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金属蛋白酶组织抑制剂在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的作用

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水产学报 2022年第1期46卷 126-135页

作者：张明辉章骞林锦锦张凌晶刘光明陈玉磊曹敏杰集美大学海洋食品与生物工程学院水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心

由弧菌感染引起的疾病是影响鲍存活率的主要因素,实验以皱纹盘鲍为研究对象,探讨金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase, TIMP)在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的功能及其与基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1,... 详细信息

由弧菌感染引起的疾病是影响鲍存活率的主要因素,实验以皱纹盘鲍为研究对象,探讨金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase, TIMP)在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的功能及其与基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1, MMP-1)的相互作用关系。实验通过PCR技术克隆得到了TIMP cDNA序列,全长为2 291 bp。利用NetNGlyc 1.0Server和NetOGlyc 4.0 Server软件对TIMP的氨基酸序列进行分析,结果显示,TIMP有3个潜在的N-糖基化位点,分别位于第47、77和152位的Asn,以及一个潜在的O-糖基化位点,即位于第108位的Thr。多序列比对结果显示,皱纹盘鲍TIMP氨基酸序列与杂色鲍、太平洋牡蛎、泥蚶中TIMP的序列相似性分别为76.0%、18.9%和19.3%。利用荧光定量PCR技术分析了副溶血性弧菌感染过程中皱纹盘鲍不同组织中TIMP的表达情况,发现在弧菌感染早期,TIMP在血淋巴细胞和鳃组织中的表达量均显著上调。利用RNA干扰技术分别敲低皱纹盘鲍TIMP和MMP-1的表达水平,研究TIMP与MMP-1在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的相互作用关系。结果显示,鲍体内MMP-1表达沉默后,TIMP表达量显著上调;而TIMP表达受到抑制时,MMP-1表达量显著下降,说明TIMP表达受MMP-1负调控,而MMP-1表达受TIMP正调控。本研究将有助于揭示TIMP及其与MMP-1相互作用在皱纹盘鲍先天免疫反应中的功能,也可为鲍养殖的病菌防治策略提供新的思路。

关键词：皱纹盘鲍副溶血性弧菌金属蛋白酶组织抑制剂基质金属蛋白酶1 相互作用先天性免疫

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牛源二肽基肽酶-IV的高效制备及性质

食品科学 2022年第16期43卷 194-200页

作者：赵嘉妮陈宏陈寅格翁凌张凌晶张志刚林家仕曹敏杰集美大学体育学院福建厦门361021 集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 肉食品安全生产技术国家重点实验室福建厦门361100

以高效制备二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV)为目的,以牛肾为原料,经酸沉淀、硫酸铵盐析和凝胶过滤层析获得高纯度DPP-IV。还原条件下,纯化蛋白的分子质量为106 kDa,纯化倍数为169.9,得率为9.5%。对该蛋白进行质谱鉴定得... 详细信息

以高效制备二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV)为目的,以牛肾为原料,经酸沉淀、硫酸铵盐析和凝胶过滤层析获得高纯度DPP-IV。还原条件下,纯化蛋白的分子质量为106 kDa,纯化倍数为169.9,得率为9.5%。对该蛋白进行质谱鉴定得到12个肽段,共517个氨基酸残基,与牛DPP-IV氨基酸序列的匹配度为100%。对其性质研究发现,DPP-IV为糖蛋白且以二聚体形式(210 kDa)存在,等电点为5.8。DPP-IV的二级结构具有典型的β-折叠构象,热变性温度为(72.7±0.3)℃。金属离子Zn^(2+)、Fe^(2+)及Fe^(3+)对DPP-IV活力有明显的抑制作用,1 mmol/L的Zn^(2+)对DPP-IV力抑制率高达98%。

关键词： 2型糖尿病二肽基肽酶分离纯化性质分析

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利用牡蛎制备DPP-Ⅳ抑制肽及其活性分析

食品科学 2021年第10期42卷 120-126页

作者：陈宏章骞陈玉磊翁凌张凌晶谢少浩刘光明曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 大连工业大学海洋食品深加工协同创新中心辽宁大连116034

以牡蛎肉为原料制备二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ,EC 3.***.14.5)抑制肽。通过对比5种蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶)制备的酶解液对DPP-Ⅳ的抑制活性,发现胰酶制备的酶解液对DPP-Ⅳ抑... 详细信息

以牡蛎肉为原料制备二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ,EC 3.***.14.5)抑制肽。通过对比5种蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶)制备的酶解液对DPP-Ⅳ的抑制活性,发现胰酶制备的酶解液对DPP-Ⅳ抑制效果最好。通过优化胰酶酶解条件,确定最优酶解条件为加酶量0.8%、pH 8.0、温度37℃,酶解时间90 min。酶解液经超滤、Sephadex G-15和高效液相色谱分离纯化,获得肽片段。通过质谱鉴定筛选得到2种肽段的序列为Glu-Ile-Thr-Ala-Leu-Ala-Pro-Ser-Thr-Met-Lys(EITALAPSTMK)和Ile-LeuAla-Pro-Pro-Glu-Arg(ILAPPER)。利用BIOPEP在线模拟分析了这2个肽的胃肠液消化特性。采用固相合成法合成肽段APSTM和ILAPPER,并应用于DPP-Ⅳ抑制活性研究。结果显示,2个肽段的IC50值分别为354.81 μmol/L和16.98 μmol/L。分子对接结果表明,抑制肽与DPP-Ⅳ的活性部位主要以氢键、范德华力和π键相互作用为主。本研究通过酶解牡蛎肉制备高抑制活性的DPP-Ⅳ抑制肽,为以牡蛎为原料的功能性食品开发利用提供了理论基础。

