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噬菌体表达短肽模拟旋毛虫抗原表位及其抗血吸虫保护性免疫研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第5期19卷 268-271页

作者：周东明易新元曾宪芳王敏 larry mcreynolds 中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室长沙410078 Molecular Parasitology Group New Englan Biolabs

目的　从噬菌体随机肽库中筛选出模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,探讨其抗血吸虫的交叉免疫保护效果。　方法　以纯化的旋毛虫感染鼠血清IgG为配基 ,亲合筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ;混合噬... 详细信息

目的　从噬菌体随机肽库中筛选出模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,探讨其抗血吸虫的交叉免疫保护效果。　方法　以纯化的旋毛虫感染鼠血清IgG为配基 ,亲合筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ;混合噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染后第 4 5天剖杀小鼠 ,观察减虫和减卵效果。　结果　经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到了有效的富集 ,第三轮洗脱噬菌体的产量约为第一轮的 15 0倍。随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 1个克隆能与旋毛虫感染鼠血清IgG特异性反应。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率与减卵率分别为 4 2 8%与 6 6 3% (P <0 0 0 1)。　结论　利用噬菌体随机肽库技术可获得模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导明显的抗血吸虫的保护性免疫。

关键词：日本血吸虫旋毛虫模拟表位噬菌体随机肽库

日本血吸虫雄虫免疫血清对成虫cDNA文库的筛选及克隆分析

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中国人兽共患病杂志 2003年第1期19卷 51-52页

作者：陈欲晓易新元曾宪芳袁仕善 larry mcreynolds 中南大学湘雅医学院寄生虫病教研室长沙410078 Molecular Parasitology Group NewEngland Biolabs

目的　筛选和分析日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)新基因 ,为血吸虫疫苗研究提供新的候选分子。方法　以日本血吸虫雄性成虫抗原免疫兔血清为探针 ,筛选Sj成虫cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段进行PCR鉴定及测序分析。通过互联... 详细信息

目的　筛选和分析日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)新基因 ,为血吸虫疫苗研究提供新的候选分子。方法　以日本血吸虫雄性成虫抗原免疫兔血清为探针 ,筛选Sj成虫cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段进行PCR鉴定及测序分析。通过互联网对测序获得的核苷酸序列进行同源性分析 ,并预测新基因编码蛋白的结构与功能。结果　筛选获 11个阳性克隆 ,其插入SjcDNA片段大小在 0 7～ 2 3kb之间。对部分阳性克隆进行测序分析 ,获两个Sj新基因 ,即Sj-MA及Sj -Cp8(登录号分别为AF5 1980 8和AF5 2 4 896 ) ,分别编码 2 4 9和 71个氨基酸的核内蛋白和胞浆蛋白。Sj-MA蛋白含有 9个蛋白激酶C磷酸化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个酪氨酸激酶磷酸化位点和 1个N -肉豆蔻酸化位点。Sj-Cp8蛋白含一个跨膜区、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个N -肉豆蔻酸化位点。结论　筛选Sj成虫cDNA文库所获得两个新基因 ,其编码的蛋白可能为存在于胞浆和胞核内的日本血吸虫的重要信息传递分子 ,有望成为新的血吸虫病疫苗候选分子。

关键词：日本血吸虫免疫兔血清 cDNA文库免疫筛选基因序列分析

日本血吸虫新抗原基因Sj-Ts4的克隆、表达及免疫保护性(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第2期34卷 143-148页

作者：周东明,易新元,曾宪芳,王敏,蔡春,王庆林,张顺科,mcreynolds larry 中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室 Molecular Parasitology G

为探讨旋毛虫感染小鼠后抗血吸虫感染的分子机制 ,并为血吸虫病疫苗的研究提供新的抗原分子 ,用旋毛虫感染鼠血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库。经过 3轮筛选 ,获得 9个阳性克隆 ,其中新基因Sj Ts4有一完整的编码框 ,编码2 10个氨基酸。... 详细信息

为探讨旋毛虫感染小鼠后抗血吸虫感染的分子机制 ,并为血吸虫病疫苗的研究提供新的抗原分子 ,用旋毛虫感染鼠血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库。经过 3轮筛选 ,获得 9个阳性克隆 ,其中新基因Sj Ts4有一完整的编码框 ,编码2 10个氨基酸。该蛋白质的理论分子量为 2 3kD ,等电点为 7.72。将Sj Ts4亚克隆于原核表达载体 pGEX 5X 3,以GST融合蛋白的形式在E .coliDH5α中表达。Western印迹分析显示 ,重组Sj Ts4蛋白 (rSj Ts4)能被慢性感染鼠血清识别。rSj Ts4或与弗氏完全佐剂混合后免疫小鼠 ,均可以诱导产生特异性的IgG抗体 ,抗体效价可高达 1∶2 5 6 0 0。两免疫组的减虫率分别为31.36 %和 36 .80 % ,与对照组相比都具有统计学意义

