．67±30．48，P〉0．05）。⑧LPS组、mtDNA组、LPS＋mtDNA组GSDMD蛋白表达均较PBS组明显升高（GSDMD／β-actin：1．77±0．05、1．65±0．04、2A0±0．05比1．00±0．02，均P〈0．01），且LPS＋mtDNA组GSDMD蛋白表达较LPS组进一步升高（P〈0．01）。结论mtDNA对LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应具有放大作用，其机制可能与mtDNA增加细胞焦亡有关。

关键词：线粒体DNA 细胞焦亡肺泡巨噬细胞炎症反应

脂多糖刺激肺泡上皮细胞分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞的致炎效应

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中华急诊医学杂志 2018年第10期27卷 1126-1131页

作者：丁成志彭巍李勇杨云邵强赵宁陈家泉钱克俭刘芬南昌大学第一附属医院重症医学科南昌330006 南昌大学第一附属医院肿瘤科南昌330006

目的探讨脂多糖（LPS）刺激肺泡上皮细胞（RLE-6TN）分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞（NR8383）的致炎效应。方法运用Transwell共培养体系，将经过不同处理的RLE-6TN细胞（正常组、LPS刺激组、外泌体抑制剂组、外泌体抑制剂预处理＋LPS刺激... 详细信息

目的探讨脂多糖（LPS）刺激肺泡上皮细胞（RLE-6TN）分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞（NR8383）的致炎效应。方法运用Transwell共培养体系，将经过不同处理的RLE-6TN细胞（正常组、LPS刺激组、外泌体抑制剂组、外泌体抑制剂预处理＋LPS刺激组）分别与NR8383细胞共培养，NR8383细胞单培养作为空白对照组，共培养12h后利用荧光定量PCR（qPCR）法检测各组NR8383细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA相对表达量。为进一步探讨肺泡上皮细胞分泌的外泌体对NR8383炎症反应的影响，采用差速超速离心法分别提取实验组外泌体（LPS刺激RLE-6TN细胞分泌的外泌体）和对照组外泌体（正常RLE-6TN细胞分泌的外泌体），运用透射电镜、蛋白免疫印迹鉴定外泌体，用qNano粒子直径分析仪检测外泌体粒子直径。将NR8383细胞分为实验组，对照组，PBS组，分别加入外泌体悬液（10μg／mL，实验组和对照组）和等体积的PBS，培养12h后，用激光共聚焦显微镜观察NR8383细胞对外泌体的吞噬，用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞上清液中炎症因子的IL-1β、TNF-α、IL-6的表达水平。结果①Transwell共培养实验中，与空白对照组相比，LPS组的炎症因子mRNA相对表达量显著升高（P〈0．01），而与LPS组相比，外泌体抑制剂预处理＋LPS组的炎症因子mRNA相对表达量却明显降低（P〈0．01）；②提取的外泌体经过透射电镜观察为圆形或椭圆形囊泡，直径为40-100nm，表达外泌体标志物CD63和CD9；③两组外泌体与NR8383细胞共培养5h后，激光共聚焦显微镜下见胞内散在分布被吞噬的红色荧光外泌体。实验组、对照组外泌体分别作用于NR8383细胞后，与PBS组相比，实验组外泌体引起NR8383细胞炎症因子表达的显著升高（P〈0．01），对照组外泌体则差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡上皮细胞分泌的外泌体能够激活肺泡巨噬细胞产生致炎作用。

关键词：脂多糖外泌体肺泡上皮细胞肺泡巨噬细胞炎症

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11例重症患者应用ECMO院间转运的管理

中国护理管理 2018年第8期18卷 1136-1141页

作者：孙小文张加乐徐思怡邵强刘芬钱克俭江榕南昌大学第一附属医院重症医学科 330006

目的 :总结2016年12月至2018年3月我院应用体外膜肺氧合(Extracorporeal Membrance Oxygenation,ECMO)院间转运重症患者的管理经验。方法 :转运前制定完善的预案,对转运途中可能出现的问题作好应对;转运过程中严密监测患者的生命体征、E... 详细信息

