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The application of patient-derived induced pluripotent stem cells for modeling and treatment of Alzheimer’s disease

Brain Science Advances 2019年第1期5卷 21-40页

作者： Fabin Han Chuanguo liu Jin Huang Juanli Chen Chuanfei Wei Xiwen Geng Yanming liu Dong Han mengpeng li The Institute for Tissue Engineering and Regenerative Medicine Liaocheng University/Liaocheng People’s HospitalShandong 252000China The Translational Research Lab for Stem Cells and Traditional Chinese Medicine Shandong University of Traditional Chinese MedicineJinanShandong 250355China Key Laboratory of Tissue Repair and Regeneration of PLA and Beijing Key Research Laboratory of Skin Injury Repair and RegenerationThe Fourth Medical Centre of PLA General HospitalBeijing 100048China Shandong Molecular Diagnostics&Cell Therapeutic Biotechnology Corporation Ji’nanShandong 250001China

Alzheimer’s disease(AD)is the most prevalent age-related neurodegenerative disease which is mainly caused by aggregated protein plaques in degenerating neurons of the *** aggregated protein plaques are mainly consisting of amyloidβ(Aβ)fibrils and neurofibrillary tangles(NFTs)of phosphorylated tau *** though the transgenic murine models can recapitulate some of the AD phenotypes,they are not the human cell models of *** breakthrough in somatic cell reprogramming made it available to use induced pluripotent stem cells(i PSCs)for patientspecific disease modeling and autologous transplantation *** i PSCs provide alternative ways to obtain specific human brain cells of AD patients to study the molecular mechanisms and therapeutic approaches for familial and sporadic forms of *** differentiation into neuronal cells,i PSCs have enabled the investigation of the complex aetiology and timescale over which AD develops in human ***,we first go over the pathological process of and transgenic models of *** we discuss the application of i PSC for disease model and cell *** last the challenges and future applications of i PSCs for AD will be summarized to propose cell-based approaches for the treatment of this devastating disorder.

关键词： Alzheimer’s disease(AD) induced pluripotent stem cell(iPSC) amyloid-beta plaque(Aβplaque) neural stem cell(NSC) transplantation mutation

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肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因6的表达促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721的增殖和迁移

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转化医学杂志 2017年第1期6卷 6-11,15页

作者：陈潇林志娟李孟鹏陈超王建勋刘佳李培峰青岛大学转化医学研究院山东青岛266071 青岛大学药学院山东青岛266071

目的观察肌细胞增强因子2D(myocyte enhancer factor 2D,MEF2D)对肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移的影响,并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因6(mitogen-induced gene 6,MIG6)的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链... 详细信息

目的观察肌细胞增强因子2D(myocyte enhancer factor 2D,MEF2D)对肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移的影响,并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因6(mitogen-induced gene 6,MIG6)的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测肝癌细胞中MEF2D和MIG6转录水平的表达,以MEF2D mRNA表达量作为横坐标,以MIG6 mRNA表达量作为纵坐标,制作线性相关图;用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在PLC/PRF5细胞中下调MEF2D和MIG6后,通过细胞增殖与毒性测定试剂盒(7Sea-Cell Counting Kit,7Sea-CCK)和细胞划痕法检测肝癌细胞增殖和迁移能力;用siRNA在PCL/PRF5细胞中下调MEF2D、用MEF2D过表达质粒在SMMC7721细胞系中上调MEF2D后,通过蛋白印迹检测法分别检测MEF2D和MIG6的蛋白质表达水平。根据实验,共分为阴性对照(negative control,NC)组、siMIG6组、siMEF2D组、si2M(同时下调MIG6和MEF2D)组、空白对照组、空载对照组、MEF2D组7组。结果肝癌细胞hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、HepG2、7703、Huh7、Bel-7402中MEF2D mRNA、MIG6 mRNA表达水平呈现负相关关系(r=-0.78)。细胞增殖实验,24 h和48 h时,下调MIG6或MEF2D后,与NC组比较,siMIG6组或siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化;同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化72 h时,各组间方差分析差异有统计学意义(F=20.68、P<0.01);下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著增强[光密度(optical density,OD)值为3.73±0.18,t=3.84、P=0.02];下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著下降(OD=1.79±0.22,t=3.95、P=0.02);同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力增强(OD=2.99±0.03,t=4.83、P<0.01)细胞划痕实验,各组间方差分析差异有统计学意义(F=42.27、P<0.01);48 h时,下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著增强[细胞迁移率为(51±4)%,t=3.22、P<0.05)];下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著下降[细胞迁移率为(19±3)%,t=7.70、P<0.01];同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞迁移能力增强[细胞迁移率为(46±3)%,t=6.99、P<0.01]。蛋白质印迹检测,下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞M1G6蛋白表达水平显著上升(t=7.86、P<0.001);上调MEF2D后,与空载对照组比较,MEF2D组中SMMC7721细胞MIG6蛋白表达水平显著下降(t=4.61、P=0.004)。结论肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721中MEF2D和MIG6表达量呈负相关关系,MEF2D很可能通过负向调控MIG6的表达从而促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移。

