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C-myc标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响

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免疫学杂志 2004年第5期20卷 369-371页

作者：杨康鹃孟繁平王玉祥金桂花范华英 m.Stassen m.de baets 延边大学医学院微生物学与免疫学教研室吉林延吉133000 Laboratory of Neuroimmunology Department of NeurologyUniversity of Maastricht6202AZ MaastrichtNetherlands

目的　探讨在不同的免疫学检测方法中 ,与单链抗体相连的亲和标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响。方法　在制备“VH 连接链 VL”型结构抗乙酰胆碱受体单链抗体时 ,将c myc标记肽与单链抗体的VL 连接 ,应用先将抗c myc抗体固定单链... 详细信息

目的　探讨在不同的免疫学检测方法中 ,与单链抗体相连的亲和标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响。方法　在制备“VH 连接链 VL”型结构抗乙酰胆碱受体单链抗体时 ,将c myc标记肽与单链抗体的VL 连接 ,应用先将抗c myc抗体固定单链抗体的固相放射免疫测定法、直接将单链抗体与乙酰胆碱受体结合的液相放射免疫测定法 ,分别测定单链抗体与乙酰胆碱受体的结合活性。结果　在固相放射免疫测定法中 ,单链抗体不能与乙酰胆碱受体结合 ;在液相放射免疫测定法中 ,单链抗体则能与乙酰胆碱受体结合。结论　在应用不同的免疫学检测方法中 ,与单链抗体相连的c myc标记肽可影响单链抗体与抗原的结合活性。

关键词：单链抗体标记肽乙酰胆碱受体

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电鳐乙酰胆碱受体的分离和纯化

延边大学医学学报 2004年第1期27卷 5-8页

作者：杨康鹃孟繁平 m.de baets 延边大学医学院细胞生物学与医学遗传学教研室吉林延吉133000 延边大学医学院微生物学与免疫学教研室吉林延吉133000 荷兰马斯特里赫特大学医学院神经学系

[目的 ]分离和纯化具有活性的电鳐乙酰胆碱受体 .[方法 ]将电鳐电器官肌肉制成匀浆 ,细胞经裂解制备电鳐乙酰胆碱受体粗提液 .经眼镜蛇毒素偶联的Sepharose 4B层析柱亲和吸附 ,得到纯化的电鳐乙酰胆碱受体 .应用酶联免疫吸附试验检查纯... 详细信息

[目的 ]分离和纯化具有活性的电鳐乙酰胆碱受体 .[方法 ]将电鳐电器官肌肉制成匀浆 ,细胞经裂解制备电鳐乙酰胆碱受体粗提液 .经眼镜蛇毒素偶联的Sepharose 4B层析柱亲和吸附 ,得到纯化的电鳐乙酰胆碱受体 .应用酶联免疫吸附试验检查纯化的电鳐乙酰胆碱受体与抗乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结果 ]分离和纯化的电鳐乙酰胆碱受体能与抗乙酰胆碱受体抗体结合 ,且结合活性高 .[结论 ]从电鳐电器官中分离和纯化的乙酰胆碱受体活性高、特异性强 ,可作为抗原在酶联免疫吸附试验中用于检查抗乙酰胆碱受体抗体 .

关键词：重症肌无力受体胆碱能电鳐属乙酰胆碱

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从TE671细胞株提取人乙酰胆碱受体

延边大学医学学报 2003年第3期26卷 157-161页

目的 ]分离提取具有活性的人乙酰胆碱受体 .[方法 ]用摇动培养瓶大量培养表达人乙酰胆碱受体的TE 671细胞株 ,细胞经裂解制备人乙酰胆碱受体提取液 .应用放射免疫测定法检测提取的人乙酰胆碱受体与抗人乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结... 详细信息

目的 ]分离提取具有活性的人乙酰胆碱受体 .[方法 ]用摇动培养瓶大量培养表达人乙酰胆碱受体的TE 671细胞株 ,细胞经裂解制备人乙酰胆碱受体提取液 .应用放射免疫测定法检测提取的人乙酰胆碱受体与抗人乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结果 ]提取的人乙酰胆碱受体能与抗人乙酰胆碱受体抗体结合 ,且结合活性很高 ,含量为 1 8× 10 10 个乙酰胆碱受体分子 / 10 0 μL提取液 .[结论 ]从TE 671细胞株提取的人乙酰胆碱受体具有与相应抗体结合的功能。

