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Sequence homolog-based molecular engineering for shifting the enzymatic pH optimum

Synthetic and Systems Biotechnology 2016年第3期1卷 195-206页

作者： Fuqiang Ma Yuan Xie manjie luo Shuhao Wang You Hu Yukun Liu Yan Feng Guang-Yu Yang State Key Laboratory of Microbial Metabolism School of Life Sciences and BiotechnologyShanghai Jiao Tong University800 Dongchuan RoadShanghai200240China School of Statistics East China Normal UniversityShanghai 200241China Shanghai Collaborative Innovation Center for Biomanufacturing(SCICB) East China University of Science and Technology130 Meilong RoadShanghai 200237China

Cell-free synthetic biology system organizes multiple enzymes(parts)from different sources to implement unnatural catalytic *** adaption between the catalytic parts is crucial for building up efficient artificial biosynthetic *** engineering is a powerful technology to tailor various enzymatic properties including catalytic efficiency,substrate specificity,temperature adaptation and even achieve new catalytic ***,altering enzymatic pH optimum still remains a challenging *** this study,we proposed a novel sequence homolog-based protein engineering strategy for shifting the enzymatic pH optimum based on statistical analyses of sequence-function relationship data of enzyme *** two statistical procedures,artificial neural networks(ANNs)and least absolute shrinkage and selection operator(Lasso),five amino acids in GH11 xylanase family were identified to be related to the evolution of enzymatic pH ***-directed mutagenesis of a thermophilic xylanase from Caldicellulosiruptor bescii revealed that four out of five mutations could alter the enzymatic pH optima toward acidic condition without compromising the catalytic activity and *** of the positive mutants resulted in the best mutant M31 that decreased its pH optimum for 1.5 units and showed increased catalytic activity at pH<5.0 compared to the wild-type *** analysis revealed that all the mutations are distant from the active center,which may be difficult to be identified by conventional rational design ***,the four mutation sites are clustered at a certain region of the enzyme,suggesting a potential“hot zone”for regulating the pH optima of *** study provides an efficient method of modulating enzymatic pH optima based on statistical sequence analyses,which can facilitate the design and optimization of suitable catalytic parts for the construction of complicated cell-free synthetic biology systems.

关键词： enzymatic optimum shifting

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颏下岛状皮瓣在保留喉功能的下咽癌手术中应用

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中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2024年第4期32卷 279-282页

作者：吴麟罗伟江满杰许莉陈伟施涛季俊峰刘厚军王志颐相芳东部战区总医院耳鼻咽喉头颈外科江苏南京210002

目的探讨颏下岛状皮瓣在保留喉功能的下咽癌手术中的应用。方法回顾分析30例梨状窝癌行保留喉功能下咽肿瘤切除颏下岛状皮瓣修复的综合治疗的临床资料。结果30例患者行手术患者,利用颏下岛状皮瓣在保留喉功能行下咽癌切除术中缺损进行修... 详细信息

目的探讨颏下岛状皮瓣在保留喉功能的下咽癌手术中的应用。方法回顾分析30例梨状窝癌行保留喉功能下咽肿瘤切除颏下岛状皮瓣修复的综合治疗的临床资料。结果30例患者行手术患者,利用颏下岛状皮瓣在保留喉功能行下咽癌切除术中缺损进行修复,术后颏下皮瓣均成活,其中4例皮瓣术后局部瘀血部分坏死,皮瓣延迟愈合;无1例咽漏发生;全部患者恢复经口饮食时间为术后34±11d;全部患者拔气管导管时间为术后93±21d。30例患者中,单纯手术5例,术后放疗7例,放疗+化疗18例。患者随访时间10~78个月,失访3例。本组病例术后生存曲线,2、3、5年生存率分别为75.3%、50.8%、43.7%;局部复发伴淋巴结转移8例;肺转移癌6例;食管癌4例;无瘤生存者16例;带瘤生存者7例;死亡4例。结论颏下岛状皮瓣修复下咽肿瘤切除后的缺损,具有皮肤组织量较大,血供确切,抗感染能力强,制作相对简单等诸多优点,适合梨状窝癌半喉侵犯行喉功能保留肿瘤切除术,严格把握适应证,提高患者生活质量。

关键词：下咽肿瘤喉功能外科皮瓣外科手术颏下瓣

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