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Effect of Rho/ROCK pathway inhibition on cultured spinal cord astrocytes proliferation

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ROCK抑制剂Y27632对小胶质细胞炎性分泌的影响

中国神经科学学会第十届全国学术会议

作者： Caihong LI Miao LIU peicai fu Xiang LUO Department of Neurology Tongji HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology

Objective To study the effect of Rho/ROCK pathway inhibition by Y27632,a special ROCK inhibitor,on spinal cord astrocytic proliferation in *** Primary cultured rat spinal cord astrocytes were randomly divided into two groups:control group and Y27632 group（treated by DMEM/F12 containing 10%FBS with 10μM Y27632 or with distilled water for control group）.At different time points（0 h,6 h,12 h,24 h,48 h）,the numbers of cells were counted using a hemocytometer,and cell cycle analysis was performed by flow cytometry with prodium iodine（PI）*** expression of cyclin Dl,cyclinE,CDK4,P27 and p-ERK were evaluated by western blot *** incorporation experiments were done to confirm the involvement of ERK signaling pathway in astrocyte cell cycle *** Compared with control group,the percentage of astrocytes in S phase,as well as the number of astroytes were significantly increased in Y27632 group at 6h and 12h（P＜0.05）.Meanwhile,the expression of cyclin Dl,CDK 4,cyclinE and p-ERKl/2 were up-regulated in Y27632 groups at different time points investigated compared with the control *** incorporation was higher in Y27632 groups than that in control groups（P＜0.05）,which was suppressed when U0126,a inhibitor of ERK,was used with *** Rho/ROCK pathway inhibitor Y27632 can remarkably promote proliferation and cell cycle progression of spinal cord astrocyte,in which me ERK signaling cascade was involved.

关键词： Rho/ROCK astrocyte cell cycle proliferation Y27632

来源： cnki会议评论

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中国组织化学与细胞化学杂志 2013年第2期22卷 105-108页

作者：喻志源付佩彩王伟骆翔华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030

目的观察ROCK抑制剂Y27632对小胶质细胞活化及其炎性分泌的作用。方法采用小胶质细胞系BV2细胞复苏后传代培养,分为对照组和Y27632干预组;在0、3h、6h、18h和24h收取细胞和细胞培养基;采用免疫荧光细胞染色测定各组BV2细胞上Iba1的表达,... 详细信息

目的观察ROCK抑制剂Y27632对小胶质细胞活化及其炎性分泌的作用。方法采用小胶质细胞系BV2细胞复苏后传代培养,分为对照组和Y27632干预组;在0、3h、6h、18h和24h收取细胞和细胞培养基;采用免疫荧光细胞染色测定各组BV2细胞上Iba1的表达,ELISA法测定各组培养基中IL-1β和TNF-α的浓度变化。结果 Y27632可明显改变BV2细胞形态,干预组细胞比对照组细胞的胞体更大,细胞突起增多增长,细胞形态改变在干预6h时最为显著。与对照组相比,Y27632干预后BV2细胞分泌的IL-1β和TNF-α降低,在18h时抑制效果最为显著(P<0.01)。结论 ROCK抑制剂Y27632可诱导BV2细胞活化及炎性分泌降低,提示Rho/ROCK信号通路在小胶质细胞活化及炎性因子分泌中发挥了重要作用。

关键词： ROCK 小胶质细胞炎性

临床风险因素和血清学标志物对吉兰巴雷综合征短期预后的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2022年第5期51卷 662-668页

作者：付佩彩毛志娟唐娜聂青李志军华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030

目的探讨吉兰巴雷综合征(GBS)的临床风险因素和不同病程时血清标志物水平变化对患者短期预后的影响。方法收集2016年1月至2021年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科就诊的89例GBS患者的临床资料和血清炎性标志物检测结果... 详细信息