关键词：重症肌无力受体,胆碱能细胞株

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重症肌无力治疗性单价IgG抗体基因的构建

中国免疫学杂志 2009年第11期25卷 1003-1005页

作者：李钟燮孟繁平孙昌元李芳芳金权鑫李红花李英信 m.Stassen m.de baets 延边大学基础医学院免疫学与病原生物学教研部延吉133000 department of Neurology Faculty of MedicineUniversity of Maastricht

目的:构建一株对重症肌无力(mG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因。方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定... 详细信息

目的:构建一株对重症肌无力(mG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因。方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定区3(CDR3)缺失突变,获得突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP基因。经转化大肠杆菌XL1-Blue进行增殖后,转染哺乳类细胞CHO-k1进行表达,表达产物经ELIAS检测与补体C3的结合活性,经RIA检测与特异性抗原人AChR的结合活性。突变抗体H链再经杵(T366Y)臼(Y407T)突变,以利于异源H链的配对。结果:突变型抗体IgG637/K322A丧失了与补体C3结合的能力,突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP丧失了与人AChR结合的能力。测序证实已经获得了预想的杵臼突变序列。结论:已经成功的制备了无补体激活能力的单价IgG类抗AChR抗体基因。

关键词：重症肌无力单价抗体定点突变免疫球蛋白G

人源性抗乙酰胆碱受体自身抗体的构建及特异性鉴定

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免疫学杂志 2007年第1期23卷 88-90页

作者：杨康鹃孟繁平金桂花李芳芳孙昌元金权鑫 m.Stassen m.de baets 延边大学基础医学院免疫学与病原生物学教研部吉林延吉133000 Laboratory of Neuroimmunology Department of NeurologyUniversity of Maastricht6202 AZ MaastrichtNetherlands

目的用人抗乙酰胆碱受体(AchR)自身抗体的抗原结合片段(Fab)构建完整的抗人AchR自身抗体,为重症肌无力(mG)的实验研究提供人源性抗体材料。方法应用PCR技术从分离自mG患者胸腺的Fab637扩增重链Fd片段基因和轻链基因,并克隆至含有免疫球... 详细信息

目的用人抗乙酰胆碱受体(AchR)自身抗体的抗原结合片段(Fab)构建完整的抗人AchR自身抗体,为重症肌无力(mG)的实验研究提供人源性抗体材料。方法应用PCR技术从分离自mG患者胸腺的Fab637扩增重链Fd片段基因和轻链基因,并克隆至含有免疫球蛋白(IgG1)基因的载体pIgG1上,构建人源性抗AchR自身抗体哺乳类细胞表达的重组载体pIgG1-637。将pIgG1-637转染CHO-k1细胞,细胞培养上清液经斑点杂交试验检测抗体的表达,以放射免疫测定法测定表达的抗体与特异性人AchR结合的活性。结果细胞培养24h后能检测到抗体的分泌,表达的抗体能特异性地与抗原结合,且结合活性很高。结论已成功地构建了具有与抗原特异性结合的人源性IgG1类抗人AchR自身抗体IgG1-637。

关键词：乙酰胆碱受体重症肌无力自身抗体

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抗乙酰胆碱受体单链抗体在大肠杆菌中的表达

延边大学医学学报 2002年第2期25卷 79-82页

作者：杨康鹃孟繁平 m.Stassen m.de baets 延边大学医学院生物学教研室吉林延吉133000 延边大学医学院微生物学免疫学教研室吉林延吉133000 荷兰马斯特里赫特大学医学院神经学系

[目的 ]使构建的抗人乙酰胆碱受体单链抗体基因在大肠杆菌中表达 .[方法 ]将含有单链抗体基因的载体 pHEN2 (含有 pelB引导肽和c myc)转化大肠杆菌HB 2 15 1,在细菌外周质中表达单链抗体 .应用鼠抗c myc单链抗体的斑点杂交试验检查细菌... 详细信息

[目的 ]使构建的抗人乙酰胆碱受体单链抗体基因在大肠杆菌中表达 .[方法 ]将含有单链抗体基因的载体 pHEN2 (含有 pelB引导肽和c myc)转化大肠杆菌HB 2 15 1,在细菌外周质中表达单链抗体 .应用鼠抗c myc单链抗体的斑点杂交试验检查细菌外周质裂解物中单链抗体的表达 .[结果 ]单链抗体表达在细菌外周质中 ,培养液上清及对照大肠杆菌外周质和培养液上清均未发现单链抗体 .[结论 ]已成功地在大肠杆菌中表达了抗人乙酰胆碱受体单链抗体 .