目的 :总结2016年12月至2018年3月我院应用体外膜肺氧合(Extracorporeal Membrance Oxygenation,ECMO)院间转运重症患者的管理经验。方法 :转运前制定完善的预案,对转运途中可能出现的问题作好应对;转运过程中严密监测患者的生命体征、ECMO系统参数等变化,及时处理并发症或意外事件;转运到目的医院后认真交接;自行设计"ECMO重症患者院间转运查检表",防止遗漏要点,以确保转运过程安全有效。结果 :应用ECMO院间转运的11例重症患者经救护车顺利转至我院。转运距离6.5~400.0 km,ECMO运转时间1.0~4.5 h,转运过程中患者呼吸循环稳定,未出现并发症。结论:在完善的仪器设备支持和专业技术团队合作下,应用ECMO院间转运重症患者具有可行性和安全性,可为拯救患者生命争取宝贵时间。

关键词：体外膜肺氧合院间转运重症患者管理

体内转染微小RNA-146a对脓毒症小鼠肺的保护作用

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中华危重病急救医学 2015年第7期27卷 591-594页

作者：张建国丁成志邵强刘芬曾振国聂成钱克俭临沂市人民医院重症医学科山东临沂276003 南昌大学第一附属医院重症医学科江西南昌330006

目的：观察体内转染微小RNA-146a（miR-146a）对脓毒症小鼠肺脏的保护作用。方法选择健康雄性BALB/C小鼠24只，按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组、转染组、转染对照组，每组6只。转染组小鼠经气管内预先滴入转染试剂in vivo-jetPE... 详细信息

目的：观察体内转染微小RNA-146a（miR-146a）对脓毒症小鼠肺脏的保护作用。方法选择健康雄性BALB/C小鼠24只，按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组、转染组、转染对照组，每组6只。转染组小鼠经气管内预先滴入转染试剂in vivo-jetPEITM处理的miR-146a模拟物（agomir），转染对照组滴入in vivo-jetPEITM处理的阴性对照物。转染12 h后采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型；假手术组仅开腹游离盲肠，不进行结扎穿刺。各组于术后24 h处死动物，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测肺组织 miR-146a表达，用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，测定肺组织湿/干质量（W/D）比值，光镜下观察肺组织病理学改变并进行肺损伤病理评分。结果脓毒症组、转染组、转染对照组小鼠肺组织miR-146a表达量分别上调至假手术组的（3.56±0.43）、（27.64±3.46）、（3.72±0.54）倍（P＜0.05或P＜0.01），且转染组miR-146a表达上调量明显高于脓毒症组及转染对照组（均P＜0.01）；而脓毒症组与转染对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。与假手术组比较，脓毒症组、转染组、转染对照组BALF中TNF-α水平均明显升高（ng/L：511.65±43.47、305.74±34.76、492.27±42.21比50.72±7.23，均P＜0.01），转染组TNF-α水平明显低于脓毒症组及转染对照组（均P＜0.01）。与假手术组比较，脓毒症组、转染组、转染对照组肺W/D比值明显升高（6.11±0.32、5.02±0.29、6.05±0.43比4.18±0.10，均P＜0.01），转染组明显低于脓毒症组及转染对照组（均P＜0.01），且转染组肺损伤病理评分较脓毒症组及转染对照组明显下降（分：6.12±0.75比10.53±1.52、9.73±1.08，均P＜0.01）。结论通过体内转染in vivo-jetPEI^TM荷载的miR-146a agomir可以上调脓毒症小鼠肺组织miR-146a表达，减少肺部炎性因子TNF-α的产生，抑制肺部炎症反应，减轻肺组织损伤。

关键词：体内转染微小RNA-146a 脓毒症急性肺损伤

高容量血液滤过对内毒素诱导犬急性肺损伤的治疗作用

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中华急诊医学杂志 2006年第10期15卷 890-893页

作者：刘芬曾振国江榕朱峰聂成钱克俭吕农华南昌大学第一医院附属ICU 南昌330006 南昌大学第一医院消化科南昌330006

目的研究高容量血液滤过(HVHF)对内毒素诱导犬急性肺损伤(ALI)的治疗作用,并探讨其机制。方法选用健康犬16条,经中心静脉注入内毒素(LPS)650μg/kg诱导犬急性肺损伤模型,随机分为两组,对照组采用单纯机械通气+假治疗,治疗组采用机械通气... 详细信息

