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Validation of the chinese version of the EORTC QLQ-CR29 in patients with colorectal cancer

World Journal of Gastroenterology 2017年第10期23卷 1891-1898页

作者： Jin-bo Lin Lei Zhang Dong-Wen Wu Zhou-Huan xi xue-Jun Wang Yun-Shou Lin Wakana Fujiwara Jing-Ru Tian Min Wang Peng Peng Ai Guo Zhen Yang Le Luo ling-Ya Jiang qia.qia.Li xue-Ying Zhang Yun-Feng Zhang Hou-Wei xu bing Yang xun-Lin Li Yi-xiong Lei School of Public Health Guangzhou Medical University Longgang Central Hospital of Shenzhen Department of Thoracic Surgery Tianjin Medical University Cancer Institute and HospitalNational Clinical Research Center for CancerKey Laboratory of Cancer Prevention and TherapyTianjin Lung Cancer Center Xiangya School of Medicine Central South University Department of Gastrointestinal Surgery Tianjin Medical University Cancer Institute and HospitalNational Clinical Research Center for CancerKey Laboratory of Cancer Prevention and TherapyTianjin Lung Cancer Center Tianjin Medical University School of Medicine Georgetown University Department of Radiation Oncology Tumor HospitalXiangya School of Medicine of Central South University Longgang District Peoples Hospital of Shenzhen1 Cancer Center of Guangzhou Medical University

AIM To assess the validity and reliability of the European Organization for Research and Treatment of Cancer Quality of Life Questionnaire-Colorectal Cancer 29 (EORTC QLQ-CR29) in Chinese patients with colorectal cancer (CRC). METHODS From March 2014 to January 2015, 356 patients with CRC from four different hospitals in China were enrolled in the study, and all patients self-administered the EORTC QLQ-CR29 and the quality of life core questionnaire (EORTC QLQ-C30). Evaluation of the scores was based on the Karnofsky Performance Scale (KPS). The reliability and validity of the questionnaires were assessed by Cronbach's proportional to coefficient, the Spearman correlation test and Wilcoxon rank sum test. RESULTS The EORTC QLQ-CR29 showed satisfactory reliability (proportional to > 0.7), although the urinary frequency and blood and mucus in stool dimensions had only moderate reliability (proportional to = 0.608). The multitrait scaling analyses showed good convergent (r > 0.4) and discriminant validity. Significant differences were obtained for each item in the different KPS subgroups (KPS 80). Body image and most single- item dimensions showed statistically significant differences in patients with a stoma compared with the rest of the patients. CONCLUSION The EORTC QLQ-CR29 exhibits high validity and reliability in Chinese patients with CRC, and can therefore be recommended as a valuable tool for the assessment of quality of life in these patients.

关键词： Colorectal cancer Health-related quality of life EORTC QLQ-CR29 China's Mainland

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提高源自Bacillus circulans 251的β-CGTase对麦芽糖亲和性及其在生产海藻糖中的应用

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中国生物工程杂志 2019年第5期39卷 96-104页

作者：杜立宿玲恰吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室无锡214122

将B. circulans 251β-CGTase应用于海藻糖制备,海藻糖转化率从50. 4%提高至71. 9%。为进一步提高底物的转化率,运用易错PCR-高通量筛选技术筛选对以麦芽糖为歧化反应受体的亲和性提高的B. circulans 251β-CGTase突变体。利用低底物浓... 详细信息