关键词：肌细胞增强因子2D 有丝分裂诱导基因6 肝细胞癌负向调控细胞增殖细胞迁移

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长链非编码RNA punisher对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制

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转化医学杂志 2016年第6期5卷 339-343,380页

作者：李孟鹏于涛陈潇唐宁宁杨艳艳张银凤王昆王建勋李培峰青岛大学转化医学研究院山东青岛266071

目的探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)punisher与动脉粥样硬化的关系及其对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 12只健康纯种雄性8周龄载脂蛋白E(apolipoprotein E,Apo E)基因敲除小鼠(Apo E-/-小鼠),通过高脂饲... 详细信息

目的探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)punisher与动脉粥样硬化的关系及其对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 12只健康纯种雄性8周龄载脂蛋白E(apolipoprotein E,Apo E)基因敲除小鼠(Apo E-/-小鼠),通过高脂饲喂制作动脉粥样硬化模型小鼠(模型组);12只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;人体血管平滑肌细胞系根据转染情况分为小干扰-punisher组和阴性对照(negative control,NC)组。通过荧光定量聚合酶链反应测定模型组与对照组小鼠主动脉弓的punisher表达。通过合成punisher的小干扰RNA作为反向对照抑制punisher在人血管平滑肌细胞中的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应验证punisher表达情况;分别采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、划痕实验及流式细胞术检测抑制punisher表达对人血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase3)、caspase8、p-p38、p53凋亡相关蛋白的表达。结果 1血脂4项及血管苏木精-伊红染色证明造模成功。荧光定量聚合酶链反应显示,动脉粥样硬化模型组小鼠血管punisher表达高于对照组(P<0.05);2CCK-8检测显示小干扰-punisher组的光密度值在转染36 h之后低于NC组(t36=2.683、P<0.05,t48=2.554、P<0.05);划痕实验显示小干扰-punisher组细胞迁移低于NC组(t=3.136、P<0.05);3流式细胞术显示,小干扰-punisher组中凋亡细胞数占比多于NC组(22.6%和11.7%,χ2=4.245、P<0.05);4蛋白印迹法显示小干扰-punisher组Bcl-2、caspase3-30×103、p53蛋白表达水平明显低于NC组(t分别为9.546、5.647、5.42,P<0.05),caspase3-17×103蛋白表达水平高于NC组(t=4.892、P<0.05)。结论沉默lncRNA punisher可以促进血管平滑肌细胞的凋亡并抑制其增殖。

关键词：长链非编码RNA 动脉粥样硬化细胞凋亡血管平滑肌细胞

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人体皮肤成纤维细胞的快速分离及多向分化能力鉴定

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中华细胞与干细胞杂志（电子版） 2019年第5期9卷 267-275页