目的探讨吉兰巴雷综合征(GBS)的临床风险因素和不同病程时血清标志物水平变化对患者短期预后的影响。方法收集2016年1月至2021年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科就诊的89例GBS患者的临床资料和血清炎性标志物检测结果,分析其对短期预后的影响。结果纳入GBS患者89例,其中急性炎性脱髓鞘性多发性神经病(AIDP)41例,急性运动轴索型神经病(AMAN)48例。患者平均年龄为(49.13±15.89)岁。83.3%(40/48)AMAN患者在发病前有前驱感染或创伤/手术史(与AIDP组比较,P=0.032)。AMAN组Hughes评分≥3分的患者占66.7%(32/48),25.0%(12/48)因病情危重进入ICU/呼吸支持治疗。AMAN组运动功能受损更严重[Hughes评分(3.02±1.08)分;MRC总分(35.94±15.30)分;与AIDP组比较,均P<0.05]。AMAN组出院时Hughes评分≥3分以上的患者占41.7%(20/48),提示短期预后不良。根据患者入院时的病程分为早期(≤7 d)和急性期(8~21 d)两个时间点,观察血清炎性标志物水平变化。结果显示,AMAN预后较差组在病程早期C反应蛋白(CRP)和白蛋白(Alb)比值(CRP/Alb)、血清补体C3水平较预后较好组明显增高(均P<0.05);血清补体C3在病程急性期仍高于预后较好组(P<0.05)。结论AMAN亚型、前驱感染或创伤/手术史、入院时高Hughes评分及低MRC评分、进入ICU/呼吸支持治疗和抗IgG-抗GM1、IgG-抗GD1b抗体阳性等临床风险因素和病程早期CRP/Alb、血清补体C3水平增高提示GBS患者短期预后不良。

关键词：吉兰巴雷综合征临床风险因素血清炎性标志物短期预后

NKCC1抑制剂布美他尼对大鼠脊髓原代少突胶质前体细胞增殖的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2021年第4期50卷 413-417页

作者：付佩彩叶盛李志军骆翔喻志源华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030

目的研究钠-钾-氯共转运体1(NKCC1)抑制剂布美他尼(Bumetanide)对脊髓原代少突胶质前体细胞(OPCs)增殖的影响及其机制。方法振摇及差速贴壁法培养大鼠脊髓原代OPCs,使用NKCC1抑制剂布美他尼干预。免疫荧光法鉴定细胞及其NKCC1表达;EdU... 详细信息

目的研究钠-钾-氯共转运体1(NKCC1)抑制剂布美他尼(Bumetanide)对脊髓原代少突胶质前体细胞(OPCs)增殖的影响及其机制。方法振摇及差速贴壁法培养大鼠脊髓原代OPCs,使用NKCC1抑制剂布美他尼干预。免疫荧光法鉴定细胞及其NKCC1表达;EdU细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路蛋白p-p38,p-ERK,p-JNK表达。结果免疫荧光实验显示纯化培养的OPCs 95%以上表达NG2+A2B5,且能分化为少突胶质细胞;OPCs 100%表达NKCC1。EdU结果显示,与对照组相比,布美他尼干预6、12和24 h时,OPCs EdU阳性率增高[6 h:(9.00±0.39)%vs.(20.50±0.47)%,12 h:(10.33±0.33)%vs.(20.66±0.48)%,24 h:(11.30±0.34)%vs.(20.87±0.46)%,n=4,均P<0.01];流式细胞术结果显示,与对照组相比,布美他尼干预6、12和24 h时,S期细胞比例增多[6 h:(10.57±0.48)%vs.(19.75±0.32)%,12 h:(10.38±0.54)%vs.(20.12±0.58)%,24 h:(10.53±0.55)%vs.(20.35±0.43)%,n=4,均P<0.01]。Western blot检测显示,与对照组相比,布美他尼干预6、12和24 h时,p-p38表达上升,p-ERK表达下降(均P<0.01),p-JNK无明显差异。结论 NKCC1抑制剂布美他尼促进脊髓原代OPCs增殖,其机制可能是通过上调p38/MAPKs信号通路,下调ERK/MAPKs信号通路来实现。

关键词： NKCC1 布美他尼少突胶质前体细胞细胞增殖 MAPKs

自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑内LINGO-1的表达

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中华医学杂志 2014年第15期94卷 1184-1188页