将B. circulans 251β-CGTase应用于海藻糖制备,海藻糖转化率从50. 4%提高至71. 9%。为进一步提高底物的转化率,运用易错PCR-高通量筛选技术筛选对以麦芽糖为歧化反应受体的亲和性提高的B. circulans 251β-CGTase突变体。利用低底物浓度的96孔板4,6-亚乙基-对硝基苯-α-D-麦芽七糖苷(EPS)显色法,最终筛选得到了一株对麦芽糖亲和性提高的突变体M234I。将野生型β-CGTase和突变体酶M234I进行蛋白质纯化,测定其酶学性质。结果表明,突变体的比活为345. 25U/mg,野生型则为357. 63U/mg;突变体M234I对麦芽糖的K_m为0. 258 2mmol/L,仅为野生型(0. 474 9mmol/L)的54. 4%,对麦芽糖的亲和性显著提高;突变体的最适温度、最适p H较野生型未发生较大变化。以麦芽糊精(DE值16)为底物,将突变体M234I用于多酶复配体系生产海藻糖,酶反应结果表明海藻糖的转化率最高达74. 9%,较野生型β-CGTase提高约3%。

关键词： β-CGTase 易错PCR 分子改造亲和性海藻糖转化

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多酶复配合成海藻糖及其分离提取的研究

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中国生物工程杂志 2019年第7期39卷 65-70页

作者：封金云宿玲恰吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

以大米淀粉为原料,多酶复配制备海藻糖。确定了实验室条件下多酶复配生产海藻糖的最佳条件:以15%(m/V)大米淀粉为底物,催化温度45℃、pH 6. 0、DE值16、α/β-CGTase加量为1. 4U/ml、催化28h后糖化处理12h,海藻糖转化率由双酶法催化的50... 详细信息

以大米淀粉为原料,多酶复配制备海藻糖。确定了实验室条件下多酶复配生产海藻糖的最佳条件:以15%(m/V)大米淀粉为底物,催化温度45℃、pH 6. 0、DE值16、α/β-CGTase加量为1. 4U/ml、催化28h后糖化处理12h,海藻糖转化率由双酶法催化的50%提高至73%。在底物浓度为25%(m/V)时,海藻糖产量最高达到182. 5g/L,随后对高浓度海藻糖进行分离提取,分别考察了活性炭脱色、离交分离、浓缩结晶等对海藻糖提取效率的响。

关键词：海藻糖多酶复配酶催化反应分离提取

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嗜热栖热菌海藻糖合酶的分子改造及其应用

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食品与发酵工业 2015年第12期41卷 1-5页

作者：宿玲恰张悦吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

对前期获得的Thermus thermophilus海藻糖合酶进行了分子改造以提升其催化制备海藻糖的性能。利用定点突变技术,将第251位Pro突变为Leu,得到突变体P251L,并于*** BL21(DE3)中重组表达,重组菌在摇瓶中发酵酶活为6.9 U/m L。以突变体催化... 详细信息

对前期获得的Thermus thermophilus海藻糖合酶进行了分子改造以提升其催化制备海藻糖的性能。利用定点突变技术,将第251位Pro突变为Leu,得到突变体P251L,并于*** BL21(DE3)中重组表达,重组菌在摇瓶中发酵酶活为6.9 U/m L。以突变体催化制备海藻糖的研究表明,当以0.3 g/m L麦芽糖为底物,初始反应p H为7.5,温度为50℃,加酶量为20 U/g麦芽糖时,转化率达到最高值62.0%,比天然酶高出13.0%。

关键词：嗜热栖热菌海藻糖合酶分子改造海藻糖

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重组Humicola insolens角质酶的高密度发酵优化

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中国生物工程杂志 2019年第1期39卷 63-70页

作者：黄燕孙益荣吴敬宿玲恰江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室无锡214122

在采用前期已构建的重组菌E. coli BL21(DE3)/pET20b(+)-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂... 详细信息

在采用前期已构建的重组菌E. coli BL21(DE3)/pET20b(+)-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为9. 8U/mg(NPB水解比活力为1 047. 6 U/mg),在卵黄平板出现了明显的反应圈现象。在此基础上尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略,以进一步提高重组酶在3L罐中的表达水平。优化后的最佳条件及结果为:OD_(600)为75时,恒速流加0. 8g/(L·h)的乳糖溶液,发酵24h后,酶活达到最大值4 788. 0U/ml,约为摇瓶发酵酶活的28倍,与OD_(600)为50时、流加0. 2 g/(L·h)进行诱导的发酵策略(酶活2 233. 0 U/ml)相比,提高幅度约为114. 0%,发酵时间缩短40. 0%。