作者：魏传飞王伟刘延明段婧芦现杰王琰张男李孟鹏陈超章阳佟加贝韩发彬聊城大学/聊城市人民医院组织工程与再生医学研究所聊城252000 山东美加赛培生物科技有限公司济南250000 山东大学第二医院转化医学研究所济南250000

目的建立快速分离人皮肤成纤维细胞的方法,并探讨成纤维细胞在成脂、成骨、成软骨和成神经的多向分化潜能。方法利用组织块培养法分离人体皮肤成纤维细胞,通过形态学观察、流式分析、Vimentin 蛋白染色鉴定成纤维细胞;再利用生长曲... 详细信息

目的建立快速分离人皮肤成纤维细胞的方法,并探讨成纤维细胞在成脂、成骨、成软骨和成神经的多向分化潜能。方法利用组织块培养法分离人体皮肤成纤维细胞,通过形态学观察、流式分析、Vimentin 蛋白染色鉴定成纤维细胞;再利用生长曲线、核型分析、线粒体染色分析不同传代细胞的增殖速度,线粒体及染色体形态的改变;最后进行成纤维细胞成脂、成骨、成软骨和成神经的诱导分化实验,鉴定其多向分化潜能。两代细胞增殖速度及线料体相对量的比较采用 t 检验统计分析。结果分离的皮肤成纤维细胞呈典型梭状及多角形;高表达细胞表面标记物 CD90(NCF1,NCF2占比分别为 99.9,98.7)和 CD73(NCF1,NCF2占比分别为98.2,85.6),但极少表达造血干细胞标记物 CD34(NCF1,NCF2占比分别为 1.8,2.6);细胞 Vimentin 蛋白表达呈阳性,阳性率为100;对细胞生长曲线进行分析,表明分离后不同代次细胞增殖差异无统计学意义(t=1.586,P =0.1567);线粒体相对含量统计分析,同一株细胞系第5代(相对荧光强度值: 6876±577.8)与第 10 代(相对荧光强度值:7371±471.9)之间的差异无统计学意义(t = 0.664,P = 0.543);核型分析分别显示传代后保持染色体数目为正常 46 条且形态无明显异常;经诱导后成纤维细胞可向成脂、成骨、成软骨和类神经分化。结论利用组织块培养法分离出的人体皮肤成纤维细胞状态稳定,增殖能力强,具有成脂、成骨、成软骨和成神经多向分化诱导潜能,为细胞移植修复骨损伤、软骨损伤和神经损伤性疾病的临床研究提供细胞来源及实验依据。

关键词：皮肤成纤维细胞组织块培养法流式分析多向分化

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当量分析方法及其在生态养殖效益分析中的应用

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生态学杂志 1996年第4期15卷 47-50页

作者：李湘阁闵庆文杨智江梦朋南京气象学院应用气象学系 210044 江苏省江浦县多种经营局 211800

通过物质、能量与价值的流量分析,对生态系统进行结构、功能与效益的分析和评价,是生态系统分析的重要方法,也是当前农业气象学研究的重要内容之一。但是对这些流量效率(即流出系统量与流入系统量之比)的评价与判断,通常是用实际效率与... 详细信息

通过物质、能量与价值的流量分析,对生态系统进行结构、功能与效益的分析和评价,是生态系统分析的重要方法,也是当前农业气象学研究的重要内容之一。但是对这些流量效率(即流出系统量与流入系统量之比)的评价与判断,通常是用实际效率与预定效率(计划指标)对比,用当年效率与往年效率对比,或用本单位效率与其他同类单位效率对比来进行。这些方法由于缺乏统一的对比标准,往往难以反映不同生态系统流量效率的高低。本文根据农业生态学原理,利用当量分析的方法,提出流量当量指数的概念,并通过物流、能流当量指数的计算,以单项目生产流量效率试验结果作为参照,对江浦县生态养殖试验示范场的部分流量效率进行分析,从而得出该复合生态系统的效益状况,使之具有更明确的效益意义。