作者：汪春娟郭守刚屈传强张杰付佩彩唐荣华华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030 山东大学附属省立医院神经内科山东省邹平市人民医院神经内科

目的观察自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠发病后不同时间大脑组织中LINGO-1表达水平的变化。方法将C57／BL6小鼠完全随机化分为EAE模型组（15只）、佐剂组（15只）和对照组（15只），在发病第1、7、14、21、30天取大脑半球组织进行实时定... 详细信息

目的观察自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠发病后不同时间大脑组织中LINGO-1表达水平的变化。方法将C57／BL6小鼠完全随机化分为EAE模型组（15只）、佐剂组（15只）和对照组（15只），在发病第1、7、14、21、30天取大脑半球组织进行实时定量RT—PCR和Western印迹检测，观察LINGO-1的表达差异。同时应用Western印迹检测不同时间点RhoA、RhoA磷酸化形式（P—RhoA）的变化。结果EAE模型组小鼠发病后第1、7、14天LINGO-1mRNA表达水平是对照组的（4．63±0．25）、（2．72±0．12）和（1．98±0．16）倍（P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05），至第30天时接近于对照组（P〉0．05）；模型组LINGO—1蛋白表达在发病后第1、7、14、21、30天分别为对照组的（2.11±0．15）、（3．15±0．09）、（2．45±0．12）、（1．89±0．17）和（1．21±0．05）倍（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．05，P〈0．05，P〈0．05，P〈0．05）；模型组小鼠p-RhoA蛋白表达也呈上调趋势，在造模成功1、7d上调最明显（P〈0．01）。而RhoA蛋白的表达无明显变化。结论LINGO-1在EAE小鼠脑组织中表达上调并呈-定规律性改变，可能通过RhoA激活抑制髓鞘修复。临床上针对多发性硬化的LINGO-1阻断治疗应在发病后尽早进行。

关键词：脑脊髓炎,自身免疫性,实验性多发性硬化 LINGO-1蛋白

临床路径联合病例导入式教学法在神经内科临床带教中的应用分析

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中国医学教育技术 2019年第6期33卷 742-745页

作者：付佩彩李志军华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科

在神经内科临床带教中采用临床路径联合病例导入式教学法,通过基于临床路径的常见病病例导入以及疑难病例导入,增强学员对常见病及疑难病的诊治能力。评估显示,此教学法可激发学员学习兴趣、提高自学能力及学习效率、活跃临床思维,不仅... 详细信息

在神经内科临床带教中采用临床路径联合病例导入式教学法,通过基于临床路径的常见病病例导入以及疑难病例导入,增强学员对常见病及疑难病的诊治能力。评估显示,此教学法可激发学员学习兴趣、提高自学能力及学习效率、活跃临床思维,不仅有助于快速提高学员的临床技能,同时有助于加强教学的科学性和系统性,促进教师临床带教能力的提高。

关键词：神经内科临床路径病例导入式教学疑难病例讨论

NT-3基因修饰OECs-NSCs-复合细胞支架自体移植治疗脑出血的实验研究

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中华医学杂志 2014年第19期94卷 1483-1487页

作者：汪春娟杨锦珊林华伟付佩彩郭守刚唐荣华华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030 山东医学高等专科学校山东大学附属省立医院神经内科济南250021

目的观察神经营养因子-3（NT-3）基因修饰嗅鞘细胞-神经干细胞（OECs-NSCs）复合细胞支架自体移植对脑出血大鼠运动功能的影响.方法建立Wistar大鼠尾状核脑出血模型,完全随机化分为A组：NT-3基因修饰的OECs-NSCs-复合细胞支架移植组;... 详细信息

