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重组人热休克蛋白70生物活性的快速鉴定

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新乡医学院学报 2002年第1期19卷 29-30,33页

作者：杨瑞杨献军田玉慧岳汉军王辉新乡医学院分子生物研究室河南新乡453003

目的　快速鉴定纯化后的重组人热休克蛋白 70 (rHSp70 )的特异性及其是否具有生物活性。方法　将rHSp70与肿瘤细胞内的小分子多肽在一定条件下温育 ,并利用含 5 %甘油的Nativepage电泳分析。结果　可快速鉴定出rHSp70是否具有生物活性 ... 详细信息

目的　快速鉴定纯化后的重组人热休克蛋白 70 (rHSp70 )的特异性及其是否具有生物活性。方法　将rHSp70与肿瘤细胞内的小分子多肽在一定条件下温育 ,并利用含 5 %甘油的Nativepage电泳分析。结果　可快速鉴定出rHSp70是否具有生物活性 ,电泳后凝胶可做Western -blot特异性鉴定。结论　该法操作简便 ,重复性好 ,既可快速鉴定rhsp70的生物活性。

关键词：重组人热休克蛋白70 抗原肽非变性凝胶电脉生物活性

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牦牛、犏牛乳中β-乳球蛋白多态及表达差异

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西南民族大学学报（自然科学版） 2003年第1期29卷 99-102页

作者：徐亚欧梁梓朴影杨易郑玉才西南民族学院生命科学与技术学院成都610041

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(page)对麦洼牦牛(包括半奶牦牛)、犏牛及黑白花奶牛乳中β-乳球蛋白(β-LG)遗传变异体进行分析,结果显示β-LG在牦牛、半奶牦牛中BE型占优势,有少数EE型,没有发现A基因.犏牛中BE型占优势,有少数AB型.黑白花奶牛... 详细信息

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(page)对麦洼牦牛(包括半奶牦牛)、犏牛及黑白花奶牛乳中β-乳球蛋白(β-LG)遗传变异体进行分析,结果显示β-LG在牦牛、半奶牦牛中BE型占优势,有少数EE型,没有发现A基因.犏牛中BE型占优势,有少数AB型.黑白花奶牛中AB型占优势有AA型,BB型、AB型。没有E基因.用酶联免疫方法测定牛乳中β-LG含量,在不同品种牛中存在总量和各基因型间的差异.各基因在不同牛种的表达存在着差异.

关键词：牦牛犏牛乳 β-乳球蛋白遗传多态性基因表达

人结核分支杆菌HSp70的原核表达质粒的构建及诱导表达

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新乡医学院学报 2002年第5期19卷 355-359页

作者：杨瑞田玉慧高革杨献军新乡医学院分子生物研究室河南新乡453003 新乡医学院分析测试研究室河南新乡453003

目的　构建编码人结核分支杆菌 (TB)热休克蛋白 70 (HSp70 )的Dnak基因的重组原核表达质粒 ,并研究其表达动力学。方法　质粒pMT70用限制性内切酶消化、核酸体外扩增 (pCR)及末端修饰后可获得Dnak基因全长 ,与大肠杆菌质粒 pRSET连接重... 详细信息

目的　构建编码人结核分支杆菌 (TB)热休克蛋白 70 (HSp70 )的Dnak基因的重组原核表达质粒 ,并研究其表达动力学。方法　质粒pMT70用限制性内切酶消化、核酸体外扩增 (pCR)及末端修饰后可获得Dnak基因全长 ,与大肠杆菌质粒 pRSET连接重组 ,阳性克隆经酶切分析鉴定后即为质粒 pMT70 3,转入受体菌BL2 1DE3中 ,经诱导剂异丙基硫代 - β -D-半乳糖 (IpTG)诱导 ,由SDS -page、Western -blot鉴定 ,并以薄层扫描分析。结果　重组表达质粒 pMT70 3构建成功 ,可在大肠杆菌中高效表达 ,诱导后 1h即开始表达 ,16h达高峰期。表达量占菌体总蛋白的 6 5 % ,可溶性产物占总表达量的 90 %。结论　pMT70 3质粒不仅构建成功且更有利于对分支杆菌HSp70蛋白的纯化 ,方便对其抗结核。

关键词：结核分支杆菌原核表达热休克蛋白70 质粒核酸体外扩增限制性内切酶