关键词：农业生态学当量分析生态养殖益效分析

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天然气管道曲线式顶管穿越富春江

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石油工程建设 2016年第6期42卷 32-36页

作者：程梦鹏李胜新廖萧李龙姜涛中国石油天然气管道工程有限公司河北廊坊065000 中国石油天然气管道局第四工程分公司河北廊坊065000

杭州天然气利用工程S16富阳支线4标段高压管道由北往南穿越富春江。由于富春江穿越工程地质条件复杂,两次定向钻穿越均未成功。经专家论证改用顶管穿越方案,顶管内径2.4 m,顶管全长653.32 m。为降低竖井深度,缩短工期,降低工程投资,该... 详细信息

杭州天然气利用工程S16富阳支线4标段高压管道由北往南穿越富春江。由于富春江穿越工程地质条件复杂,两次定向钻穿越均未成功。经专家论证改用顶管穿越方案,顶管内径2.4 m,顶管全长653.32 m。为降低竖井深度,缩短工期,降低工程投资,该穿越设计超常规采用了大坡度的U型顶管曲线设计。在介绍了场地环境和水文地质条件的基础上,较详细地论述了顶管纵断面设计、顶管竖井设计、顶进管节形式等内容;而后概括性地阐述了顶管穿越地层的特点、顶管施工难点分析、顶管施工的主要机具配置与技术措施等关键技术内容。施工实践证明,工程采用的竖向曲线顶管方案与目前普遍采用的竖向水平顶管方案相比,始发井深度减小约30 m,接收井深度减小约20 m,直接降低两侧竖井的工程费用近千万元,缩短施工周期至少60 d。该工程采用超常规设计与施工方案,开创了国内岩石段大坡度竖向曲线顶管的先河,对今后类似的工程具有一定的借鉴意义。

关键词：天然气管道顶管曲线穿越富春江

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一次谐波锁频的快速光腔衰荡光谱检测

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光学精密工程 2022年第4期30卷 363-371页

作者：胡迈陈祥张辉胡梦鹏金文玲李萌阚瑞峰中国科学院合肥物质科学研究院安徽光学精密机械研究所安徽合肥230031 中国科学技术大学安徽合肥230026 中国科学院长春光学精密机械与物理研究所吉林长春130033 哈尔滨工业大学可调谐激光技术国家级重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本文介绍了一种赫兹级响应速率的光腔衰荡光谱探测大气痕量气体的检测技术。将100 MHz正弦波调制信号加载在电光相位调制器上产生边带,用混频器提取载波与边带通过3 m气体吸收池后拍频所产生的一次谐波作为误差信号,实现了1572 nm分布... 详细信息

本文介绍了一种赫兹级响应速率的光腔衰荡光谱探测大气痕量气体的检测技术。将100 MHz正弦波调制信号加载在电光相位调制器上产生边带,用混频器提取载波与边带通过3 m气体吸收池后拍频所产生的一次谐波作为误差信号,实现了1572 nm分布式反馈激光器对于二氧化碳气体分子6361.25 cm^(-1)处超精细跃迁线的频率锁定。采用波分复用方法对空腔衰荡时间和有气体吸收时的衰荡时间进行同时测量,在330 mm光学谐振腔上得到了4.82×10^(-10) cm^(-1)的系统检测限。在较大的二氧化碳浓度范围内,系统具有良好的线性响应,线性相关系数大于0.9999。系统长时间的观测结果与Picarro商用仪器的数据高度吻合,二者偏差小于1.0%。该系统论证了一次谐波锁定激光频率至分子超精细跃迁线并用于光腔衰荡光谱系统实现快速痕量气体检测的可行性。

关键词：相位调制一次谐波锁频光腔衰荡光谱快速痕量气体检测

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理实一体化法在消化道出血教学中的应用

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中国继续医学教育 2023年第11期15卷 123-127页

