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Orf1/SpcS Chaperones ExoS for Type Three Secretion by Pseudomonas aeruginosa

Biomedical and Environmental Sciences 2008年第2期21卷 103-109页

作者： DA-KANG SHEN LAURIANE QUENEE MARIETTE BONNET LAURIANE KUHN madiha derouazi DANIELE LAMOTTE BERTRAND TOUSSAINT BENOIT POLACK Groupe de Recherche et d'Etude du Processus Inflammatoire (GREPI) MENRT EA 2938 Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble BP 217 38043 Grenoble Cedex 9 France Laboratoire de Chimie des Protéines DRDC CEA Grenoble 38054 Grenoble France

Objective Pseudomonas aeruginosa is a ubiquitous and opportunistic pathogen that uses the type Ⅲ secretion system （TTSS） to inject effector proteins directly into the cytosol of target cells to subvert the host cell＇s functions. Specialized bacterial chaperones are required for effective secretion of some effectors. To identify the chaperone of ExoS, the representative effector secreted by the TTSS of P aeruginosa, we analyzed the role of a postulated chaperone termed Orfl. Methods By allelic exchange, we constructed the mutant with the deletion of gene Orfl. Analysis of secreted and cell-associated fractions was performed by SDS-PAGE and Western blotting. Using strain expressing in trans Orfl, tagged by V5 polypeptide and histidine, protein-protein interaction was determined by affinity resin pull-down assay in combination with MALDI-TOF The role of Orfl in the expression of exoS was evaluated by gene reporter analysis. Results Pull-down assay showed that Orfl binds to ExoS and ExoT. Secretion profile analysis showed that Orfl was necessary for the optimal secretion of ExoS and ExoT. However, Orfl had no effect on the expression of exoS. Conclusion Orfl is important for the secretion of ExoS probably by maintaining ExoS in a secretion-competent conformation. We propose to name Orfl as SpcS for ＂specific Pseudomonas chaperone for ExoS＂.

关键词： Type Ⅲ secretion system Pseudomonas aeruginosa Chaperone

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