目的观察神经营养因子-3（NT-3）基因修饰嗅鞘细胞-神经干细胞（OECs-NSCs）复合细胞支架自体移植对脑出血大鼠运动功能的影响.方法建立Wistar大鼠尾状核脑出血模型,完全随机化分为A组：NT-3基因修饰的OECs-NSCs-复合细胞支架移植组;B组：NT3-OECs-NSCs-复合细胞移植组;C组：支架移植组;D组：空白对照组.各组移植后第1、3、7、14和30天进行运动神经功能评分,并经免疫组织化学染色及荧光染色鉴定移植细胞在大鼠脑内的生存、分布及分化情况.结果 A、B组在移植后第7、14、30天神经功能评分分别为（2.12 ±0.12、1.50±0.11、0.52±0.08）、（2.10±0.16、1.79±0.09、0.91±0.10）明显低于C、D组;C组与D组间差异无统计学意义（P＞0.05）.在第14天和第30天,A组评分明显低于B组（P ＜0.05,P＜0.01）.免疫组织化学方法证实A组移植后存活的NSCs数量较多、向损伤区迁徙的细胞较多.结论 NT-3基因修饰OECs-NSCS-复合细胞支架移植治疗能显著改善脑出血大鼠的运动功能,且移植的NSCs具有较强的存活、迁移及分化能力.

关键词：嗅鞘细胞神经干细胞脑出血神经营养因子-3

大鼠少突胶质前体细胞(OPCs)纯化培养及糖氧剥夺(OGD)模型的建立

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中国组织化学与细胞化学杂志 2015年第5期23卷 470-474页

作者：付佩彩黄珊珊唐荣华赵东明华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉430030

目的建立大鼠脑少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)分离纯化培养及糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型。方法出生3d内的SD大鼠乳鼠取脑,经胰蛋白酶消化法培养混合胶质细胞,混合培养10d后,震摇及差速贴... 详细信息

目的建立大鼠脑少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)分离纯化培养及糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型。方法出生3d内的SD大鼠乳鼠取脑,经胰蛋白酶消化法培养混合胶质细胞,混合培养10d后,震摇及差速贴壁法分离纯化OPCs,纯化培养3d后鉴定、诱导分化OPCs为少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)及进一步OGD干预。免疫荧光法鉴定OPCs纯度及分化为OL的能力;MTT法检测OGD(37℃,1%O2,5%CO2)干预0.5h、1h、2h及4h时细胞活力改变,Edu染色检测细胞增殖情况。结果免疫荧光显示纯化培养的OPCs 95%以上表达NG2+A2B5,且可分化为MBP阳性的OL。OGD 2h时,MTT显示细胞活力明显下降,Ed U染色阳性率明显降低。结论震摇及差速贴壁法可获得高纯度的OPCs,且细胞具有分化为OL的能力。2h可作为OPCs OGD模型缺血缺氧损伤合适时间。

关键词：少突胶质前体细胞细胞培养糖氧剥夺 EdU

病例导入式联合BOPPPS教学模式在神经病学临床教学中的应用

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中国继续医学教育 2023年第16期15卷 36-40页

作者：付佩彩叶盛李志军华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科湖北武汉430030 黄冈市黄州区脑血管病医院神经内科湖北黄冈438000

在神经内科临床带教中采用病例导入式教学联合BOPPPS[导言﹙bridge-in,B﹚、学习目标﹙objective,O﹚、前测﹙pre-test,P﹚、参与式学习﹙participatory learning,P﹚、后测﹙post-test,P﹚和总结﹙summary,S﹚]教学模式,将常见病、疑... 详细信息

在神经内科临床带教中采用病例导入式教学联合BOPPPS[导言﹙bridge-in,B﹚、学习目标﹙objective,O﹚、前测﹙pre-test,P﹚、参与式学习﹙participatory learning,P﹚、后测﹙post-test,P﹚和总结﹙summary,S﹚]教学模式,将常见病、疑难病及多学科诊疗病例融入BOPPPS教学模式中,以增强神经内科学员(研究生、规范化培训医师及进修医师)相关疾病诊治能力以及自主学习能力。通过《自主学习能力形成性评价自评表》《教学效果评价表》及临床考核对该教学模式进行效果评价。评估显示此教学模式可提高学员自学能力和学习效率,有助于快速提高学员临床技能,同时有助于加强临床教学的科学性和系统性,促进教师临床带教能力提高。

关键词：神经病学病例导入式教学 BOPPPS教学模式临床教学自主学习能力疾病诊治能力