关键词： Humicola insolens 角质酶磷脂酶活性高密度发酵

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重组谷氨酸脱羧酶制备γ-氨基丁酸的工艺条件优化

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生物技术通报 2016年第6期32卷 199-204页

作者：黄燕宿玲恰吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

谷氨酸脱羧酶,一种磷酸吡哆醛(PLP)依赖性酶,能专一、不可逆地催化L-谷氨酸脱羧得到γ-氨基丁酸(GABA)。构建了产Lactobacillus brevis WJH3谷氨酸脱羧酶重组大肠杆菌*** BL21(DE3)/p ET-24a-gad,以此作为菌种进行摇瓶发酵诱导培养,发... 详细信息

谷氨酸脱羧酶,一种磷酸吡哆醛(PLP)依赖性酶,能专一、不可逆地催化L-谷氨酸脱羧得到γ-氨基丁酸(GABA)。构建了产Lactobacillus brevis WJH3谷氨酸脱羧酶重组大肠杆菌*** BL21(DE3)/p ET-24a-gad,以此作为菌种进行摇瓶发酵诱导培养,发酵过程中一次性添加0.05 mmol/L PLP培养24 h,破壁上清酶活达81.7 U/m L,是不添加PLP对照酶活的1.8倍。对酶转化L-谷氨酸钠生成GABA反应条件进行了优化,结果表明,在转化体系不添加PLP的情况下,底物谷氨酸钠浓度为250 g/L,反应初始p H5.0,温度37℃,加酶量60 U/g底物,转速200 r/min,在此条件下反应18 h,GABA转化率达到100%,为γ-氨基丁酸的工业化生产奠定基础。

关键词：谷氨酸脱羧酶酶转化磷酸吡哆醛谷氨酸钠 γ-氨基丁酸

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非酶糖基化对α-synuclein分子构象的影响

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生物化学与生物物理进展 2008年第10期35卷 1202-1208页

作者：盛之玲刘延英陈岚赫荣乔中国科学院生物物理研究所北京100101 中国科学院研究生院北京100049 郑州大学医学院郑州450052

将纯化后的α-synuclein分别与果糖和葡萄糖孵育,通过内源荧光、非酶糖基化衍生物特征荧光、圆二色光谱以及电子显微镜等技术进行检测发现:α-synuclein与还原糖共同孵育后,308nm内源荧光强度明显降低,同时在447nm产生一个非酶糖基化衍... 详细信息

将纯化后的α-synuclein分别与果糖和葡萄糖孵育,通过内源荧光、非酶糖基化衍生物特征荧光、圆二色光谱以及电子显微镜等技术进行检测发现:α-synuclein与还原糖共同孵育后,308nm内源荧光强度明显降低,同时在447nm产生一个非酶糖基化衍生物特征荧光.与果糖孵育的蛋白质样品其非酶糖基化特征荧光的出现速度快于葡萄糖孵育样品.内源荧光与非酶糖基化特征荧光之间存在能量传递现象,提示Tyr残基与非酶糖基化特征荧光发色团在空间距离上彼此接近.圆二色光谱测定结果显示,α-synuclein与果糖孵育后,其α-螺旋含量增加.非酶糖基化的α-synuclein在电子显微镜下表现为短纤维状.非酶糖基化可以诱导α-synuclein蛋白分子聚集,且果糖较葡萄糖更容易使α-synuclein发生非酶糖基化.以上结果提示,非酶糖基化似乎可以导致α-synuclein在细胞内的错误折叠和分子聚集.