目的研究高容量血液滤过(HVHF)对内毒素诱导犬急性肺损伤(ALI)的治疗作用,并探讨其机制。方法选用健康犬16条,经中心静脉注入内毒素(LPS)650μg/kg诱导犬急性肺损伤模型,随机分为两组,对照组采用单纯机械通气+假治疗,治疗组采用机械通气+HVHF治疗。监测LPS注入后0h、成模时及HVHF治疗后4h动脉血气。采用放射免疫法测定HVHF治疗后1h、2h、4h循环血TNF-α、IL-6、IL-10的含量。采用RT-PCR法测定肺组织匀浆内TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达。采用流式细胞仪测定肺组织匀浆内NF-(?)B活性。结果动物注入LPS后PaO_2和PaO_2/FiO_2下降,成模时PaO_2/FiO_2小于300。HVHF治疗后PaO_2、PaO_2/FiO_2呈轻度上升,同时点值明显高于治疗组(P＜0．01)。HVHF治疗1h治疗组循环血中TNF-α、IL-6、IL-10的浓度即有明显下降,同时点值低于对照组(P＜0．01)。HVHF治疗4h后,治疗组TNF-α．IL-6、IL-10mRNA的表达及NF-(?)B活性度均下降,低于对照组(P＜0．01)。结论HVHF能通过清除炎症介质．抑制NF-(?)B的活化,从而下调细胞因子的高表达和炎症反应,减轻ALI,为临床治疗ALI提供了一条新途径。

关键词：高容量血液滤过内毒素急性肺损伤机制

应用声门下分泌物引流对ICU机械通气患者综合效果的Meta分析

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中华危重病急救医学 2017年第7期29卷 586-591页

作者：孙小文张加乐江婷汤睿陈霞刘芬钱克俭江榕南昌大学第一附属医院重症医学科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院消毒供应中心江西南昌330006

目的系统评价声门下分泌物引流（SSD）应用于重症加强治疗病房（ICU）机械通气（MV）患者的综合效果.方法应用计算机检索美国国立医学图书馆PubMed数据库、中国知网（CNKI）、万方数据库和维普中文科技期刊数据库（VIP）,收集比较SSD... 详细信息

目的系统评价声门下分泌物引流（SSD）应用于重症加强治疗病房（ICU）机械通气（MV）患者的综合效果.方法应用计算机检索美国国立医学图书馆PubMed数据库、中国知网（CNKI）、万方数据库和维普中文科技期刊数据库（VIP）,收集比较SSD（干预组）与非SSD（对照组）综合效果的随机对照临床试验（RCT）.研究对象为ICU的MV患者,检索时限为2006年1月至2016年12月.由2名评价者按照纳入与排除标准选择文献、提取资料和评价质量后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析,采用Stata 11.0软件进行敏感性分析,并绘制漏斗图,分析纳入文献的发表偏倚.结果初筛共获得1004篇文献,剔除重复文献及不符合纳入标准文献后,共纳入13项研究2052例患者,干预组1021例、对照组1031例.Meta分析显示,与对照组比较,干预组呼吸机相关性肺炎（VAP）发生率明显降低〔相对危险度（RR）=0.54,95%可信区间（95%CI）=0.46~0.64,P〈0.00001〕,MV时间〔均数差（MD）=-3.29,95%CI=-4.53^-2.05,P〈0.00001〕和住院时间（MD=-4.27,95%CI=-7.36^-1.18,P=0.007）均明显缩短;而干预组与对照组患者ICU或住院病死率比较差异无统计学意义（RR=0.89,95%CI=0.73~1.09,P=0.25）.对MV时间的Meta分析中各项研究进行敏感性分析显示,逐项剔除纳入文献后,总体结果未出现显著变化,提示结果较稳定,单个研究不会对总体结果造成显著影响.漏斗图分析结果显示,各纳入研究存在对称性,未见明显发表偏倚.结论 SSD应用于MV患者能有效降低VAP发生率,缩短MV时间和住院时间,但对降低病死率无明显影响.有效应用SSD是预防VAP的重要措施,客观评价SSD的临床综合效果是必要的.

