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抑制VEGF表达的锤头状核酶系统

中国肿瘤生物治疗杂志 2005年第3期12卷 167-173页

作者：李晶费琦杨剑峰高宝梅戴信兰张红宇朱景德上海交通大学肿瘤研究所复旦大学上海医学院

目的:建立和评估抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达的锤头状核酶(hammerhead ribozyrae)技术系统。方法:对VEGF121基因RNA序列进行二级结构分析,选择靶点;设计并构建针对VEGF的分泌肽RNA的可表达锤头状核酶(1-4)载体系统和VEGF-荧光色素... 详细信息

目的:建立和评估抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达的锤头状核酶(hammerhead ribozyrae)技术系统。方法:对VEGF121基因RNA序列进行二级结构分析,选择靶点;设计并构建针对VEGF的分泌肽RNA的可表达锤头状核酶(1-4)载体系统和VEGF-荧光色素酶融合基因报告质粒;通过试管内切割实验等方法评估核酶对于试管内转录得到的VEGF RNA切割特异性和效率; 通过瞬时共转染实验和稳定转染实验评估核酶在细胞内对于VEGF RNA的切割效率。结果:设计和构建了对VEGF RNA二级结构水平上的暴露区(+8,+36和+71位点:核酶1,3和4)和非暴露区(+17位点:核酶2)4个锤头状核酶(1-4)的两套质粒;试管内切割检测表明,针对+8,+36和+71位点的核酶(1,3和4)可以有效地在试管内对VEGF RNA进行特异性切割,使其水平分别降至对照的61.7%,27.6%和44.8%(荧光色素酶活性)或66.3%,27.0%和30.0%(蛋白质水平);将核酶表达质粒与VEGF-luc模板质粒瞬时共转染入SMMC-7721肝癌细胞,核酶1,3和4 VEGF-luc水平分别降低到对照的81.4%,56.6%和69.1%;稳定表达针对VEGF 的核酶1,3或4的SMMC-7721细胞株中,内源性VEGF RNA的水平降至对照水平的5%以下。对照未转染的、转染空载体的和转染了核酶2(+17)的SMMC-7721细胞。结论:分别针对VEGF+8,+36和+71位点锤头状核酶可有效地抑制VEGF的RNA水平。

关键词：血管内皮生长因子锤头状核酶试管内和细胞内核酶剪切实验抗血管生成

高血压患者的心血管风险评估:根据ESH和SCORE策略评估的主要差异

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世界核心医学期刊文摘（心脏病学分册） 2007年第8期3卷 61-61页

作者： Lengeé J.-P. Vinck W. J. de Plaen J.-F. Persu A. 奚群英 Cliniques Universitaires Saint luc (UCL) Nephrology Department 10 avenue Hippocrate 1200 Brussels Belgium

背景:欧洲高血压学会(ESH)指南推荐两种可能的策略用于评估原发性高血压患者的心血管风险(CVR):分类表法和SCORE风险图表法。但是,未有研究对上述两种方法取得的结果进行比较。目的和方法:对比利时的106例无糖尿病或其他相关临床疾患的... 详细信息

背景:欧洲高血压学会(ESH)指南推荐两种可能的策略用于评估原发性高血压患者的心血管风险(CVR):分类表法和SCORE风险图表法。但是,未有研究对上述两种方法取得的结果进行比较。目的和方法:对比利时的106例无糖尿病或其他相关临床疾患的高血压患者(年龄52.4±12.9岁,男女性别比为46/60),根据ESH和SCORE策略进行CVR评估。结果:根据ESH分类表法(分别为1例、24例、24例、57例)和SCORE风险图表法(分别为60例、12例、10例、24例)得出的低度、中度、高度和极高度风险分布结果显著不同(k系数=0.08)。

关键词：心血管风险 ESH SCORE 男女性别比图表法分类表高度风险分布结果部分解释风险评估

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PKC对人mdr1基因转录调控的研究

中国生物化学与分子生物学报 1998年第4期14卷 442-446页

作者：梁巍杨纯正熊冬生袁泉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所中国医学科学院基础医学研究所

研究了ＰＫＣα、β１和β２亚型对多药耐药基因ｍｄｒ１转录的调控作用．以ｍｄｒ１基因上游调控序列驱动的虫荧光素酶报告基因表达载体和ＰＫＣ基因表达载体共同转染ＣＯＳ７细胞后，测定虫荧光素酶报告基因表达水平．实验结果表明，... 详细信息

研究了ＰＫＣα、β１和β２亚型对多药耐药基因ｍｄｒ１转录的调控作用．以ｍｄｒ１基因上游调控序列驱动的虫荧光素酶报告基因表达载体和ＰＫＣ基因表达载体共同转染ＣＯＳ７细胞后，测定虫荧光素酶报告基因表达水平．实验结果表明，ＰＫＣα、β１及β２对ｍｄｒ１基因的转录有下调作用，ＰＭＡ可进一步加强这一作用；在此转染体系中，ＰＫＣ抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ也可抑制ｍｄｒ１基因的转录，但在只转染ｍｄｒｌｕｃ的细胞中，ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ对ｍｄｒ１的转录则没有影响，提示ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ仅在ＰＫＣ过量表达的细胞中抑制ｍｄｒ１基因的转录．

关键词： PKC mdr1基因转录调控

显微注射法建立含荧光素酶和HCV-C基因细胞模型

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第四军医大学学报 2000年第7期21卷 827-829页

作者：焦成松周永兴朱德生冯志华贾战生第四军医大学唐都医院感染科陕西西安710038 第四军医大学实验动物中心

目的　建立带有报告基因的 HCV5 NCR,C区细胞模型 .方法　通过亚克隆技术 ,重组 HCV c DNA片段与荧光素酶基因 (luc)融合的真核表达质粒 ,经显微注射导入人肝癌细胞 Hep G2 ,G418筛选后检测 C蛋白的表达和荧光素酶活性 .结果　成功地将... 详细信息

目的　建立带有报告基因的 HCV5 NCR,C区细胞模型 .方法　通过亚克隆技术 ,重组 HCV c DNA片段与荧光素酶基因 (luc)融合的真核表达质粒 ,经显微注射导入人肝癌细胞 Hep G2 ,G418筛选后检测 C蛋白的表达和荧光素酶活性 .结果　成功地将 HCV5 NCR和 C区 c DNA与 luc融合 ,并与 pc DNA3载体重组 ,构建了该融合基因的真核表达质粒pc HCVcluc;转染 Hep G2细胞后获得有效表达 ,持续 1mo以上 .结论　初步建立了含荧光素酶报告基因的 HCV5 NCR和 C区细胞模型 ,可用于抗

关键词：丙型肝炎病毒细胞模型荧光素酶