关键词：非酶糖基化 α—synuclein 分子构象特征荧光错误折叠分子聚集神经退行性疾病

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D-阿洛酮糖3-差向异构酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达及固定化细胞研究

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中国生物工程杂志 2018年第7期38卷 83-88页

作者：孙帆宿玲恰张康吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室无锡214122

将来源于Clostridium cellulolyticum H10的DPEase基因在食品级表达系统Bacillus subtilis中进行产酶研究,在3L发酵罐中高密度发酵最终酶活可达495U/ml,得到高表达量的DPEase酶液。通过硅藻土-海藻酸钠（吸附包埋法）对重组细胞进行固... 详细信息

将来源于Clostridium cellulolyticum H10的DPEase基因在食品级表达系统Bacillus subtilis中进行产酶研究,在3L发酵罐中高密度发酵最终酶活可达495U/ml,得到高表达量的DPEase酶液。通过硅藻土-海藻酸钠（吸附包埋法）对重组细胞进行固定化研究,结果表明,当海藻酸钠浓度为2%、细胞包埋量为50g/L、CaCl_2浓度为2%、硅藻土浓度为1%时,固定化细胞酶活回收率可达64%,固定化细胞与游离细胞相比最适pH不变,最适温度提高5℃,热稳定性明显提高,连续反应7个批次后转化率仍然为28%,仍保持81%的残余酶活,具有很高的工业应用价值。

关键词： D-阿洛酮糖3-差向异构酶枯草芽孢杆菌高密度发酵固定化细胞

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定向进化提高来源于Arthrobacter ramosus的MTHase的热稳定性

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生物技术通报 2021年第3期37卷 84-91页

作者：陈春宿玲恰夏伟吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltosyltrehalose hydrolase,MTHase)是以淀粉或麦芽糊精为底物制备海藻糖的关键酶之一。来源于Arthrobacter ramosus的MTHase,表达量好,比活高,但热稳定性差,限制了其工业化应用。采用定向进化技术,筛选得到L1... 详细信息

麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltosyltrehalose hydrolase,MTHase)是以淀粉或麦芽糊精为底物制备海藻糖的关键酶之一。来源于Arthrobacter ramosus的MTHase,表达量好,比活高,但热稳定性差,限制了其工业化应用。采用定向进化技术,筛选得到L137M和A216T两个突变体,在60℃下,野生型和两个突变体的半衰期(t1/2)分别为15.5、20.5和23.3 min,L137M和A216T的t1/2分别比野生型提高1.3和1.5倍。进一步考察了L137M、A216T和野生型酶在60℃分别和同样来源于Arthrobacter ramosus的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltosyltrehalose synthase,MTSase)复配制备海藻糖,在相同的加酶量下,野生型、L137M和A216T的海藻糖转化率分别为51.3%,52.6%和55.7%,两个突变体的转化率都比野生型提高,说明突变体提高的热稳定性有利于海藻糖的转化率。

关键词：热稳定性麦芽寡糖基海藻糖水解酶定向进化 Arthrobacter ramosus 海藻糖

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Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909麦芽寡糖基海藻糖合成酶在Bacillus subtilis中的重组表达和发酵优化

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生物技术通报 2017年第7期33卷 162-168页

作者：韩唱宿玲恰吴敬江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122

为实现Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909来源的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)基因tre Y在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的重组表达,以质粒p ET-24a(+)-tre Y为模板PCR扩增得到目的基因,并与表达载体pHY300PLK连接,转入表达宿主Bacillus subtilis CCTCC M 2016536中,重组菌在TB培养基中培养48 h后MTSase酶活达到17.5 U/m L;在此基础上对重组菌发酵条件进行优化,通过单因素实验(氮源种类、氮源复配、氮源浓度、碳源种类、葡萄糖浓度、初始pH、诱导温度)和正交实验(氮源浓度、葡萄糖浓度、初始pH、诱导温度)确定其摇瓶发酵产酶的最适培养基和培养条件为:氮源(工业蛋白胨∶棉籽粉=3∶1)48.0 g/L、葡萄糖为10.0 g/L、培养基初始pH为7.0,最适培养温度为30℃;在此条件下,MTSase的酶活可达41.5 U/m L,是优化前的2.4倍。

关键词：麦芽寡糖基海藻糖合成酶枯草芽孢杆菌重组表达发酵优化

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