关键词：日本血吸虫旋毛虫 Sj-Ts4 分子克隆免疫

日本血吸虫rGST-Sj32蛋白免疫小鼠感染前后细胞因子水平的变化

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第3期19卷 284-287页

作者：蔡春易新元王庆林周金春曾宪芳 larry mcreynolds 中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室湖南长沙410078 NewEnglandBiolab

目的 :为进一步探讨rGST Sj32保护性免疫机制。方法 :用rGST Sj32加弗氏完全佐剂 (FCA)皮下免疫BALB/c小鼠。于免疫前 ,攻击感染前 (第 3次免疫后 2wk)以及攻击感染后10d、30d及 4 5d ,各剖杀免疫组与对照组小鼠 5只 ,取脾细胞培养 ,... 详细信息

目的 :为进一步探讨rGST Sj32保护性免疫机制。方法 :用rGST Sj32加弗氏完全佐剂 (FCA)皮下免疫BALB/c小鼠。于免疫前 ,攻击感染前 (第 3次免疫后 2wk)以及攻击感染后10d、30d及 4 5d ,各剖杀免疫组与对照组小鼠 5只 ,取脾细胞培养 ,对体外培养的脾细胞诱生的细胞因子进行分析。结果 :用rSj32刺激体外培养的小鼠脾细胞时 ,第 3次免疫后2wk(即攻击感染前 )剖杀小鼠的脾细胞分泌IL 4、IL 5和IFN γ的水平与佐剂对照组相比较 ,均有不同程度的升高 ,分别为 ( 10 .2 1± 3.6 5 )ng/L (P >0 .0 5 )、( 19.89± 9.5 7)ng/L (P >0 .0 5 )、( 5 .0 9± 2 .5 1) μg/L (P <0 .0 1)。攻击感染后10d、30d及 4 5d ,对照组与免疫组IFN γ的水平未见升高 ;对照组IL 4和IL 5的水平随着感染时间的延长明显升高 ,免疫组升高不如对照组明显。结论 :rGST Sj32疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,可诱导以Th1类细胞因子为主的免疫应答 ;

关键词：日本血吸虫重组蛋白免疫细胞因子小鼠

水牛感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

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中国地方病学杂志 2004年第6期23卷 549-552页

作者：张冉易新元曾宪芳黄跃龙 larry mcreynolds 湖南师范大学医学院检验系中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室 Molecular Parasitology Unit New England Biolabs MA 01915USA

目的筛选新的有潜质的日本血吸虫保护性抗原分子编码基因。方法用水牛感染血清对日本血吸虫(Schistosoma Japonicum,sj)成虫cDNA文库进行免疫筛选,将阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。结果 3轮筛选后,将7个阳性克隆经辅助噬... 详细信息

目的筛选新的有潜质的日本血吸虫保护性抗原分子编码基因。方法用水牛感染血清对日本血吸虫(Schistosoma Japonicum,sj)成虫cDNA文库进行免疫筛选,将阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。结果 3轮筛选后,将7个阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切并PCR扩增显示,插入的日本血吸虫cDNA片段大小在0.8-2.0 kb之间,选取其中4个经DNA测序分析,发现2个未曾报道过的日本血吸虫新基因,分别命名为sj-IB1和sj-Rho GTPase-like gene,并在Gene Bank登记注册。结论水牛感染血清可识别日本血吸虫的特异性抗原分子,这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究。

关键词：水牛免疫筛选日本血吸虫 cDNA文库感染血清血吸虫病

Isolation and Characterization of 44.6 kDa Protein from Schistosoma japonicum Male Worm

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Journal of Microbiology and Immunology 2004年第2期2卷 136-139页

作者：陈欲晓易新元曾宪芳袁仕善张顺科 larry mcreynolds Department of Immunology Xiangya School of Medicine Central South University Changsha 410078 China Department of Parasitology Xiangya School of Medicine Central South University Changsha 410078 China Molecular Parasitology Group New England Biolabs Inc. BeverlyMA0191 Lmcreynolds USA

Soluble male worm antigen of Schistosoma japonicum ( Sj ) was investigated for development of new vaccine candidate. SDS-PAGE and Western blotting were performed to compare the difference between soluble antigens from worms of different sex. Mice vaccination with the testing purified protein was followed by Sj cercariae challenge to detect the protective effect against Sj . Sixteen bands were seen for the soluble male worm antigen and 12 for the female worm. In addition, a distinct band of 44.6 kDa from the male worm antigen was observed, and its antigenicity was demonstrated by Western blotting. This 44.6 kDa protein could induce significant worm and egg reduction rate in mice (39.31%, 41.98%, P <0.001). In this study a 44.6 kDa protein was isolated and partially characterized. Its antigenicity, immunogenicity and the partial immune protection suggest its potential vaccine candidte against Sj .