关键词：声门下分泌物引流重症加强治疗病房机械通气 Meta分析

江西地区49例新型冠状病毒肺炎患者临床特征分析

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中国呼吸与危重监护杂志 2020年第2期19卷 154-160页

作者：向天新刘家明许飞程娜刘洋钱克俭张伟南昌大学第一附属医院感控处江西南昌330006 南昌大学第一附属医院骨科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院呼吸与危重症医学科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院感染科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院检验科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院重症医学科江西南昌330006

目的分析江西地区早期收治的新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎)患者临床特征及流行病学特点。方法纳入2020年1月21至27日我院首批收治49例新冠肺炎患者。入院后采集患者流行病学和临床资料,完善血常规、尿常规、大便常规、肝肾功能、电解... 详细信息

目的分析江西地区早期收治的新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎)患者临床特征及流行病学特点。方法纳入2020年1月21至27日我院首批收治49例新冠肺炎患者。入院后采集患者流行病学和临床资料,完善血常规、尿常规、大便常规、肝肾功能、电解质、心肌酶、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、降钙素、凝血、T细胞亚群等实验室检查、胸部CT。根据《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第四版)》的临床分型方法,对比分析普通型与重型/危重型患者的临床特征。结果 49例患者中,普通型40例,重型/危重型9例。46例(93.9%)患者有明确的武汉旅居史或武汉人员接触史。男女性别比为2.06∶1,平均年龄42.9岁。首发症状以发热(78.7%)、咳嗽(38.8%)、乏力(18.4%)为主。28.6%(14例)的患者合并有高血压、糖尿病等内科疾病。入院血清淋巴细胞计数下降、钙离子浓度降低;乳酸脱氢酶、ESR、CRP、血清淀粉样蛋白A升高;而T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)明显下降。47例(95.9%)出现了单发或散在多发的斑片状磨玻璃密度影。与普通型患者相比,重型/危重型患者年龄更大(P=0.023)、就诊时间更晚(P=0.002)、内科合并症更高(P=0.017);ESR(P=0.001)、CRP(P=0.010)和血清淀粉样蛋白A(P=0.040)明显升高;而CD3+(P<0.001)、CD4+(P=0.012)、CD8+(P=0.006)显著下降。肺部CT均表现多肺叶受累,但无统计学差异。结论江西地区首批发病的新冠肺炎以武汉输入为主。重型/危重型患者年龄更大、就诊时间更晚、内科合并症更多、全身炎症反应更为剧烈。

关键词：新型冠状病毒肺炎流行病学临床表现危重症

组蛋白去乙酰化酶抑制剂在脓毒症及急性肺损伤中的作用研究进展

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医学综述 2019年第24期25卷 4840-4844页

作者：凌涛谢佳孙大勇钱克俭深圳市龙岗中心医院急诊科广东深圳518116 南昌大学第一附属医院重症医学科南昌330006

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HADCIs)具有干扰组蛋白去乙酰化酶的功能,可通过提高细胞内组蛋白的乙酰化程度,调控基因转录,在恶性肿瘤的治疗中发挥重要作用。在脓毒症及其相关肺损伤中,HDACIs可发挥抑制炎症反应以及组织器官保护等多重作用... 详细信息

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HADCIs)具有干扰组蛋白去乙酰化酶的功能,可通过提高细胞内组蛋白的乙酰化程度,调控基因转录,在恶性肿瘤的治疗中发挥重要作用。在脓毒症及其相关肺损伤中,HDACIs可发挥抑制炎症反应以及组织器官保护等多重作用,组蛋白乙酰化调控可能成为有价值的脓毒症治疗靶点,其机制包括抑制Toll样受体4-髓样细胞分化因子88-核因子κB/促分裂原活化的蛋白激酶信号通道,下调炎症相关因子释放;通过调控微RNA转录水平抑制炎症相关基因表达;抑制肺泡上皮细胞凋亡等。

关键词：脓毒症急性肺损伤组蛋白去乙酰化酶组蛋白去乙酰化酶抑制剂

主要发达国家基础研究发展策略及对我国的启示

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科技管理研究 2017年第12期37卷 37-41页

作者：钱万强林克剑闫金定李美孙勇魏琦中国农业科学院人事局北京100081 中国农业科学院深圳农业基因组研究所广东深圳518120 中国农业科学院科技管理局北京100081 科学技术部基础研究管理中心北京100086

通过分析美国、日本等发达国家对于基础研究的投入、管理以及发展策略,探讨各具特色的基础研究发展方式。进一步依据发达国家经验,提出对我国基础研究的启示。

关键词：基础研究资助体系国家实验室人才培养