关键词：牡蛎二肽基肽酶-Ⅳ抑制肽分离纯化抑制活性分子对接

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鲈鱼在4℃冷藏过程中的肌肉品质变化

食品科学 2023年第1期44卷 239-245页

作者：杨汝晴陈玉磊孙乐常张凌晶刘光明曹敏杰集美大学海洋食品与生物工程学院福建厦门361021 大连工业大学海洋食品深加工协同创新中心辽宁大连116034

目的:探究4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉品质的变化。方法:测定4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉pH值、菌落总数、总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、K值和质构等指标,综合评价鲈鱼生理生化品质的变化,采用Masson染色和免疫组化... 详细信息

目的:探究4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉品质的变化。方法:测定4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉pH值、菌落总数、总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、K值和质构等指标,综合评价鲈鱼生理生化品质的变化,采用Masson染色和免疫组化分析评价组织形态学变化,利用酶解荧光肽底物测定特异性酶解胶原蛋白的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)活力变化。结果:鲈鱼在贮藏期间pH值呈先下降后升高趋势,菌落总数、TVB-N含量和K值随贮藏时间的延长而增加,并在第8天超过临界值。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果显示,贮藏至6 d鲈鱼肌肉蛋白组成没有明显变化,而在第8天肌球蛋白重链降解明显。Masson染色和I型胶原免疫组化分析结果显示,随贮藏时间的延长,肌内膜逐渐被降解,至第12天,肌膜I型胶原蛋白和肌纤维之间出现明显间隙。MMPs活力随贮藏时间的延长而明显增加,而鱼肉硬度不断下降。结论:鱼类冷藏期间肌肉的软化与胶原蛋白分解密切相关,而MMPs对I型胶原蛋白的降解可能是鱼死后肌肉软化的主要原因。

关键词：鲈鱼基质金属蛋白酶质构 Masson染色免疫组化

参苓白术散改善晚期肿瘤患者生活质量的近期临床观察

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重庆医科大学学报 2017年第5期42卷 583-586页

作者：胡成琳胡陵静郭婷婷张国铎重庆市中医院肿瘤科重庆400011

目的:观察参苓白术散在改善晚期肿瘤患者生活质量方面的作用。方法:将60例诊断符合恶性肿瘤TNM分期Ⅳ期,辩证属于脾气虚型患者,随机分为2组。对照组30例予以营养支持治疗;治疗组30例,加用参苓白术散,水煎服,每日1剂,分2次温服,共用4周... 详细信息

目的:观察参苓白术散在改善晚期肿瘤患者生活质量方面的作用。方法:将60例诊断符合恶性肿瘤TNM分期Ⅳ期,辩证属于脾气虚型患者,随机分为2组。对照组30例予以营养支持治疗;治疗组30例,加用参苓白术散,水煎服,每日1剂,分2次温服,共用4周。观察治疗前后临床证候、体质量、生存质量评定(kanrofsky score,KPS)、外周血象[白细胞(white blood cell,WBC),血红蛋白(hemoglobin,Hb),血清前白蛋白(prealbumin,PAB)]情况。结果:2组治疗后比较,在以体倦乏力、食少纳呆、大便异常、腹胀等为主症的中医证候总有效率分别为92.9%和70.8%,治疗组明显优于对照组(P<0.05)。KPS评分,治疗组在治疗后有显著提高(P<0.05),治疗后治疗组KPS评分较对照组高(P<0.05)。治疗后,治疗组WBC有明显提升(P<0.05),且较对照组明显升高(P<0.05)。结论:参苓白术散可改善晚期恶性肿瘤患者的部分临床症状,在一定程度上提高生活质量,值得临床推广。

关键词：参苓白术散晚期肿瘤生活质量

“商住混合型”城中村认知与解读——以“温州村”模式为例

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建筑与文化 2018年第6期 81-82页

作者：侯钰张玲婧裘知沈阳建筑大学建筑与规划学院浙江大学建筑工程学院

改革开放以来,我国城市化进程开始加快,大量流动人口涌入城市,城市却无法为其提供住房,在此背景下"城中村"应运而生。根据聚居活动的不同,"城中村"可以被划分为商住结合型、产住结合型和单一居住型三大类。本研究以"温州村"为例,通过自... 详细信息

