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在cDNA文库构建中探究癌症病人血浆外泌体miRNA的特异性扩增

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生物工程学报 2022年第6期38卷 2213-2223页

作者：王娜何飞郁宏伟何栾樱熊国良卢建东喻长远王诗卉北京化工大学生命科学与技术学院北京100029 深圳市中医院广东深圳518000

血浆外泌体微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs)与癌症的发生、诊断和治疗密切相关,但其分子机制尚不明晰。本研究探讨了癌症病人血浆外泌体miRNAs在cDNA文库构建中非特异性扩增的解决方案。在酶切法中,采用核酸外切酶T (exonuclease T, EX... 详细信息

血浆外泌体微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs)与癌症的发生、诊断和治疗密切相关,但其分子机制尚不明晰。本研究探讨了癌症病人血浆外泌体miRNAs在cDNA文库构建中非特异性扩增的解决方案。在酶切法中,采用核酸外切酶T (exonuclease T, EXOT)和phi29 DNA聚合酶降解引物;在磁珠法中,利用DNA结合磁珠分离模板和引物。随后,采取琼脂糖凝胶电泳和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测磁珠分离情况,运用RT-qPCR检测癌症病人血浆外泌体miRNA和不同连接物的含量变化。结果显示,非特异性扩增来源于miRNA的连接物USR5SR;核酸外切酶T (EXOT)和phi29 DNA聚合酶虽可降解USR5SR,但模板链也会发生降解;磁珠分离法中以9%PEG沉淀引物片段、15%PEG沉淀模板链效果最佳。综上所述,磁珠分离法能够高效解决cDNA文库构建中的非特异性扩增,从而实现293T细胞和癌症病人血浆外泌体miRNA cDNA文库的成功构建。

关键词： microRNAs cDNA文库磁珠分离非特异性扩增

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基于灵芝双向固体发酵雷公藤减毒持效的研究

北京化工大学学报（自然科学版） 2021年第4期48卷 48-56页

作者：何栾樱林子淳卢建东熊国良王诗卉北京化工大学生命科学与技术学院北京100029 深圳市中医院深圳518000

传统中药雷公藤具有抗炎和免疫抑制的作用,但因毒性强而极大地限制了其临床应用。以灵芝为药用真菌,采用双向固体发酵技术发酵雷公藤,并对发酵过程中得到的灵雷菌质进行抗炎活性和肝毒性评价。结果表明,接种量10 mL/100 mL、发酵30天得... 详细信息

传统中药雷公藤具有抗炎和免疫抑制的作用,但因毒性强而极大地限制了其临床应用。以灵芝为药用真菌,采用双向固体发酵技术发酵雷公藤,并对发酵过程中得到的灵雷菌质进行抗炎活性和肝毒性评价。结果表明,接种量10 mL/100 mL、发酵30天得到的灵雷菌质(N2-G30)在3.75μg/mL的质量浓度下表现出减毒持效的作用,相比于雷公藤,可抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞释放促炎因子TNF-α和IL-6,并且可减轻对人正常肝细胞L02增殖的抑制作用。通过液相色谱-质谱联用(LC-MS)分析雷公藤发酵前后主要成分的含量变化,结果显示,与发酵前相比,发酵后雷公藤甲素、雷公藤红素、雷酚内酯的含量增加,雷公藤内酯甲的含量减少,这些成分的含量变化与N2-G30的减毒持效作用有关。

关键词：雷公藤灵芝双向固体发酵抗炎作用肝毒性

雷公藤甲素与雷公藤红素对小胶质细胞炎症反应的影响机制

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北京化工大学学报（自然科学版） 2020年第5期47卷 83-88页

作者：宋海红毕滢何栾樱闫培丽安文林喻长远王诗卉北京化工大学生命科学与技术学院北京100029 北京化工大学秦皇岛环渤海生物产业研究院秦皇岛066000

雷公藤甲素与雷公藤红素是雷公藤的主要生物活性成分,具有多种潜在的药理作用与毒性。神经炎症是各种神经退行性疾病的共同特征,小胶质细胞的激活是中枢神经系统神经炎症的主要组成部分。本文用雷公藤甲素与雷公藤红素处理小胶质细胞(HM... 详细信息

雷公藤甲素与雷公藤红素是雷公藤的主要生物活性成分,具有多种潜在的药理作用与毒性。神经炎症是各种神经退行性疾病的共同特征,小胶质细胞的激活是中枢神经系统神经炎症的主要组成部分。本文用雷公藤甲素与雷公藤红素处理小胶质细胞(HMO6),探究其对小胶质细胞增殖、细胞膜完整性的影响,以及雷公藤甲素对小胶质细胞M1、M2极化的影响。结果表明:与对照组相比,雷公藤红素(10^-4 mol/L)处理HMO6后,细胞增殖抑制率可高达(71.91±16.28)%(P<0.01,n=3),当浓度为10^-5 mol/L时,乳酸脱氢酶(LDH)释放量明显增加(8.58±1.56)%(P<0.01,n=4);与对照组相比,雷公藤甲素处理HMO6后,对细胞膜完整性无显著影响,但当浓度为10^-5 mol/L时,细胞增殖抑制率可高达(94.31±0.62)%(P<0.01,n=5),与脂多糖(LPS)组相比,雷公藤甲素浓度为10^-7 mol/L时人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放量显著减少至(264.83±64.25)pg/mL(P<0.01,n=3),人白细胞介素-10(IL-10)释放量减少至(63.48±16.79)pg/mL(P<0.05,n=3)。

