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Cloning and Expression of HIV-1 p24 Gene in Insect Cells by Using BAC-TO-BAC System

Wuhan University Journal of Natural Sciences 1998年第1期3卷 113-118页

作者： mallam nock joshua Qi Yipeng Huang Yongxiu Liu Ziye College of Life Sciences Wuhan University Wuhan China

Recombinant transposing vector pFHIV24 was constructed by cloning the HIV-1 p24 gene into the Multiple cloning site (MCS) of the transposing vector pFastBac1 in the correct orientation with respect to the polyhedrin promoter. Recombinant bacmid bHIV24 was obtained by transposing a mini-att Tn7 element from the recombinant pFHIV24 to the mini-att Tn7 attachment site on the bacmid by Tn7 transposition functions provided by the helper plasmid. Minipreparation of recombinant bacmid DNA was transfected intoSpodoptera frugiperda (Sf9) cells to get the recombinant virus. Fresh insect Sf9 cells were infected with the recombinant virus containing p24 to express the target protein. The target protein expressed was analyzed on a 15% polyacrylamide gels and then used as antigen to check HIV-1 positive serum by ELISA. Our positive result shows that the expressed p24 protein could be used as standard antigen for HIV-1 diagnosis by ELISA and other reliable diagnostic methods of HIV-1 infection.

关键词： cloning expression baculovirus antigen antibody ELISA

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Nucleotide　Sequence　of　Polyhedrin　Gene　of　LsNPV　and　Analysis　of　Baculovirus　Polyhedron　Proteins

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Wuhan University Journal of Natural Sciences 1996年第2期1卷 272-278页

作者： Wang Jiawang Qi Yipeng Deng Yanhui mallam nock joshua Institute of Virology Wuhan University Wuhan China

The intact 741 hp polyhedrin gene of LsNPV was sequenced by Silver Sequencing System, and shares 90.6% and 97.0% nucleotide identity, 97.2% and 97. 6% amino acid identity with PfNPV and MdNPV polh genes respectively. The 14 hp conservative sequence with the core element GTAAG,is located in the 5'untranslated region of the gene. The polh gene was predicted to encodes a 246 amino sold residures with molecular weight of 29.0 kd, in which the number of acidic amino acids and alkaline amino acids was roughly equal resulting in almost no charges in polyhedrin protein molecule and hence occlusion body. It gives a valuable implication that ionic bonds as well as hydrophobic bonds and hydrogen bond may Play an important role in the crystallization or polyhedrin, by comparing amino acid variation of twenty-one polyhedrin. The comparison of promoter regions of polyhedrin gene and class Ⅲ gene shown that they are very similar, but also have differences in GC *** could explain that both categories of gene are highly expressed, and polyhedrin genes are expressed more higher than class Ⅲ gene.

关键词： LsNPV baculovirus polyhedrin gene sequence homology

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杆状病毒p35基因延缓昆虫细胞凋亡

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武汉大学学报（自然科学版） 1998年第4期44卷 501-505页

作者：李小峰齐义鹏林宏 mallam nock joshua 李燕李志达武汉大学生命科学学院

构建了以新霉素抗性基因为筛选标记的带有ｐ３５基因的转移载体ｐ３５ＩＥ１Ｎｅｏ，以此载体转染Ｓｆ９细胞，经Ｇ４１８筛选得到染色体上稳定整合质粒ｐ３５ＩＥ１Ｎｅｏ的Ｓｆ９细胞，克隆化培养后取名为Ｓｆ９－３５．经细胞原位杂... 详细信息

构建了以新霉素抗性基因为筛选标记的带有ｐ３５基因的转移载体ｐ３５ＩＥ１Ｎｅｏ，以此载体转染Ｓｆ９细胞，经Ｇ４１８筛选得到染色体上稳定整合质粒ｐ３５ＩＥ１Ｎｅｏ的Ｓｆ９细胞，克隆化培养后取名为Ｓｆ９－３５．经细胞原位杂交实验证明，Ｓｆ９－３５细胞的染色体ＤＮＡ上含有ｐ３５基因；经放线菌素Ｄ处理后的细胞核酸电泳检测，证实Ｓｆ９－３５具有抗凋亡特性能够支持凋亡抑制基因缺失的ｖＡｃΔｐ３５病毒复制；发现ｐ３５基因在细胞内组成型表达只能延缓ｖＡｃΔｐ３５感染及放线菌素Ｄ处理诱发的细胞凋亡的过程，而不能完全阻止其诱发的细胞凋亡．

关键词：抗凋亡细胞凋亡 p35基因杆状病毒病毒感染

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含有报告基因GFP(绿色荧光蛋白)的E1B缺陷的腺病毒在人类肿瘤细胞中的选择性复制

含有报告基因GFP(绿色荧光蛋白)的E1B缺陷的腺病毒在人类肿瘤细胞...

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中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会

作者：齐义鹏 mallam nock joshua 邱松波兰萍肖庚富 Boublenza Lamia 武汉大学病毒研究所

由于人类腺病毒(ADV)在基因治疗和基因转移方面,活体病毒疫苗方面,哺乳动物细胞蛋白质表达方面的潜在应用,因而得到人们的广泛关注。E1B基因编码19KD和55KD两种主要的肿瘤抗原蛋白。E1B产物结合肿瘤抑制蛋白P53并使之灭活,这种结合对于...

由于人类腺病毒(ADV)在基因治疗和基因转移方面,活体病毒疫苗方面,哺乳动物细胞蛋白质表达方面的潜在应用,因而得到人们的广泛关注。E1B基因编码19KD和55KD两种主要的肿瘤抗原蛋白。E1B产物结合肿瘤抑制蛋白P53并使之灭活,这种结合对于病毒复制至关重要,可能是因为E1A产物诱导依赖于P53的细胞调亡。超过50％的肿瘤病病因都与p53肿瘤抑制基因的丢失或灭活有关,这在人类恶性肿瘤中是最常见的遗传缺陷。我们利用同源重组的方法构建了一种含有(?)开放阅读框的F1R缺陷的重组脾

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