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A High-Throughput Screening System for Arabidopsis Transcription Factors and its Application to med25-Dependent Transcriptional Regulation

引用

Molecular Plant 2011年第3期4卷 546-555页

作者： Bin oua Kang-Quan Yin Sai-Nan Liu Yan Yang Tren Gu Jennifer Man Wing Hui Li Zhang Jin Miao Youichi Kondou Minami Matsui Hong-Ya Gu Li-Jia Qu National Laboratory for Protein Engineering and Plant Genetic Engineering College of Life Sciences Peking University Beijing 100871 People's Republic ofChina Plant Science Center RIKEN Yokohama Institute 1-7-22 Suehiro-cho Tsurumi-ku Yokohama City Kanagawa 230-0045 Japan The National Plant Gene Research Center (Beijing) Beijing 100101 People's Republic of China

The activities of transcription factors （TFs） require interactions with specific DNA sequences and other reg- ulatory proteins. To detect such interactions in Arabidopsis, we developed a high-throughput screening system with a Gateway-compatible Gal4-AD-TF library of 1589 Arabidopsis TFs, which can be easily screened by mating-based yeast-one-hybrid （YiH） and yeast-two-hybrid （Y2H） methods. The efficiency of the system was validated by examining two well-characterized TF-DNA and TF-protein interactions： the CHE-CCA1 promoter interaction by YiH and NPR1-TGAs interactions by Y2H. We used this system to identify eight TFs that interact with a mediator subunit, med25, a key reg- ulator in JA signaling. We identified five TFs that interacted with the GCC-box cis-element in the promoter of PDF1.2, a downstream gene of med25. We found that three of these TFs, all from the AP2-EREBP family, interact directly both with med25 and the GCC-box of PDF1.2, suggesting that med25 regulates PDF1.2 expression through these three TFs. These results demonstrate that this high-throughput Y1H/Y2H screening system is an efficient tool for studying transcrip- tional regulation networks in Arabidopsis. This system will be available for other Arabidopsis researchers, and thus it provides a vital resource for the Arabidopsis community.

关键词： Transcription factors Arabidopsis yeast-one-hybrid yeast-two-hybrid med25.

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