关键词：抗乙酰胆碱受体单链抗体大肠杆菌基因表达重症肌无力

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重症肌无力单链抗体基因的制备

延边大学医学学报 2002年第1期25卷 1-4页

[目的 ]构建抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体 .[方法 ]应用多聚酶链反应从抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区抗原结合片段扩增重链和轻链可变区基因 ,并克隆到载体噬粒 pHEN2 .将含有单链抗体基因的重组噬粒转化大肠杆菌DH5α ,分离... 详细信息

[目的 ]构建抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体 .[方法 ]应用多聚酶链反应从抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区抗原结合片段扩增重链和轻链可变区基因 ,并克隆到载体噬粒 pHEN2 .将含有单链抗体基因的重组噬粒转化大肠杆菌DH5α ,分离提纯重组噬粒后再经酶切、琼脂糖凝胶电泳检查以确认单链抗体基因的正确性 .[结果 ]电泳检查发现了大小分别为 3 78bp ,3 3 9bp和 762bp的重链可变区、轻链可变区和单链抗体基因 ,且位置正确 .[结论

关键词：重症肌无力单链抗体基因制备胆碱能受体

抗乙酰胆碱受体单链抗体对致病性抗体结合活性的抑制作用

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现代免疫学 2004年第3期24卷 235-237,244页

作者：杨康鹃张庆镐孟繁平 m.de baets 延边大学医学院微生物学与免疫学教研室延吉133000 延边大学医学院附属医院中心实验室延吉133000 department of Neurology University of MaastrichtMaastrichtthe Netherlands

为探讨单链抗体 (ScFv )对重症肌无力 (mG )的特异性免疫治疗作用 ,从分离自mG患者胸腺的抗乙酰胆碱受体(AchR )抗原结合片段Fab6 37构建单链抗体ScFv6 37。应用放射免疫测定法测定了ScFv6 37与刺激抗原人AchR的特异性结合活性以及与相... 详细信息

为探讨单链抗体 (ScFv )对重症肌无力 (mG )的特异性免疫治疗作用 ,从分离自mG患者胸腺的抗乙酰胆碱受体(AchR )抗原结合片段Fab6 37构建单链抗体ScFv6 37。应用放射免疫测定法测定了ScFv6 37与刺激抗原人AchR的特异性结合活性以及与相关抗原大鼠AchR和电鳐AchR的交叉反应 ,应用竞争性ELISA测定抑制致病性抗AchR完整抗体IgG6 37与人AchR结合活性。结果发现ScFv6 37只能与人AchR结合 ,不能与大鼠和电鳐的AchR结合。对IgG6 37与人AchR结合的抑制率为 17 5 %～ 32 9%。表明单链抗体对AchR具有一定的“保护”作用。

关键词：重症肌无力单链抗体乙酰胆碱受体

Estimation of Soil Carbon Input in France: An Inverse m.delling Approach

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Pedosphere 2013年第4期23卷 422-436页

作者： J.mEERSmANS m.P.mARTIN E.LACARCE T.G.ORTON S.de baets m.GOURRAT N.P.A.SABY J.WETTERLIND A.BISPO T.A.QUINE D.ARROUAYS French National Institute for Agriculture Research (INRA) Earth and Life Institute (ELI) Universit Catholique de Louvain College of Life and Environmental Sciences (CLES) Department of Geography University of Exeter Agriculture and Forestry department French Environment and Energy Management Agency (ADEME)

development of a quantitative understanding of soil organic carbon （SOC） dynamics is vital for management of soil to sequester carbon （C） and maintain fertility, thereby contributing to food security and climate change mitigation. There are well-established process-based m.dels that can be used to simulate SOC stock evolution; however, there are few plant residue C input values and those that exist represent a limited range of environments. This limitation in a fundamental m.del component （i.e., C input） constrains the reliability of current SOC stock simulations. This study aimed to estimate crop-specific and environment-specific plant-derived soil C input values for agricultural sites in France based on data from 700 sites selected from a recently established French soil monitoring network （the RmQS database）. measured SOC stock values from this large scale soil database were used to constrain an inverse RothC m.delling approach to derive estimated C input values consistent with the stocks. This approach allowed us to estimate significant crop-specific C input values （P 〈 0.05） for 14 out of 17 crop types in the range from 1.84 =h 0.69 t C ha-1 year-1 （silage corn） to 5.15 =k 0.12 t C ha-1 year-1 （grassland/pasture）. Furthermore, the incorporation of climate variables improved the predictions. C input of 4 crop types could be predicted as a function of temperature and 8 as a function of precipitation. This study offered an approach to meet the urgent need for crop-specific and environment-specific C input values in order to improve the reliability of SOC stock prediction.

关键词： climate crop types RothC soil organic carbon yield