改革开放以来,我国城市化进程开始加快,大量流动人口涌入城市,城市却无法为其提供住房,在此背景下"城中村"应运而生。根据聚居活动的不同,"城中村"可以被划分为商住结合型、产住结合型和单一居住型三大类。本研究以"温州村"为例,通过自上而下的"城"的规划与自下而上的"村"的自生长两方面研究,加深人们对"商住混合型"城中村的认知。

关键词：商住混合社区温州村自生长

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超滤法提纯茶多酚的研究

膜科学与技术 2009年第4期29卷 112-115页

作者：王瑞芳陈发河吴光斌张凌晶集美大学生物工程学院厦门361021

对比考察了几种不同膜材质、不同截留分子量和不同构型的膜系统对茶叶水提液中茶多酚的分离效果,比较了不同清洗剂对膜污染的清除效果.结果表明,Ultra-flo超滤系统适于茶多酚的提纯,尤其是聚偏氟乙烯膜UF-602-5和聚砜膜UF-610,膜通量较... 详细信息

对比考察了几种不同膜材质、不同截留分子量和不同构型的膜系统对茶叶水提液中茶多酚的分离效果,比较了不同清洗剂对膜污染的清除效果.结果表明,Ultra-flo超滤系统适于茶多酚的提纯,尤其是聚偏氟乙烯膜UF-602-5和聚砜膜UF-610,膜通量较大,茶多酚透析率高.膜污染后,碱性清洗剂对茶叶污染物具有一定的去除能力,酸性清洗剂几乎没有任何效果,氧化性清洗剂去污性虽很强,但易对膜造成损伤.选用UF-602-5膜连续做了5个批次的重复超滤实验,结果显示,加水套洗可提高茶多酚的收率,改善分离效果,但随实验批次的增加,膜通量逐渐衰减.

关键词：茶多酚超滤膜清洗

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抗食物过敏的天然活性物质研究进展

中国食品学报 2016年第3期16卷 13-22页

作者：刘光明刘庆梅徐莎莎高媛媛张凌晶曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建省海洋功能食品工程技术研究中心福建厦门361021

近年来食物过敏的发病率持续增高,严重影响了人们的生活质量。与化学药物相比,天然来源的抗食物过敏活性物质具有作用缓和、副作用小、安全等特点。目前报道的抗食物过敏天然活性物质主要来源于益生菌、陆生植物和海藻等。本文概述了食... 详细信息

近年来食物过敏的发病率持续增高,严重影响了人们的生活质量。与化学药物相比,天然来源的抗食物过敏活性物质具有作用缓和、副作用小、安全等特点。目前报道的抗食物过敏天然活性物质主要来源于益生菌、陆生植物和海藻等。本文概述了食物过敏及其免疫学机理,抗食物过敏评价模型,抗食物过敏天然活性物质及其作用机制,分析了抗食物过敏天然活性物质的发展趋势。

关键词：食物过敏抗食物过敏评价模型天然活性物质海洋藻类

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虾夷扇贝肌肉丝氨酸蛋白酶的研究

食品工业科技 2022年第15期43卷 58-65页

作者：任秋颖谢渊翁凌张凌晶章骞刘光明曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 水产品深加工技术国家地方联合工程中心福建厦门361021 海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心大连工业大学辽宁大连116034

为了探究虾夷扇贝肌肉冷藏过程中内源蛋白酶对其质构的影响,本文对虾夷扇贝肌肉在4℃下冷藏7 d过程中肌肉质构及蛋白变化进行测定,结果表明,整个冷藏过程中扇贝肌肉硬度、弹性、咀嚼性和粘性整体呈下降趋势。SDS-PAGE分析显示肌肉蛋白在... 详细信息

为了探究虾夷扇贝肌肉冷藏过程中内源蛋白酶对其质构的影响,本文对虾夷扇贝肌肉在4℃下冷藏7 d过程中肌肉质构及蛋白变化进行测定,结果表明,整个冷藏过程中扇贝肌肉硬度、弹性、咀嚼性和粘性整体呈下降趋势。SDS-PAGE分析显示肌肉蛋白在第3 d开始出现明显降解。在内源酶活力方面,丝氨酸蛋白酶(Serine proteinase,SP)活力在冷藏2 d后开始急剧下降。通过硫酸铵盐析、离子交换、凝胶过滤和疏水柱层析等从虾夷扇贝肌肉中获得高度纯化的丝氨酸蛋白酶并对其酶学性质进行研究。SDS-PAGE和明胶酶谱结果表明,SP在天然状态下主要以分子量约为52 kDa的二聚体形式存在。SP的最适pH为9.0,最适温度为37℃。SP特异性水解羧基侧P1位含有精氨酸或赖氨酸残基的底物。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂PMSF、Leupeptin、Pefabloc SC、Benzamidine分别能抑制其97%、98%、90%和85%的酶活力;金属离子Fe、Zn、Cu也能明显抑制SP的酶活力。37℃下SP可有效降解扇贝肌原纤维蛋白,为揭示SP对扇贝肌肉蛋白的品质影响提供参考。

关键词：虾夷扇贝丝氨酸蛋白酶质构纯化性质分析肌肉

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