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Hydrothermal Synthesis and Structure of a New Two-dimensional Zincophosphite: Zn_2(HPO_3)_3·H_2DACH(DACH = 1,2-diaminocyclohexane)

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Chinese Journal of Structural Chemistry 2004年第8期23卷 850-854页

作者： panjian-xin zhengshou-tian yangguo-yu StateKeyLaboratoryofStructuralChemistry FujianInstituteofResearchontheStructureofMatter TheChineseAcademyofSciencesFuzhouFujian350002China

A new open-framework zincophosphite, Zn2(HPO3)3H2DACH 1, was hydro- thermally synthesized in the presence of 1,2-diaminocyclohexane (DACH) as structure-directing agent. Its structure was determined by single-crystal X-ray diffraction and further characterized by FTIR, elemental analysis, powder X-ray diffraction and thermogravimetric analysis. Crystal data for 1: Mr = 486.88, monoclinic, space group P21/c with a = 10.2287(11), b = 9.7624(11), c = 16.1686(18) , b = 92.573(2), V = 1612.9(3) 3, Z = 4, Dc = 2.005 g/cm3, F(000) = 984, = 3.314 mm-1 and S = 1.152. The final R = 0.0473 and wR = 0.1121 for 2456 observed reflections with I > 2s(I). The inorganic layer consisting of four- and eight-membered rings is constructed of alternating ZnO4 tetrahedra and HPO3 pseudo pyramids by sharing vertices. The organic template molecules reside in the interlayer region and interact with the inorganic network through H-bonds.

关键词： zincophosphite hydrothermal synthesis crystal structure open-framework

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EGFR和PD-L1双靶向嵌合抗原受体构建及表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第3期40卷 198-205页

作者：李姝萍王小珏杨斌王和林闫卓红易玲韦攀健金鑫郝建清张洪涛北京市结核病胸部肿瘤研究所中心实验室 101149 首都医科大学附属北京胸科医院肿瘤免疫室 101149 新乡医学院第一附属医院肿瘤内科 453100

目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶... 详细信息

目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定CAR膜表达,ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10 -10 mol/L),EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达EGFR-scFv,检测培养上清存在PD-L1-ScFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,EGFR-CAR中度结合亲和力,此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。

关键词： EGFR-CAR PD-L1-scFv 膜表达型分泌表达型合成生物技术

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EGFR和PD-L1双靶向嵌合抗原受体构建及表达

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结核病与胸部肿瘤 2020年第2期 87-94页

作者：李姝萍 ﹐王小珏 ﹐杨斌 ﹐王和林 ﹐闫卓红易玲 ﹐韦攀健﹐金鑫郝建清张洪涛北京市结核病胸部肿瘤研究所中心实验室 101149 首都医科大学附属北京胸科医院肿瘤免疫室 101149

目的构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联... 详细信息

目的构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆人慢病毒pLVX-EF1.-RES-ZsGreen1表达载体,使用Lent-X Packagng Singie Shots(VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定CAR膜表达,ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1l-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证CAR膜表达。结果获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10^-10 molL),EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTCO537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达EGFR-scFv,检测培养上清存在PD-L1-SeFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。结论成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,EGFR-CAR中度结合亲和力,此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。

关键词： EGFR-CAR PD-LI-scFv 膜表达型分泌表达型合成生物技术

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全人源EGFR单抗的筛选和鉴定

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国际免疫学杂志 2020年第3期43卷 245-251页

作者：李姝萍杨斌金鑫王小珏闫卓红易玲韦攀健王和林郝建清张洪涛北京市结核病胸部肿瘤研究所中心实验室 101149 首都医科大学附属北京胸科医院肿瘤免疫室北京101149 新乡医学院第一附属医院肿瘤内科河南新乡453100

目的:制备全人源表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体,为基于人EGFR靶点的肿瘤免疫调节治疗提供基础制剂。方法:采集110例胸部肿瘤(肺癌102例,乳腺癌8例)患者外周血,构建噬菌体单链抗体库。经噬菌体展... 详细信息

目的:制备全人源表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体,为基于人EGFR靶点的肿瘤免疫调节治疗提供基础制剂。方法:采集110例胸部肿瘤(肺癌102例,乳腺癌8例)患者外周血,构建噬菌体单链抗体库。经噬菌体展示后筛选阳性克隆,测序并构建全长轻重链表达载体质粒,共转染HEK293。通过亲和层析获得纯化抗体,抗原抗体免疫反应测定抗体特异性和敏感性,生物膜干涉(biolayer interferometry,BLI)技术测定抗体亲和力和流式细胞技术(fluorescence activating cell sorter,FACS)检测对肿瘤细胞系EGFR结合活性。结果:成功构建肺癌单链抗体噬菌体库,抗体库库容≥108,筛选获得两株单抗,分别为BTHG17-1,BTHG17-2,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定结合抗原敏感性为10 ng/mL,亲和力在10-8 mol/L水平,两抗体结合相同表位,可特异性结合野生型EGFR和突变体EGFRvⅢ蛋白,具有结合肺癌和神经胶质瘤细胞活性。结论:获得较高亲和力全人源EGFR单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),具有EGFR(包括EGFRVⅢ)特异性,为EGFR靶点封阻和免疫导向治疗研究提供一种新抗体工具。

关键词：肺癌噬菌体抗体库表皮生长因子受体人源抗体

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