关键词：雷公藤甲素雷公藤红素小胶质细胞免疫功能神经毒性

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旋毛虫寄生致小鼠十二指肠组织细胞凋亡

医学研究与教育 2015年第6期32卷 16-20页

作者：李丹罗靖梅赵蕾邴玉艳杜娈英承德医学院河北承德067000

目的观察旋毛虫实验感染小鼠后不同时间成虫寄生处十二指肠组织细胞凋亡的情况。方法建立旋毛虫实验感染小鼠动物模型,取其感染3、5、7 d成虫期小鼠十二指肠组织常规切片,he染色法观察组织病理变化,TUNEL法检测十二指肠细胞凋亡指数。We... 详细信息

目的观察旋毛虫实验感染小鼠后不同时间成虫寄生处十二指肠组织细胞凋亡的情况。方法建立旋毛虫实验感染小鼠动物模型,取其感染3、5、7 d成虫期小鼠十二指肠组织常规切片,he染色法观察组织病理变化,TUNEL法检测十二指肠细胞凋亡指数。Western-blot方法检测十二指肠组织中Caspase-3表达水平变化,对旋毛虫成虫致小鼠十二指肠组织细胞凋亡情况进行综合评价。结果 he染色结果显示,随着感染时间的延长,十二指肠组织的病理损伤加重。TUNEL结果显示,小鼠十二指肠组织凋亡细胞指数随着感染时间延长明显增多(P<0.05),Western-blot方法分析Caspase-3表达量随着十二指肠组织感染时间的延长而增加(P<0.05)。结论旋毛虫成虫可诱导小鼠十二指肠组织细胞凋亡,而和感染时间呈正相关。

关键词：旋毛虫十二指肠组织细胞凋亡

戊唑醇与苯醚甲环唑混配对橡胶树炭疽病菌的联合毒力

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热带农业科学 2014年第9期34卷 43-47页

作者：郑肖兰易克贤吴伟怀习金根郑金龙袁鸾英梁艳琼贺春萍中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南海口571101 海南大学环境与植物保护学院海南海口570228

采用室内生长速率法,研究戊唑醇和苯醚甲环唑混配对橡胶树炭疽病菌的增效作用。结果表明,不同配比的戊唑醇和苯醚甲环唑对橡胶炭疽病菌的联合作用表现为拮抗性、加和性及增效性3种不同作用,不同的炭疽病菌株对同种配比的药剂表现出不同... 详细信息

采用室内生长速率法,研究戊唑醇和苯醚甲环唑混配对橡胶树炭疽病菌的增效作用。结果表明,不同配比的戊唑醇和苯醚甲环唑对橡胶炭疽病菌的联合作用表现为拮抗性、加和性及增效性3种不同作用,不同的炭疽病菌株对同种配比的药剂表现出不同的敏感性。戊唑醇与苯醚甲环唑以1∶3混配对胶孢炭疽菌RC178的增效最明显;1∶3和2∶5混配时,对尖孢炭疽菌RC169增效最佳;2∶5混配时,对胶孢炭疽菌RC227增效最优。

关键词：炭疽菌戊唑醇苯醚甲环唑联合作用

MRTFA在卵巢癌组织中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

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癌症进展 2019年第5期17卷 540-544页

作者：李娈英杨丽霞李雪玲吴飒司晓辉漯河市第三人民医院妇产科河南漯河462000 河南省焦作煤业集团中央医院妇产科河南焦作4540000

目的探讨心肌素相关转录因子A(MRTFA)在卵巢癌组织中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法选取82例卵巢癌患者,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测卵巢癌组织和癌旁组织中MRTFA mRNA的相对表达量,分析不同临床特征的... 详细信息

目的探讨心肌素相关转录因子A(MRTFA)在卵巢癌组织中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法选取82例卵巢癌患者,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测卵巢癌组织和癌旁组织中MRTFA mRNA的相对表达量,分析不同临床特征的卵巢癌患者卵巢癌组织中MRTFA mRNA的相对表达量。培养卵巢癌SKOV3细胞,并分为MRTFA干扰组、阴性对照组和对照组,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell小室检测细胞的侵袭能力,蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞中MRTFA、血清应答因子(SRF)、E-钙黏素(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的相对表达量。结果卵巢癌组织中MRTFA mRNA的相对表达量为(1.86±0.12),明显高于癌旁组织的(1.15±0.10),差异有统计学意义(P﹤0.01)。不同肿瘤直径、国际妇产科联盟(FIGO)分期、分化程度和淋巴结转移情况的卵巢癌患者卵巢癌组织中MRTFA mRNA的相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。培养24、48、72、96 h后,MRTFA干扰组细胞的吸光度值均低于阴性对照组和对照组(P﹤0.05);培养24、48 h后,MRTFA干扰组细胞的划痕愈合率均低于对照组和阴性对照组(P﹤0.05);培养24 h后,MRTFA干扰组的侵袭细胞数少于对照组和阴性对照组(P﹤0.05)。MRTFA干扰组细胞中MRTFA、SRF和α-SMA蛋白的相对表达量均低于阴性对照组和对照组,E-cadherin蛋白的相对表达量高于阴性对照组和对照组(P﹤0.05)。结论卵巢癌组织中MRTFA蛋白呈高表达,特异性抑制MRTFA基因表达可抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制SRF蛋白介导的上皮-间充质转化过程有关。

关键词：卵巢癌 MRTFA 细胞增殖细胞迁移细胞侵袭