关键词： Schistosoma japonicum Male adult worm Antigenicity

日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验

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中国人兽共患病杂志 2003年第5期19卷 85-88页

作者：袁仕善易新元曾宪芳黄跃龙张顺 larry mcreynolds 中南大学湘雅医学院血吸虫病研究室长潲410078 Molecular Parasitology Group

目的　分离日本血吸虫可溶性成虫抗原 (AWA)中的组分抗原 ,分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法　电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原 ,计算各组分抗原的分子量 ,并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠 ,攻击感染日... 详细信息

目的　分离日本血吸虫可溶性成虫抗原 (AWA)中的组分抗原 ,分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法　电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原 ,计算各组分抗原的分子量 ,并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠 ,攻击感染日本血吸虫尾蚴 ,感染后 4 5d剖杀 ,观察各组分抗原的免疫保护效果。结果　采用电泳层析法分离获得多个组分抗原 ,选择收集其中 4个较纯的组分抗原 ,分子量分别为 5 2kD、6 3kD、6 7kD和 74kD ;其中 6 3kD和 6 7kD抗原与感染血清有强的反应 ,而 5 2kD和 74kD抗原则反应弱 ;4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应。 6 3kD抗原诱导的免疫保护力水平较5 2kD、6 7kD和 74kD抗原好。结论　电泳层析法分离的 4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性 ,且 6 3kD抗原有一定的免疫保护性。

关键词：日本血吸虫成虫抗原分离小鼠免疫学试验

日本血吸虫新基因SjF1的克隆、表达及免疫保护效果研究

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中国人兽共患病杂志 2004年第6期20卷 467-470页

作者：陈利玉易新元曾宪芳张顺科 larry mcreynolds 中南大学湘雅医学院病原生物学系 Molecular Parasitology Group New England BiolabsMA 01915USA

目的构建日本血吸虫中国大陆株SjF1原核表达重组质粒,并进行免疫保护效果测定。方法用聚合酶链反应(PCR)法将SjF1基因从已剪切阳性克隆中扩增出来,克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端,经PCR和限制性酶切筛选阳性重组子。将阳性... 详细信息

目的构建日本血吸虫中国大陆株SjF1原核表达重组质粒,并进行免疫保护效果测定。方法用聚合酶链反应(PCR)法将SjF1基因从已剪切阳性克隆中扩增出来,克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端,经PCR和限制性酶切筛选阳性重组子。将阳性重组子转化大肠杆菌,在低温和低IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白。经鉴定后分别以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经黏膜免疫昆明鼠,观察诱导产生的减虫和减卵效果。感染前采血和唾液用ELISA法检测抗体。结果成功克隆并表达了rSjF1。rSjF1以FCA作佐剂经皮下免疫获得了29.92％的减虫率和51.08％的减卵率;rSjF1以壳聚糖作佐剂经滴鼻免疫获得了25.74％的减虫率和44.04％的减卵率。结论获得了rSjF1,该蛋白以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经黏膜免疫均能诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。

关键词：日本血吸虫基因 SjF1 克隆表达免疫

日本血吸虫成虫肠道内容物中金属蛋白酶的鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2002年第5期20卷 298-301页

作者：袁仕善易新元曾宪芳张顺科黄跃龙 larry mcreynolds 中南大学湘雅医学院血吸虫病研究室长沙410078 Molecular Parasitology Group

目的　鉴定日本血吸虫成虫肠道内容物中的金属蛋白酶。　方法　以明胶作底物 ,利用明胶 SDS PAGE分离日本血吸虫成虫肠道内容物 ,将电泳后的凝胶于不同 pH缓冲液和酶抑制剂中进行孵育 ,对其中的金属蛋白酶进行分析和鉴定。　结果　日... 详细信息

目的　鉴定日本血吸虫成虫肠道内容物中的金属蛋白酶。　方法　以明胶作底物 ,利用明胶 SDS PAGE分离日本血吸虫成虫肠道内容物 ,将电泳后的凝胶于不同 pH缓冲液和酶抑制剂中进行孵育 ,对其中的金属蛋白酶进行分析和鉴定。　结果　日本血吸虫成虫肠道内容物中存在降解明胶的金属蛋白酶 ,其最适 pH值为 7～ 9。金属蛋白酶抑制剂EDTA抑制其活性。电泳分离获得有活性的酶蛋白 ,该酶是血吸虫感染血清识别的弱抗原。

关键词：鉴定日本血吸虫成虫肠道内容物明胶电泳抑制剂金属蛋白酶