作者：王雪敏李琼陈春香刘秀静韩新强王柱赵梦鹏滨州医学院附属医院消化内科山东滨州256603 滨州医学院附属医院介入血管外科山东滨州256603

目的探讨内外科课程整合背景下理实一体化教学法在消化道出血教学中的实施效果。方法选择2021年1—9月在滨州医学院附属医院见习的2018级临床医学五年制本科专业64名学生作为研究对象,随机分为试验组(理实一体化教学法)与对照组(传统方... 详细信息

目的探讨内外科课程整合背景下理实一体化教学法在消化道出血教学中的实施效果。方法选择2021年1—9月在滨州医学院附属医院见习的2018级临床医学五年制本科专业64名学生作为研究对象,随机分为试验组(理实一体化教学法)与对照组(传统方法教学法),各32名。比较两组学生理论成绩及对教学的满意度。结果试验组学生理论成绩得分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组学生对教师表现及教学设计有更高的评价及接受程度,差异有统计学意义(96.88%vs.81.25%,P<0.05;93.75%vs.75.00%,P<0.05)。结论通过内外科课程整合的理实一体化教学法在临床医学本科专业消化道出血教学中应用效果优于传统教学法,更有利于增强医学生的学习效率和知识掌握能力。

关键词：课程整合内科学外科学消化系统消化道出血理实一体化教学模式

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勐腊县木棉腐木昆虫多样性的初步研究

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林业调查规划 2013年第1期38卷 45-49,65页

作者：林平李国锋西双版纳州国家级自然保护区云南勐腊666300 云南林业职业技术学院云南昆明650224

2012年7～8月,分别对西双版纳州勐腊县的曼旦村、补蚌村、勐仑镇、勐捧农场4个地点的木棉腐木进行昆虫种群结构及多样性的抽样调查研究,共采集昆虫标本875只,经鉴定隶属7目23科39种。物种数以隐翅虫科最多,蚁科次之,弯翅蠊科、蜚蠊科、... 详细信息

2012年7～8月,分别对西双版纳州勐腊县的曼旦村、补蚌村、勐仑镇、勐捧农场4个地点的木棉腐木进行昆虫种群结构及多样性的抽样调查研究,共采集昆虫标本875只,经鉴定隶属7目23科39种。物种数以隐翅虫科最多,蚁科次之,弯翅蠊科、蜚蠊科、球螋科、丝尾螋科、驼螽科、猎蝽科、葬甲科、阎甲科、叩甲科、大蕈甲科、拟步甲科、锹甲科、长角象科、锥象科、小蠹科、鼻白蚁科最少。个体数量以鼻白蚁科最多,其次为隐翅虫科,猎蝽科最少。各采集点的多样性指数和物种丰富度排序为:勐仑镇>勐捧农场>曼旦村>补蚌村。

关键词：腐木昆虫木棉物种多样性勐腊县

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西双版纳橡胶盔蚧天敌调查

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植物保护 2007年第4期33卷 100-103页

作者：王进强李国华周明吴忠华张春霞阿红昌云南省热带作物科学研究所景洪666100

通过对西双版纳州各大国有农场(景洪、勐养、勐捧、勐腊、橄榄坝、东风)、民营胶园(三达山、嘎栋、嘎洒、勐罕)及西双版纳热带花卉园内幼林地的调查,初步了解到橡胶盔蚧的天敌31种,其中云南省天敌新记录9种,分为2个纲、7个目、11个科,... 详细信息

通过对西双版纳州各大国有农场(景洪、勐养、勐捧、勐腊、橄榄坝、东风)、民营胶园(三达山、嘎栋、嘎洒、勐罕)及西双版纳热带花卉园内幼林地的调查,初步了解到橡胶盔蚧的天敌31种,其中云南省天敌新记录9种,分为2个纲、7个目、11个科,其中优势种为普通草蛉、川上座壳孢和寄生蜂,分别占天敌总量的26.43%、32.35%和27.48%。比较有利用前景的为普通草蛉和寄生蜂。

关键词：橡胶盔蚧天敌调查

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